【精品文献】尿液蛋白质定量测定方法及临床意义

【精品文献】尿液蛋白质定量测定方法及临床意义 论文范文 题目:尿液蛋白质定量测定方法及临床意义 编辑:司马小 【摘要】正常人尿液中含有微量的蛋白质,每天排出量在150mg以下,其中以白蛋白占多数,随不同病种有一定量的球蛋白和其它蛋白。随着肾病科研工作的开展,以观察患者每天排出蛋白质的量以示病情的变化,因此尿液蛋白质定量在临床上有实际应用价值,已成为医院化验室常规的检验项目。 【关键词】尿液蛋白质 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 1丽春红-S法 尿液标本中的蛋白质与丽春红-S染料混匀后一起被三氯醋酸沉淀～将沉淀物溶解于碱性溶液中～此时溶液呈紫色～显色深度与蛋白质浓度成正比。 1.1试剂 三氯乙酸-丽春红-S试剂原液:称取丽春红-S1.0g～加入到1000ml300g,L三氯乙酸中溶解。 三氯乙酸-丽春红-S试剂应用液:将原液用蒸馏水按1:10稀释～放置室温稳定数月。 蛋白定性试剂。0.2mol,L氢氧化钠溶液。 蛋白标准曲线:把定值蛋白稀释成不同的浓度～按操作测定其吸光度～以吸光度为横坐标～以稀释后的蛋白浓度为纵坐标绘制标准曲线。 1.2操作先做尿蛋白定性试验～以适当稀释标本。在试管中加入100μl标本～再加入1ml三氯乙酸一丽春红-S应用液～混匀后以3000r,min离心15分钟～吸去上清液～倒置于洁净滤纸上。在沉淀中加入0(2mol,L氢氧化钠溶液lml～用560nm波长测定其吸光度～查标准曲线的蛋白含量。 1.3参考值46.5〒18(1mg,L 1.4注意事项:尿液如被稀释应乘以稀释倍数。尿中血红蛋白含量>5mg,L时影响结果。离心后上清必须全部弃去～若沉淀中夹带有丽春红-S影响比色结果。 2双缩脲比色法 以磷钨酸乙醇溶液沉淀尿中的蛋白质～在碱性介质中蛋白质与铜离子形成紫红色络合物～与标准液比色即可得出尿中蛋白质的含量。 2.1试剂 蛋白沉淀液:称取磷钨酸7.5g～加入30ml蒸馏水、95,乙醇385ml、浓盐酸25ml。 双缩脲液:(1)称取枸橼酸钠34(6g～无水碳酸钠20g～加入120ml蒸馏水使其溶解,(2)称取硫酸铜3(46g～加入20ml蒸馏水使其溶解。将(1)、(2)混合～加入蒸馏水至200ml～备用。0(75mol,L氢氧化钠溶液。蛋白标准液(1(5g,L):称取150mg结晶型冻干人血清白蛋白～加入100ml的3g,L苯甲酸溶液溶解。 2.2操作取5ml24小时混合尿液～2500，3000r,min离心5分钟～取上清备检。混匀放入56?水浴15分钟～取出后离心～倾上清留沉淀。0(75mol,1 NaOH1(51(51(5 双缩脲液0(1 0(1 0(1 各管混匀置室温10分钟～在540nm波长～以空白管调“0”比色。 2.3结果计算尿蛋白含量(g,L)=测定管吸光度〔标准管吸光度〓1(5 2.4参考值<150mg,24h尿、 2.5注意事项:记录24小时尿量～将尿液混合后再离心。先做尿标本蛋白定性试验～若为阳性再做本试验。尿蛋白浓度较高时应稀释标本再操作。若疑有药物干扰时～可将尿蛋白沉淀物用无水乙醇洗涤3次 再操作。 3考马斯亮蓝法 在酸性介质中考马斯亮蓝与尿液中的蛋白质NH3+基团结合～发生由棕色到蓝色的颜色变化～光谱吸收峰由465nm移至595nm。与标准液相比即可测出尿蛋白质含量。 3.1试剂 考马斯亮蓝溶液:(1)称取75mg考马斯亮蓝G-250溶于40ml甲醇中,(2)加入蒸馏水800ml、85,的浓硫酸100ml、浓盐酸5ml,(3)称取30mg十二烷基磺酸钠～溶于(2)中,(4)加蒸馏水至1000ml～用滤纸过滤至棕色瓶中～室温保存。 蛋白标准液(1g/L)以3g/L苯甲酸溶液稀释蛋白质标准。 3.2操作 留取24小时尿标本混匀～取5ml尿液离心后取上清备检。室温放置5分钟～以空白管调“0”～波长600nm读取光密度。 3.3结果计算 尿蛋白质含量(g,L)=测定管吸光度〔标准管吸光度〓1(0 3.4参考值(20(6，172(6)mg,24h 3.5注意事项:考马斯亮蓝溶液要定期新鲜配制～过滤后才可使用。测定标本时应同时测定蛋白质标准管。尿中的水杨酸类药物、麝香草酚和去污剂等可产生颜色干扰。尿标本蛋白质定性试验在(+++)以上需稀释后测定。 4微量蛋白检验 尿液微量蛋白包括纤维蛋白降解产物、尿α1微球蛋白、尿α2微球蛋白、微量白蛋白等。 4.1纤维蛋白降解产物(fibrinogendegradationproducts～FDP)FDP是纤维蛋白(原)经纤溶酶作用降解的产物。其检测现多用免疫学方法:免疫胶乳凝集法和ELISA法。正常人尿液无FDP。当肾脏及尿路局部炎症时～其渗出的少量纤维蛋白经纤维蛋白溶解酶降解～产生FDP。当肾小球病变至肾小球滤过膜通透性增高时～FDP碎片排于尿中。血液FDP增高时～尿液FDP排泄也增多。 4.2α1-微球蛋白α1-微球蛋白(α1-microglobulin～α1-M)是一种小分子量糖蛋白～由肝脏与淋巴细胞合成～广泛存在于体液及淋巴细胞膜表面。血液中存在两种形式的α1-M～一种为游离形式～另一种为与IgA结合形式。前者易被肾小球滤过～几乎全部被肾小管重吸收和代 谢。检测方法多采用放射免疫法和ELISA法。 临床意义:单纯尿α1-M增加见于早期肾小管损害。血与尿中α1-M均增高多见于肾小管与肾小球功能障碍如慢性肾功能衰竭。尿中出现结合型α1-M提示肾小球滤过膜受损。 4.3β2-微球蛋白β2-微球蛋白(β2-microglobulin～β2-M)是一种小分子量单链多肽～是人类白细胞抗原I类抗原的轻链～经肾小球完全滤过～由肾近曲小管以胞饮方式摄取并降解为氨基酸～不返流入血液。 检测方法多采用放射免疫法和ELISA法～正常人尿液β2-M含量少(<0.2mg,L)。 临床意义:当肾小球滤过率下降或肾近曲小管损害时～血中β2-M增高,超过正常3倍时～尿中β2-M也增高。 4.4微量白蛋白微量白蛋白(microalbumin～M-alb)尿是肾病的早期征兆～是反映肾小球毛细血管壁通透性的指标。检测方法多采用放射免疫法和ELISA法。当尿液白蛋白浓度在30，300mg,24h(或20，200mg,L)时～用常规方法检测尿液蛋白仍为阴性。 临床意义:当尿常规试条检测蛋白为阳性时～此时白蛋白浓度已大于200mg,L～称为大量白蛋白尿。早期检测M-alb是监测肾脏病变的有效方法～尤其对糖尿病肾病的早期诊断具有重要价值。当白蛋白>300mg/24h时～糖尿病肾病的预后较差。另外～对于高血压患者～可以预示高血压病的发病率及死亡率。 5尿蛋白测定的临床意义 正常人终尿中的蛋白质含量很少～仅为30，130mg,24h。随机一次尿中蛋白质为0(80mg,L。当尿液中蛋白质超过正常范围时称为蛋白尿。 参考文献 戴慧莉,钱家麒,严玉澄.低分子量尿蛋白在原发性肾小球肾炎中的作用.上海第二医科大学学报,2003,23(5):4232426. 沈霞.电泳技术的现状和发展.中华检验医学杂志,2001,24(5):2632265. 赵绍林,吴惠毅,杨新玲,等.超薄琼脂糖凝胶的简易制备技术.临床检验杂志,2004,22(4):251. 沈霞,张敏华,汪萍,等.非浓缩尿蛋白电泳的临床应用.中华检验医学杂志,2001,24(5):266，268.