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蛋白质分离与提纯.doc

蛋白质分离与提纯

刘忘尘
2017-11-27 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《蛋白质分离与提纯doc》,可适用于综合领域

蛋白质分离与提纯一选材选材含量高来源方便细胞破碎机械法:玻璃匀浆器匀浆器材高速组织捣碎机物理法:反复冻融法超声波处理法案渗透压碎裂法二提取化学法:酶解法案表面活性剂处理法(粗品制备)分离细胞器差数离心法提取水溶液:稀盐溶液缓冲液有机溶液三分离沉淀法盐析法案有机溶剂法案等电点法案选择性变性(温度)(一)初分离:脱盐透析凝胶层析浓缩(蒸发超滤冷冻法等)(二)细分离:层析凝胶层析离子交换层析亲和层析吸附层析超离心电泳法三定量紫外吸收法Folin酚法(精确)双缩尿法凯氏定氮法(经典繁)染料法(简):酸性溶液中染料考马斯亮蓝G与蛋白质结合,吸收高峰由此及彼移至今nm指四化学鉴定电泳层析五干燥保存冷冻干燥真空干燥层析法简介:一凝胶层析原理:根据蛋白质分子量大小差,通过具有分子筛性质的凝胶而被分离葡聚糖凝胶卷Sephadex聚丙烯酰胺凝胶Biogel脂糖凝胶Sepharose二离子交换层析Ionexchangchromatography离子交换纤维素:以纤维素子为母体,可交换集团位于其表面,易与蛋白质交换阴离子交换纤维素:纤维素OCHCHN(CH)二乙氨基乙基纤维素阳离子交换纤维素:纤维素OCHCOOH缩甲基纤维素(CMC)阴离子交换纤维素不相识阳离子交换纤维素春蛋白质蛋白质亲和层析Affinitychromatographa原理:具有特异亲和力的化合物之间可逆结合与解离的性质亲和力:高度特异性:抗原与抗体裁酶与底物等特点:简单快速得率高纯度强固相载体抗体混合抗原洗脱纯化的抗原电泳法Electrophoresis原理:带电质点在电场中向其与自身带相反电荷的电极移动种类:纸电泳聚丙烯酰氨凝胶电泳(电荷效应浓缩效应分子筛效应)等电聚焦电泳:以两性电解质为支持物,电泳时即形成由正到负极逐渐增加的pH梯度,蛋白质在此系统中电泳各自集中在与其等电点相应的pH区域而达到分离的目的(分辨率高,蛋白质pI相差pH单位可分开)琼脂糖电泳离心法:利用物质的沉降系数密度浮力等差别而将其分开超离心法密度梯度离心:沉降系数取决于分子的大小和密度Densitygradientcentrifugation

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