【doc】 血浆Ca^2＋浓度对血小板聚集功能的影响

【doc】 血浆Ca^2＋浓度对血小板聚集功能的影响 血浆Ca ，浓度对血小板聚集功能的影响 ? 48? 适的骨移植材料是本治疗的一大特点.多孔骨无机材 OSS)是天然的具有骨引导作用的骨移植材料,与人 (BIO— 体骨的无机材料十分相似,其理化性质与人体骨组织基质 量非常相似,有助于与患者自体骨迅速整合,是极为理想 的根尖牙槽骨头的修复材料. 失败原因分析,非实验组病例失败率较高,其中主要 因素在于窦道的软组织破坏范围大,根尖区牙槽骨缺损量 过多,自身组织难以自行修复,最终因牙周支持组织过少 而导致牙齿松动拔除. 广州医药2005年第36卷第5期 参考文献: 1高翔,张小刚,赵云刚.86例牙周牙髓综合征的临床 分析.牙体牙髓牙周病杂志,2004,14(12):689-690 2唐昭,刘卫军人工骨材料修复后牙根尖周骨缺损疗 效观察.广东牙病防治,2000,8(2):109—110. 3刘敏川,陈娥,周学东.完善充填的经治根管失败原 因分析.国外医学?口腔医学分册,2003,30(4): 313.315. (收稿日期:2005—07—06) 血浆Ca2浓度对血小板聚集功能的影响 邓小燕林桢冯桂玲 广州市第二附属医院(510260) 【摘要】目的探讨不同Ca浓度对ADP诱导血小板聚集的影响.方法 在不同Ca浓度下,用比浊法测 定ADP诱导洗涤人血小板聚集百分率.结果ADP诱导血小板聚集作 用与外源性Ca2浓度相关.结论建立了ADP 诱导人洗涤血小板聚集反应时胞浆外Ca.的最适浓度. 【关键词】血小板血小板聚集钙 Effectofextracellularcalciumconcentrationonplateletsaggregation DengXiaoyanLinzhengFengGuilingtheSecondAfiliatedHospitalofGuangzhouMedwalCollege.Guangzhou,510260 【Abstract】 ObjectiveToobservetheeffectofextracellularcalciumconcentrationonADPinducedplateletsaggrega— tion.MethodsUnderdifferentconditionsofcalciumconcentration,studyADPreducedplateletsaggregateratioofwashed plateletsfromhumanswithturbidimetry.ResultsTheADPinducedplateletsaggregationhadaconsistrelationwithextracellu— larcalciumconentration.ConclusionsTheoptimumextracellularcalciumco ncentrationforADPinducedplateletsaggregation Wasestablished. 【Keywords】Platelet;Plateletaggregation;Calcium 血小板聚集功能检测对正确诊断疾病,指导临床用药 及判断预后均有重要的临床意义.临床上某些病人的血小 板数目减少,往往影响血小板的聚集功能,本文通过制备 浓缩洗涤血小板悬液,探讨不同Ca浓度对ADP(二磷酸 腙苷)诱导血小板聚集的影响,从而建立了浓缩洗涤血小 板聚集试验的最适胞浆外ca浓度,使低血小板患者在进 行血小板聚集试验时能最大限度的保证聚集试验时血小板 的数量. 1材料与及方法 1.1一般材料 (1)试剂:(1)OBS缓冲液:巴比妥钠1.155g,氯 化钠1.467g溶于蒸馏水156ml中,加0.Imol/L盐酸溶液 43rn1,调整pH值至7.35,理加生理盐水800ml. (2)ADP美国Sigma公司产品,用OBS配制成1 mmoVL储存于-40%,临用前OBS缓冲液稀释成5,10, 20,25,30umol/L,0.5mmol/L和lmmol/L. (3)无钙清洗液:8.48gNaCI,0.37gKCI,0.25g MgSO4?7H2O,1.98g葡萄糖,2.38gHEPES,0.9g apyrase,PH凋至7.40.(4)Tyrode缓冲液:NaCI140, KCI3,HEPES10,葡萄糖10,(单位mmol/L),PH7.4. (2)仪器:LBY—NJ2四通道血小板聚集仪:北京普利 生公司.SysmexKX-21血细胞计数仪:日本东亚公司. 1.2对象:健康在校大学生38例,年龄20,24岁,经一 般血液学检查及血栓止血实验,即血小板计数215?65× 10/L,部分凝血活酶时间(AP1Tr)25.77?4.76S,凝血 酶原时间(frr)l2.48?1.94S,纤维蛋白原(rg)3.82? 1.00g/L及血常规18项,检查结果均在正常范围,排除肝 肾疾病及糖尿病,近2周未服任何药物. 1.3方法:(1)静脉采血9rnl,按9:1比例加入109 mmol/L枸橼酸钠充分抗凝,以500r/min离心5min,分离 广州医药2005年第36卷第5期 富含血小板血浆(PRP),加入终浓度0.9g/Lapyrase(防 止血小板激活)后再离心(2000r/min)10分钟分离得血 小板,用无钙清洗液5,8ml洗涤一次,用不同浓度的 ca”而无Mg”的Tyrode缓冲液配成(200,300)×10/L 血小板悬浮液.(2)PRP用量为300ul,ADP30ul, ADP的终浓度为25umol/L.用比浊法在LBY.NJ2四通道 血小板聚集仪上进行不同浓度的ca”对ADP诱导血小板聚 集的百分率检测. 2结果 2.1不同浓度ADP对血小板聚集的影响见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1. 表1不同浓度ADP血小板聚集功能结果 ADP剂量(Ixmol/L)最大聚集百分率(%) 16.35?7.20 26.69?5.20 36.93?7.97 63.82?15.62 69.28?6.96 75.94?5.76 82.64?6.12 由表看出,ADP浓度与血小板聚集呈明显的剂量依赖 关系,聚集百分率随着ADP剂量的增加而增加,ADP最适 浓度是25umol/L. 2.2对51例正常健康体检者,年龄19,54岁,排除肝肾 疾病及糖尿病,血小板计数在196?48×10/L,近2周未 有任何服药史.以25umol/LADP诱导血小板聚集试验, 制定本实验室的正常参考范围是53.18?15.62(%). 2.3Ca”对ADP诱导血小板聚集的影响见表2. 表2Ca”对ADP诱导血小板聚集的影响(?s) 离子浓度(mmol/L)血小板聚集(%) 17.91?8.68 70.41?9.30 66.15?10.32 64.05?7.20 与对照组比较P<0.Ol 3讨论 3.1确立ADP诱聚剂的最佳反应浓度是25umol/L: 不同剂量ADP(5,10,20,25,30umol/L,0.5,1 mmol/L)与血小板聚集百分率呈明显的剂量依赖性,且随 浓度的增大,其聚集百分率也相应增大.由表1可见,正 常聚集标本最适合的ADP反应浓度是25umol/L,对于高 聚集状态的患者可适当选择5umol/L或10umol/L两种反 ? 49? 应浓度. 3.2正常参考范围的确立: 我们采取ADP最适浓度25umol/L,对51例正常健康 体检者进行血小板聚集试验的测定,经统计学处理,建立 本实验室的正常参考范围是63.82?15.62(%). 3.3血小板聚集反应的最佳钙离子浓度是2mmol/L: 血小板聚集主要影响因素如下:(1)纤维蛋白原受体 GPIIb/?a(2)Ca”浓度(3)纤维蛋白原.本文仅就 Ca”浓度对ADP诱导的人洗涤血小板聚集的影响进行了探 讨,本实验证实了ADP诱导血小板聚集有赖于胞浆ca”的 浓度,我们把洗涤人血小板悬浮于不同ca”浓度而无 Mg的Tyrode缓冲液中,在无Ca”,Mg的Tyrode缓冲 液中血小板仍有聚集,只有是聚集的程度低于含ca”无 Mg”的血小板悬浮液.这是因为在静息状态下每个血小板 表面约有5000个GPIIb/?a分子参与血小板聚集反应,而 在钙离子的参与下血小板新合成的GPIIb在成熟前与GP? a以1:1的比例组成二聚体复合物在血小板膜表面表达增 加,从而使血小板聚集反应增强J.本文显示,当血小板 胞浆外Ca”浓度达到2mmol/L时,ADP诱导血小板聚集 的百分率最大,故而,在洗涤人血小板悬浮时最佳的复钙 浓度是2mmol/L.此外,血小板聚集试验还与血小板数 目,温度,PH,抗凝比例及时间等有关,临床上常遇到低 血小板的病人,按常规的离心分离PRP常常不能满足聚集 反应的条件,为了克服由于血小板数量的不足所引起的血 小板聚集试验的影响,往往需要浓缩血小板使达到聚集试 验所要求的浓度范围(200—300)×10/L,由于血小板生 存时间短,易于被激活和破坏,因此保持其正常的生物学 活性是十分重要的.我们在洗涤液中添加了焦磷酸酶 (apyrase),从而抑制了血小板的激活. 由于比浊法检测血小板聚集的试验受影响因素很多, 难于进行质量控制,在有条件的单位建议用流式细胞术进 行血小板的膜糖蛋白表达的检测. 参考文献: 1王俊玫,从玉隆.血小板激活时其胞质内钙离子变化的 测定.中华医学检验杂志,1997,20(2):84-86. 2李家增,王鸿利,韩忠朝.血液实验学.上海:上海科 学技术出版社,1997.308.310. 3汪钟.现代血栓病学.北京医科大学协和医科大学联 合出版社,1996 4MustarJF,PerryDw,ArdlieNG,eta1.PreparationofSUS— pensionsofwashedplateletsfromhumans.BrJHaemato1. 1972,22:193. 5李珉珉.流式细胞术检测血小板功能及临床应用.中华 医学检验杂志,1999,22(3):182.184. (收稿日期:2005—04—22) m加???5O