3 粗蛋白测定

和实中润饲料有限公司羽毛粉项目技术部 作业指导书 文件编号: HSZR-12-08 第1版 第0次修订 粗蛋白的测定 颁布日期:2012.08.09. 三 饲料中粗蛋白的测定 1 适用范围 本 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料中粗蛋白含量的测定。 2 原理 凯氏定氮法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。 3 试剂 3.1 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； 3.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水，6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀； 3.3 氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）； 3.4 硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）； 3.5 混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月； 3.6 盐酸 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 溶液：基准无水碳酸钠法标定； 3.6.1盐酸标准溶液0.1mol/L：8.3mL盐酸注入1000mL蒸馏水中。 3.6.2盐酸标准溶液0.02mol/L：1.67mL盐酸注入1000mL蒸馏水中。 3.7 蔗糖：分析纯； 3.8 硫酸铵：分析纯，干燥； 3.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。 4 仪器设备 4.1 实验室用样品粉碎机或研钵； 4.2 分样筛：孔径0.45 mm(40目)； 4.3 分析天平：感量0.0001 g； 4.4 消煮炉或电炉； 4.5 滴定管：酸式，10、25 mL； 4.6 凯氏烧瓶：250 mL； 4.7 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式； 4.8 锥形瓶：150、250 mL； 4.9 容量瓶：100 mL； 4.10 消煮管：250 mL； 4.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。 5 分析步骤 5.1半微量法 5.1.1试样的消煮 称取试样0.2～0.5g（玉米、小麦称0.5g；豆粕称0.3g；鱼粉羽毛粉称0.2g；精确至0.0002g），放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热40min，消化全过程至少2h。 5.1.2 氨的蒸馏（半微量法） 将试样消煮液冷却，加入20 mL蒸馏水，转入100 mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20 mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20 mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加氢氧化钠密封，防止漏气。蒸馏4 min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1 min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 5.1.3 滴定 用上述蒸馏法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 5.2 推荐法(全量法) 5.2.1试样的消煮 称取试样0.2～0.5g（玉米、小麦称0.5g；豆粕称0.3g；鱼粉羽毛粉称0.2g；精确至0.0002g），放入消化管中，加2片消化片（硒粉和硫酸钾混合物市场上有成品）或6.4g混合催化剂，15 mL硫酸，于420℃下在消化炉上消化至呈现蓝色时继续消化40min。取出冷却后加入30 mL蒸馏水。 5.2.2 氨的蒸馏 采用全自动定氮仪时，按仪器本身常量程序进行测定。 采用半自动定氮仪时，将带消化液的消化管插在蒸馏装置上，以25 mL硼酸为吸收液，加入2滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入50 mL氢氧化钠溶液进行蒸馏。吸收液体积达到150 mL时，降下锥形瓶，继续蒸馏至约吸收液体积180mL时停止蒸馏，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。 5.2.3 滴定 用0.1 mol/L的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 6 空白测定 称取蔗糖0.5g，代替试样，进行空白测定，消耗0.1 mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2 mL。 7 分析结果的计算和 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 述 计算见下式（3）： …………………………（3） 式中：V2──滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL； V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； c──盐酸标准溶液浓度，mol/L； m──试样质量，g； V──试样分解液总体积，mL； V＇──试样分解液蒸馏用体积，mL； 0.0140──与1.00mL盐酸标准液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的、以克表示的氮的质量。 6.25──氮换算成蛋白质的平均系数。 8 重复性 当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为1%。 当粗蛋白质含量在10%～25%之间时，允许相对偏差为2%。 当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。 9 注意事项 9.1 半微量法测定注意事项 9.1.1消化时凯氏烧瓶应置于通风橱处进行。 9.1.2蒸馏时蒸馏烧瓶中要加入几颗玻璃珠防止爆沸。 9.1.3蒸馏时蒸馏烧瓶的口上要插入一根玻璃管，玻璃管的下端要伸入蒸馏水的液面以下。 9.1.4加碱时完要立即用玻璃塞塞好，且在入口处加氢氧化钠密封。 9.1.5半微量蒸馏装置在使用之前要检查是否漏气。 9.2 推荐法注意事项 9.2.1消化要在通风橱中进行。 9.2.2定氮仪不能漏气。 10 结果准确度的保证和 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 10.1 结果准确度的保证 10.1.1如果是新的可调节电炉可适当调节其温度，消化时间据实际情况而定。 10.1.2每次做空白试验较正装置。 10.1.3定期做测定回收率实验 具体方法：精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，选半微量法或推荐法“氨的蒸馏”中的步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。 10.1.4蒸馏后的液体不能放置太长时间，要及时滴定。 10.1.5消化温度应控制在400℃～420℃内。消化器控温器应良好，电阻丝应使用专用配套电阻丝，拉伸应均匀，使炉内温度均匀。 10.1.6蒸馏完毕应先取下接收瓶，然后再关闭电源，以免酸液倒流。 10.2 准确度的评价 10.2.1测定回收率 10.2.1.1加硫酸铵检测回收率，如果合格，说明蒸馏装置不漏气和盐酸标准溶液溶液标定正确。具体方法见10.1.3定期测回收率实验。 10.2.1.2用已知含氮量的样品标准物（如含氮量在1.30%～1.40%之间的玉米粉）用半微量法或推荐法测定其含氮量，和标准物质含氮量进行比对，要求测定结果在要求范围之内。此方法可以评价整个过程的准确度。 10.2.2实验室比对 和国家认证的实验进行同样品实验数据比对。此方法可以评价整个过程的准确度。 和实中润饲料有限公司羽毛粉项目技术部 HSZR-12-08 _1234567890.unknown