苍耳子对大鼠肝脏毒性作用的代谢组学研究(1)

药物不良反应杂志 2011 年 10 月第 13 卷第 5 期 ADRJ，October 2011，Vol 13． No． 5 ·论著· * 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30873435) ＊＊通信作者:刘树民，男，教授，博士生导师，Tel:(0451)82196181，E-mail:lsm@ hljucm． net 苍耳子对大鼠肝脏毒性作用的代谢组学研究* 曹敏1 武斌1 马丁1 白宇1 刘树民1，2＊＊ (1 黑龙江中医药大学中医药研究院，哈尔滨 150040;2 黑龙江中医药大学北药基 础与应用研究省部共建教育部重点实验室，哈尔滨 150040) 摘要 目的:观察苍耳子对大鼠尿液代谢轮廓、整体表征和血液生化指标等的影响，探讨代谢组学方法在中药毒性评价中的 作用。方法:用随机数字表法将 30 只雄性 Wistar大鼠分为苍耳子低剂量组、高剂量组和对照组，每组 10 只。苍耳子低剂量和 高剂量组大鼠分别经灌胃给予一定容量的含苍耳子水提取液(相当于生药 1． 05 和 21． 0 g /kg) ，1 次 /d，共 28 d;对照组给予同 体积 0． 9%氯化钠溶液。给药期间观察大鼠体重、被毛、运动及精神状态的改变;给药前和给药 7、14、21、28 d检测血清丙氨酸 转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平，收集 24 h尿液，用超高效液相色谱 /飞行时间质谱方法测定大鼠尿液代谢轮廓 和整体表征。结果:苍耳子高剂量组大鼠在给药期间陆续出现被毛光泽度下降、脱毛、活动量和摄食量减少、反应迟钝等现 象。苍耳子低剂量组仅 2 只大鼠在给药 28 d后表现为少动喜卧，被毛光泽度下降。苍耳子高剂量组大鼠给药 21 和 28 d时体 重均明显低于苍耳子低剂量组(P ＜ 0． 05)和对照组(P ＜ 0． 01) ，苍耳子低剂量组与对照组大鼠体重在各时间段的差异均无统 计学意义(均 P ＞ 0． 05)。苍耳子高剂量组大鼠给药 21 d时的 ALT、AST水平［(42． 9 ± 3． 9)U/L、(107． 9 ± 12． 7)U/L］明显高 于低剂量组［(33. 8 ± 4． 4)U/L、(95． 8 ± 16． 6)U/L］和对照组［(31． 8 ± 4． 4)U/L、(93． 5 ± 15． 8)U/L］，差异均有统计学意义 (均 P ＜ 0. 05) ，给药 28 d时苍耳子高剂量组血清 ALT、AST水平达峰值。苍耳子低剂量组不同给药时间血清 ALT、AST水平与 对照组比较差异均无统计学意义(均 P ＞ 0． 05)。苍耳子高剂量组给药第 7、14、21、28 天 24 h 尿液代谢物表型的聚类分布均 偏离对照组，且随给药时间的延长而增大。苍耳子低剂量组给药第 7、14、21 天 24 h 尿液代谢物表型的聚类分布位于对照组 附近且与对照组有部分重叠，给药 28 d时出现单独聚类。结论:用代谢组学方法检测苍耳子肝毒性灵敏度较高，可用于评价 中药的毒性反应。 关键词 苍耳子;肝毒性;代谢组学 中图分类号: R 286 文献标识码: A 文章编号: 1008-5734(2011)5-0287-07 Metabolomics study on Fructus Xanthii-induced hepatotoxicity in rats Cao Min1，Wu Bin1，Ma Ding1，Bai Yu1，Liu Shumin1，2 (1Research Institute of Chinese Medicine，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China;2Key Laboratory of Chinese Materia Medica，Heilongjiang University of Chinese Medicine， Ministry of Education，Harbin 150040，China) ABSTRACT Objective:To observe the effects of Fructus Xanthii on urinary metabolic profile and overall characterization and blood biochemical indicators in rats in order to explore the application of metabolomics method in evaluation of toxicity in traditional Chinese medicine． Methods:Thirty male Wistar rats were divided into the low-dose group，the high-dose group，and the control group using random-digital table method，each group comprised 10 rats． The rats in the low-dose and high-dose groups were gavage-fed a certain volume of suspension containing aqueous extract of Fructus Xanthii (equivalent to crude drug 1． 05 and 21． 0 g /kg)once daily for 28 days，respectively． The rats in the control group were gavage-fed the same volume of 0． 9% sodium chloride solution． The changes in body weight，coat，movement and mental status in rats were observed during the drug administration． The serum levels of ALT and AST were measured before drug administration and 7，14，21，and 28 days after drug administration，respectively． A 24-hour urine sample of each rat was collected and the metabolic profiles and the overall characterization were determined using ultra-high performance liquid chromatography / time of flight mass spectrometry． Results:The rats in the high-dose group developed lusterless fur，depilation， decrease in food ingestion and activities，and unresponsiveness during the drug administration． Only 2 rats in the low-dose group developed lassitude and lusterless fur 28 days after drug administration． Twenty-one and 28 days after drug administration，the body weight of rats in the high-dose group were markedly lower than that in the low-dose group (P ＜ 0． 05)and the control group (P ＜ ·782· 药物不良反应杂志 2011 年 10 月第 13 卷第 5 期 ADRJ，October 2011，Vol 13． No． 5 0. 01) ，but the differences in body weight between the low-dose group and the control group was not statistically significant in each time point (all P ＞ 0． 05)． Twenty-one days after drug administration，the levels of ALT and AST in the high-dose group［(42． 9 ± 3． 9) U/L，(107． 9 ± 12． 7)U/L］were markedly higher than those in the low-dose group［(33． 8 ± 4． 4)U/L，(95． 8 ± 16． 6)U/L］and the control group［(31． 8 ± 4． 4)U/L，(93． 5 ± 15. 8)U/L］，the differences were statistically significant (all P ＜ 0． 05)． Twenty-eight days after drug administration，ALT and AST in the high-dose group reached peak levels． There was no statistically significant difference in ALT and AST levels between the low-dose group and the control group in each time point (all P ＞ 0． 05)． The distributions of 24-hours’urine metabolite phenotypic clustering 7，14，21 and 28 days after drug administration in the high-dose group were deviated from the control group，and the deviation increased with the prolonged drug administration． The distributions of 24- hours’urine metabolite phenotypic clustering 7，14 and 21 days after drug administration in the low-dose group were near and partly overlapped with those of the control group，but a single cluster appeared 28 days after drug administration． Conclusion:The metabolomic method has higher sensitivity in detection of Fructus Xanthii-induced hepatotoxicity and might be used in the toxicity evaluation of traditional Chinese medicine． KEY WORDS Fructus Xanthii;hepatotoxicity;metabonomics 苍耳子(Fructus Xanthii)为菊科植物苍耳 (Xan- thium sibirium Patr．)的带总苞果实，是中医临床治 疗鼻渊头痛的要药［1］，但具有一定的肝毒性［2］。以 往对苍耳子肝毒性的研究多以动物模型的生化和组 织病理学改变为检测指标，上述方法在灵敏度和特 异性上的欠缺在一定程度上制约了对苍耳子肝毒性 机制的深入研究［3］。代谢组学技术可通过检测体液 中某些有特殊意义的微量代谢物质随时间变化的规 律，区分不同的代谢状态及代谢物的变化轨迹，并可 根据不同的代谢表型区分出不同的外源性化合物对 机体的作用方式，反映病理生理过程中发生的系列 生物事件［4-5］。近年来代谢组学技术已被应用于中 药安全性及毒性作用机制研究［6］，其中尿液代谢组 学分析可动态跟踪药物作用后尿液变化的发生发展 过程及恢复情况，发现潜在的损害靶点，是一种适合 中药研究的科学手段。我们在前期工作［7］的基础 上，以苍耳子致肝损伤模型大鼠为研究对象，观察了 苍耳子对模型大鼠尿液代谢轮廓和整体表征的影 响，以期为进一步探讨苍耳子致肝毒性的机制及筛 选毒性生物标志物提供实验依据和技术手段。 1 材料与方法 1． 1 主要材料 1． 1． 1 苍耳子 产自黑龙江，购于黑龙江省哈尔滨 市医药药材总公司，经黑龙江中医药大学中医药研 究院鉴定为菊科植物苍耳的成熟带总苞果实。取苍 耳子生品(未去刺) ，称重并适当粉碎，加 10 倍量水 浸泡 1 h，加热煎煮 2． 5 h 取出，用 8 层纱布过滤后， 药渣内加入 8 倍量水，再煎煮 2 h，取出用 8 层纱布 过滤。合并煎煮液，60 ℃水浴下浓缩至每毫升药液 含 1 g生药量，置真空干燥箱(60 ℃、－ 85 kPa)中干 燥至恒重，粉碎后过 80 目筛得到提取物细粉(固形 物提取率为 12%)。临用时加蒸馏水稀释成实验所 需不同浓度的溶液。 1． 1． 2 主要试剂 乙腈(色谱级，德国 MERCK 公 司) ;屈臣氏蒸馏水;甲酸(色谱级，美国霍尼韦尔公 司) ;脑啡肽(美国 Sigma 公司) ;丙氨酸转氨酶 (ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒(上海亚培生 物科技有限公司)。 1． 1． 3 主要仪器 Waters AcquityTM UPLC 超高效 液相色谱仪(美国 Waters 公司) ;Waters LCT Premier XE TOF-MS飞行时间质谱仪(美国 Waters 公司) ; MassLynx V4． 1 工作站(美国 Waters 公司) ;KDC- 160HR高速冷冻离心机(科大创新股份有限公司中 佳分公司) ;BS 124S 型电子天平(北京赛多利斯仪 器系统有限公司) ;KQ-50B 超声波清洗器(昆山市 超声仪器有限公司) ;HFU 566 Basic超低温冰箱(德 国赛默飞世尔科技有限公司)。 1． 2 动物与分组 Wistar大鼠，雄性，清洁级，体重(200 ± 20)g，购 自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号: SCXK京 2007-0001。饲养地点:黑龙江中医药大学 药物安全性评价中心屏障系统实验室。饲养条件: 12 h光照、12 h 避光循环饲养，室内温度为(22 ± 1)℃，相对湿度为 40% ～ 50%，饲喂 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 饲料和饮 用水。实验前将大鼠置于代谢笼(苏州市冯氏实验 动物设备有限公司)中，每只大鼠单笼正常饲养 1 周，以适应环境。 取 30 只雄性 Wistar大鼠，按随机数表法分为对 照组、苍耳子低剂量组和高剂量组(分别为临床常用 量的 1 和 20 倍量［7］) ，每组 10 只。低、高剂量组分 别灌胃给予生药量为 1． 05 和 21． 0 g /kg的苍耳子水 提取物混悬液，1 次 /d，连续 28 d;对照组给予相同 ·882· 药物不良反应杂志 2011 年 10 月第 13 卷第 5 期 ADRJ，October 2011，Vol 13． No． 5 体积的 0． 9%氯化钠溶液，1 次 /d，连续 28 d。 1． 3 检测指标及方法 1． 3． 1 体重 给药前和给药第 7、14、21、28 天用电 子天平称量各组大鼠体重。 1． 3． 2 生化指标 给药前和给药第 7、14、21、28 天 称量体重后经尾静脉取血，由黑龙江中医药大学附 属第一医院检验科协助检测血清 ALT和 AST水平。 1． 3． 3 尿样检测 给药前及给药第 7、14、21、 28 天，用代谢笼法收集每只大鼠 24 h尿液并置冰箱 保存。尿液样品于 4 ℃、13 000 r /min 离心 15 min， 取上清液过 0． 22 μm 微孔滤膜，在低温储藏仓中进 UPLC /TOF-MS分析。 色谱柱:ACQUITY UPLCTM BEH C18 色谱柱， 1． 7 μm，50 mm × 2． 1mm，流速 0． 40 ml /min，柱温 40 ℃，样品仓温度 4 ℃;流动相 A、B 分别为 0． 1% 甲酸-乙腈溶液和 0． 1% 甲酸-水溶液，进样体积 2 μl。样品不经紫外检测器直接导入质谱系统检 测，梯度洗脱程序见表 1。 表 1 超高效液相色谱梯度洗脱程序表 Tab 1 Procedures of gradient elution by UPLC 时间 (min) 流速 (ml /min) 流动相 A(%) 流动相 B(%) 曲线 0 0． 40 2 98 6 2． 0 0． 40 8 92 6 5． 0 0． 40 15 85 6 8． 0 0． 40 35 65 6 8． 5 0． 40 50 50 6 11． 0 0． 40 99 1 6 12． 0 0． 40 99 1 6 12． 5 0． 40 2 98 6 质谱条件:电喷雾离子源(ESI) ，采用正负离子 扫描检测，毛细管电压 1500 V(ESI + )/1800 V (ESI －) ，样本锥孔电压 100 V，脱溶剂温度 350 ℃， 离子源温度 110 ℃，脱溶剂气流量 700 L /h，锥孔气 流量 20 L /h;微通道板电压 2500 V，扫描时间 0． 2 s。 锁定质量溶液，采用美国Waters公司 Lockspray校正 系统进行在线质量校正。亮氨酸脑啡肽准分子离子 峰［M + H］+ 556． 2771，［M － H］－ 554． 2615，锁定质 量浓度为 200 pg /ml。扫描方式为全扫描，质量扫描 范围为质荷比(m/z)100 ～ 1000。 数据处理:采用MarkerLynx XP软件进行色谱峰 的识别和匹配分析，并用主成分分析和偏最小二乘 判别分析方法对多维复杂数据进行降维和回归校正 预测分析。 1． 4 统计学方法 采用 SPSS 18． 0 软件进行统计学处理。计量资 料符合正态分布者用 珋x ± s表示，组间比较采用多因素 方差分析和 t检验，以 P ＜0． 05为差异有统计学意义。 2 结果 2． 1 大鼠一般情况和体重变化 苍耳子高剂量组大鼠给药 7 d 后被毛光泽度下 降;14 d 后出现摄食量减少，少动喜卧，被毛色泽枯 黄;21 d 后精神萎靡，活动量和摄食量均显著减少， 对外界刺激反应缓慢;28 d后有 6 只大鼠出现呆滞、 倦怠、竖毛、脱毛，少动，反应迟钝等表现。苍耳子低 剂量组大鼠给药 7、14 和 21 d 时外观与活动均无明 显变化，仅在给药 28 d 后有 2 只大鼠出现少动喜 卧、被毛无光泽等症状。对照组大鼠被毛和活动情 况无明显改变。苍耳子高剂量组大鼠给药 21 和 28 d 时的体重均明显低于低剂量组(P ＜ 0． 05)和对 照组(P ＜ 0． 01) ，苍耳子低剂量组与对照组大鼠体 重差异无统计学意义(表 2)。 2． 2 大鼠血液生化指标变化 苍耳子高剂量组大鼠给药21 d时 ALT、AST水平 明显升高(与给药前比较 P ＜0． 05) ，给药 28 d时达峰 值(与给药前比较 P ＜0． 01) ，与苍耳子低剂量组和对 照组同时点比较，差异均有统计学意义(21 d 均 P ＜ 0． 05;28 d 均 P ＜ 0． 01) ;苍耳子低剂量组各时点血 清 ALT、AST 水平与给药前相比差异均无统计学意 义，与对照组相比差异也均无统计学意义(表 3)。 表 2 给药前后 3 组大鼠体重的变化(g，珋x ± s) Tab 2 Changes in body weight of rats in the 3 groups before and after drug administration (珋x ± s) 组别 鼠数 给药前 给药 7 d 给药 14 d 给药 21 d 给药 28 d 对照组 10 199． 8 ± 4． 4 222． 5 ± 4． 7 244． 3 ± 5． 8 262． 8 ± 7． 8 281． 9 ± 8． 9 苍耳子低剂量组 10 201． 5 ± 5． 7 220． 1 ± 5． 3 240． 9 ± 6． 9 258． 2 ± 8． 3 276． 7 ± 10． 3 苍耳子高剂量组 10 203． 5 ± 4． 5 221． 4 ± 5． 9 236． 9 ± 9． 2 246． 7 ± 13． 5a 250． 3 ± 14． 4b 注 与对照组和低剂量组比较，aP ＜ 0． 05，bP ＜ 0． 01 ·982· 药物不良反应杂志 2011 年 10 月第 13 卷第 5 期 ADRJ，October 2011，Vol 13． No． 5 表 3 给药前后 3 组大鼠血清 ALT和 AST水平变化(珋x ± s) Tab 3 Changes in ALT and AST levels of rats in the 3 groups before and after drug administration(珋x ± s) 组别 鼠数 给药前 给药 7 d 给药 14 d 给药 21 d 给药 28 d ALT (U /L) 对照组 10 27． 8 ± 1． 6 27． 9 ± 4． 3 30． 6 ± 4． 8 31． 8 ± 4． 4 33． 5 ± 5． 8 苍耳子低剂量组 10 26． 9 ± 2． 8 29． 2 ± 4． 6 32． 3 ± 4． 3 33． 8 ± 4． 4 34． 3 ± 5． 2 苍耳子高剂量组 10 28． 5 ± 2． 4 31． 6 ± 5． 7 36． 1 ± 6． 4 42． 9 ± 3． 9 a，c，e 49． 9 ± 6． 2b，d，f AST (U /L) 对照组 10 88． 5 ± 7． 2 88． 9 ± 14． 7 92． 4 ± 11． 5 93． 5 ± 15． 8 93． 9 ± 18． 4 苍耳子低剂量组 10 91． 4 ± 6． 8 93． 1 ± 12． 3 95． 3 ± 15． 6 95． 8 ± 16． 6 96． 4 ± 15． 7 苍耳子高剂量组 10 91． 9 ± 8． 1 96． 8 ± 14． 2 101． 9 ± 15． 3 107． 9 ± 12． 7a，c，e 121． 7 ± 16． 8b，d，f 注 ALT:丙氨酸转氨酶;AST:天冬氨酸转氨酶;与对照组比较，aP ＜ 0． 05，bP ＜ 0． 01;与苍耳子低剂量组比较，cP ＜ 0． 05，dP ＜ 0． 01;与苍耳 子高剂量组给药前比较，eP ＜ 0． 05，fP ＜ 0． 01 注 1 ～ 16:离子峰号 图 1 正离子扫描模式下 3 组大鼠尿液代谢产物的 UPLC-TOF /MS BPI轮廓图 Fig 1 UPLC-TOF /MS BPI profiles of urine metabolites of rats in the 3 groups by positive ion scanning 2． 3 大鼠尿液代谢轮廓和整体表征 2． 3． 1 尿液代谢轮廓 3 组大鼠尿液的 UPLC- TOF /MS BPI轮廓图显示，与对照组比较，苍耳子低 剂量组和高剂量组大鼠尿液代谢轮廓均发生了不同 程度的变化。在正离子扫描模式、相同保留时间情 况下(图1) ，苍耳子高剂量组1、3、5、6、7号离子峰 ·092· 药物不良反应杂志 2011 年 10 月第 13 卷第 5 期 ADRJ，October 2011，Vol 13． No． 5 注 1 ～ 10:离子峰号 图 2 负离子扫描模式下 3 组大鼠尿液代谢产物的 UPLC-TOF /MS BPI轮廓图 Fig 2 UPLC-TOF /MS BPI profiles of urine metabolites of rats in the 3 groups by negtive ion scanning 强度较对照组明显增强，2、4、8、9、10 号离子峰明显 减弱，同时出现了 11、12、13、14、15、16 等新的离子 峰;苍耳子低剂量组仅 1、4、6、8、9、10 号离子峰强度 出现轻微变化。在负离子扫描模式、相同保留时间 情况下(图2) ，苍耳子高剂量组2、3、4、6号离子 峰强度明显强于低剂量组与对照组，7、8、9号离 子峰强度明显弱于低剂量组与对照组，10号离子 峰消失，保留时间为 9 ～ 10 min 的离子峰强度明显 弱于对照组;苍耳子低剂量组 1、2、3、6、7 号离子峰 强度略强于对照组，8、9、10 号离子峰强度稍有 减弱。 2． 3． 2 尿液代谢整体表征 对 3 组大鼠给药第 28 天 24 h尿液的代谢指纹数据进行降维聚类分析的 结果表明，在正、负离子扫描模式下，3组大鼠尿液 代谢物图谱在各自组内相似度较好，相对凝聚集中。 组间相似度较差，相互离散。在同一判别标准下不 同组别呈现各自聚类现象，苍耳子低剂量组聚类位 于对照组附近且与对照组存在部分重叠，而苍耳子 高剂量组远离对照组，相对位移较大(图 3)。 对 3 组大鼠给药第 7、14、21、28 天 24 h 尿液主 成分分析的结果显示，苍耳子高剂量组 4 个时间段 的 24 h尿液代谢轮廓均偏离对照组，且聚类中心与 对照组的相对位移随给药时间的延长而增大，其运 动轨迹从对照组聚类附近的象限区域逐渐向远离对 照组的区域移动(图 4)。而苍耳子低剂量组大鼠给 药第 7、14、21 天 24 h 尿液代谢物在正、负离子扫描 下均表现为聚类混淆，但在给药第 28 天变为独自聚 类明显(图 5)。 ·192· 药物不良反应杂志 2011 年 10 月第 13 卷第 5 期 ADRJ，October 2011，Vol 13． No． 5 注 A:正离子模式;B:负离子模式;■K:对照组;◆L:苍耳子低剂量组;▲H:苍耳子高剂量组 图 3 3 组大鼠 24 h尿液代谢物超高效液相-飞行时间质谱图谱主成分分析得分图 Fig 3 Principal component analysis score plot of UPLC-TOF /MS metabolite fingerprints of 24-hour rat urine in the 3 groups 注 A:正离子模式;B:负离子模式;●K:对照组;▽ H-7:给药 7 d;◆H-14:给药 14 d;▲H-21:给药 21 d;■H-28:给药 28 d 图 4 苍耳子高剂量组大鼠不同时间点给药后 24 h尿液代谢物超高效液相-飞行时间质谱图谱主成分分析得分图 Fig 4 Principal component analysis score plot of UPLC-TOF /MS metabolite fingerprints of 24-hour rat urine in the high-dose group at various post-dose time points 注 A:正离子模式;B:负离子模式;●K:对照组;△L-7:给药 7 d;◆L-14:给药 14d;▲L-21:给药 21d;■L-28:给药 28 d 图 5 苍耳子低剂量组大鼠不同时间点给药后 24 h尿液代谢物的超高效液相-飞行时间质谱图谱主成分分析得分图 Fig 5 Principal component analysis score plot of UPLC-TOF /MS metabolite fingerprints of 24-hour rat urine in the low-dose group at various post-dose time points ·292· 药物不良反应杂志 2011 年 10 月第 13 卷第 5 期 ADRJ，October 2011，Vol 13． No． 5 3 讨论 本研究结果显示，以相当于临床常用量 20 倍的 苍耳子水提取液给大鼠连续灌胃 28 d 的高剂量组 大鼠在给药 21 和 28 d时的体重均显著低于苍耳子 低剂量组(以相当于临床常用量 1 倍的苍耳子水提 取液灌胃)和对照组，差异均有统计学意义(P ＜ 0. 05，P ＜ 0． 01) ，而苍耳子低剂量组大鼠给药不同时 间段的体重与对照组比较差异均无统计学意义;苍 耳子高剂量组大鼠血清 ALT、AST 水平给药后均升 高，给药 21 和 28 d 与苍耳子低剂量组和对照组比 较差异有统计学意义(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) ，而苍耳 子低剂量组大鼠给药不同时间段的血清 ALT、AST 水平与对照组比较差异均无统计学意义。结合3组大 鼠给药后被毛、精神及运动情况的变化，提示高剂量 苍耳子水提取液对大鼠肝脏有毒性作用。 3 组大鼠尿液的代谢轮廓主成分分析和偏最小 二乘判别分析结果显示，苍耳子高、低剂量组与对照 组均呈明显的聚类分布，苍耳子高剂量组给药后不 同时间尿液代谢物表型的聚类分布均偏离对照组， 且随给药时间的延长而增大，提示高剂量苍耳子灌 胃 7 d已经干扰了大鼠内源性代谢物的组成，此时 已存在潜在的毒性。对大鼠血液生化指标的检测结 果显示，苍耳子高剂量组在给药 21 d时 ALT、AST水 平才明显升高，说明代谢组学的方法更具灵敏性和 预见性［8］。苍耳子低剂量组给药 7、14、21 d 时代谢 物表型出现聚类混淆的现象，说明该组大鼠给药期 间内源性代谢物的相对浓度与比例未发生明显的改 变，与血清生化指标的检测结果一致，验证了苍耳子 临床给药剂量的安全性。但苍耳子低剂量组在给药 28 d时出现聚类，说明内源性代谢物发生了变化，可 能存在潜在肝毒性，提示即便按照临床常用剂量给 予患者苍耳子制剂，也不宜服用时间过长。上述结 果表明，检测内源性代谢物的变化可以判断肝脏对 药物的反应，代谢组学方法的灵敏度优于传统的毒 性评价方法［9］。 中药的化学成分复杂，它们在体内代谢过程中 产生大量的代谢产物，因此利用核磁、液质联用等分 析方法鉴定其内源性代谢产物的结构、明确其毒性 来源、作用靶点以及确定能够代表肝毒性的生物标 志物，是今后研究中亟待解决的问题［10］。 参考文献 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