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第22章 引起侵袭性感染的真菌.ppt

第22章 引起侵袭性感染的真菌

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2013-01-09 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《第22章 引起侵袭性感染的真菌ppt》,可适用于自然科学领域

第章引起侵袭性感染的真菌第章引起侵袭性感染的真菌概论概论引起侵袭性感染的真菌又称深部感染真菌是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等其中以隐球菌感染较常见。组织胞浆菌为二相性真菌假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致病性真菌只有在一定条件下才引起机体致病。假丝酵母菌属假丝酵母菌属假丝酵母菌(Candida)俗称念珠菌生物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球菌目、假丝酵母菌属。本属菌有多个种其中有种对人有致病性其中以白假丝酵母菌为最常见的致病菌。白假丝酵母菌白假丝酵母菌临床意义:女性的假丝酵母菌性阴道炎、外阴炎男性假丝酵母菌龟头炎、包皮炎体质虚弱婴儿的鹅口疮假丝酵母菌性肠炎、肺炎、膀胱炎、肾孟肾炎和心内膜炎等中枢神经系统白色假丝酵母菌病如脑膜炎、脑膜脑炎、脑脓肿等。肾脏白假丝酵母菌感染白假丝酵母菌的生物学性状特征形态:菌体圆形或卵圆形繁殖方式:芽生组织内:芽生孢子及假菌丝培养时:厚膜孢子(本菌特征之一)菌落:℃或℃培养~d后培养基表面可出现奶油色类酵母型菌落营养要求:不高白假丝酵母菌的孢子(×)口腔白假丝酵母菌(×)外阴白假丝酵母菌(×)白假丝酵母菌的假菌丝和厚膜孢子(×)沙氏斜面血平板白假丝酵母菌菌落白假丝酵母菌微生物检验白假丝酵母菌微生物检验直接检查直接镜检圆形或卵形芽生孢子、假菌丝G试验抗原检测、抗体检测、核酸检测等分离培养沙保弱培养基:乳白色酵母样型菌落镜下:假菌丝、成群的卵圆芽生孢子鉴别和鉴定芽管形成试验厚膜孢子形成试验TZC试验糖同化和糖发酵试验显色培养基动物试验血清学试验芽管形成试验芽管形成试验方法:用无菌小试管加动物(兔、牛、羊)及正常人血清-ml,接种少量白色念珠菌的沙氏培养物充分混匀置℃水浴箱中孵育每隔小时用接种环或滴管取含菌血清置于载玻片上加盖玻片镜检共检查三次。注意事项:芽管形成检查时间不得超过小时因小时以后可生长假菌丝。芽管形成试验所用菌种应来自沙氏培养物菌龄为小时接种量约为ml。芽管形成试验需用已知阳性白色念珠菌作对照因为血清内可能有芽管形成抑制物质。牙管形成试验厚膜孢子形成试验厚膜孢子形成试验方法:烧灼灭菌的小刀划取小块米汤培养基置于灭菌平皿内的载玻片上并将标本接种其上加盖玻片滴加数滴灭菌蒸馏水于滤纸上以保持平皿内的湿度℃培养-天置显微镜下直接观察菌丝、厚膜孢子。注意事项:用玉米粉培养基和芋头培养基同样可做本试验。形成厚膜孢子的温度以℃最佳。Tween的作用是使假菌丝及厚膜孢子均匀分散生长而不纠缠成团并促进孢子的形成。TZC试验TZC试验方法:将待检菌接种在含.g/L氯化三苯基四氮唑(TZC)白假丝酵母菌不使培养基变色(淡红)热带假丝酵母菌在此培养基上生长后使培养基变为深红色或紫色而其他假丝酵母菌使培养基变为红色。糖同化和糖发酵试验糖同化和糖发酵试验糖同化试验:是测定细菌是否能利用某些糖类物质作为唯一的碳源来生长因此同化化试验的基础培养基里是没有肉汤或蛋白胨等营养成份的。方法:将的各类糖、醇物质浸入号新华滤纸的小纸片中(园形或方形均可)纸片直径mm。将纸片真空抽干或在超净台内吹干后放℃保存备用。制备无营养成份的固体琼脂平板(CMCM均可)。将待检菌浊度均匀涂布于以上平板上贴上不同的以上含糖纸片放于℃小时。观察时若发现某糖纸片四周有明显的细菌生长则为此糖同化试验阳性产色培养基动物试验动物试验将假丝酵母菌悬液注射ml于家兔耳静脉或注射ml于小白鼠尾静脉白色假丝酵母菌可致动物发病或死亡肝肾可见多发小脓肿涂片可见芽生孢子和假菌丝其他假丝酵母菌对动物无致病性。血清学试验血清学试验早期诊断可用ELlSA夹心法、免疫酶斑点试验乳胶凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清中抗白假丝酵母菌抗体。也可用特异性抗体血清或单克隆抗体进行玻片凝集试验鉴定本菌或分型热带假丝酵母菌热带假丝酵母菌直接显微镜检查将标本作涂片革兰染色后镜检观察革兰阳性的假丝酵母菌。分离培养与鉴定标本沙氏培养基上形成色暗而干燥的菌落取菌落作TZC反应取菌落作糖发酵或同化试验。芽管形成较迟(血清中h以上)不形成厚膜孢子、动物试验阴性。四种病原性假丝酵母菌的鉴别要点隐球菌属隐球菌属其中对人致病的最主要是新生隐球菌及其变种(新型隐球菌新型变种、新型隐球菌格特变种和新型隐球菌格鲁比变种)。新生隐球菌广泛分布于自然界也可存在于人体体表、口腔和肠道中。隐球菌属隐球菌属临床意义外源性感染,经呼吸道侵入由肺经血行播散,可侵犯肺、脑及脑膜、皮肤、骨和关节。好发于细胞免疫功能低下者如AIDS、恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者。现已发现新生隐球菌、浅白隐球菌和罗伦隐球菌有致病性。形态特征:圆形的酵母样细胞外周有一层肥厚的胶质样荚膜繁殖方式:芽生无假菌丝菌落:酵母型菌落表面粘稠、混浊荚膜多糖:A、B、C、D四个血清型归入两个变种组:①新生隐球菌新生变种有性阶段为新生线黑粉菌血清型为A、D(临床型)②新生隐球菌格特变种有性阶段为棒杆孢线黑粉菌血清型为B、C。新生隐球菌生物学性状特征新生隐球菌菌落新生隐球菌(墨汁负染色)隐球菌微生物检验隐球菌微生物检验标本采集通常采集脑脊液、痰、脓汁、尿、活体组织及尸检解剖材料。标本直接检查直接镜检:用患者脑脊液作墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简便、快速之方法。抗原检测:用免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原以乳胶凝集试验最为常用此法简便、快速。核酸检测、药物敏感试验、抗体检测。分离培养:将标本接种在沙氏培养基上病原性隐球菌在℃和℃孵育均可生长而非病原性隐球菌在℃时不生长。培养~d后观察菌落形态特点并取菌落作印度墨汁负染色镜检。其他检查方法酚氧化酶试验、尿素酶试验、糖同化及发酵试验新生隐球菌微生物鉴定新生隐球菌微生物鉴定酚氧化酶试验将菌接种L多巴枸橼酸铁和咖啡酸培养基中培养~d新生隐球菌呈棕黑色菌落。用已知新生隐球菌和浅白隐球菌分别作阳性和阴性对照。脲酶试验新生隐球菌能产生脲酶可分解尿素琼脂培养基的尿素形成NH和CO使培养基pH升高培养基由黄色变为粉红色。白假丝酵母菌则为阴性。糖同化及发酵试验新生隐球菌能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇但不能发酵糖类、不同化硝酸盐。非致病性隐球菌则不能同化肌醇。曲霉菌曲霉菌曲霉菌是条件致病菌人体对其有极强免疫力只有在人体免疫功能降低时才能致病。曲霉可引起呼吸系统曲霉病全身性曲霉病曲霉可产生毒素引起机体食物中毒致癌作用。最常见的是烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉曲霉菌生物学特征菌丝:有隔多细胞性有分枝足细胞(接触培养基的部分厚壁而膨大)分生孢子梗:从足细胞直立生长顶囊:孢子梗顶端膨大半球形或椭圆形小梗:顶囊上辐射状一层或二层杆状分生孢子:小梗顶端成串球形不同颜色分生孢子头:菊花样的头状结构菌落:绒毛状或絮状菌种不同颜色不同曲霉结构图烟曲霉菌落烟曲霉形态(×)黄曲霉菌落黄曲霉形态(×)黑曲霉菌落黑曲霉形态(×)土曲霉菌落土曲霉形态(×)构巢曲霉菌落构巢曲霉形态(×)五种致病性曲霉的比较曲霉微生物检验曲霉微生物检验直接显微镜检查:取痰液等被检材料涂于载玻片上在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头顶端膨大形成顶囊顶囊上有小梗小梗上有许多小分生孢子。抗原检测(GM、G试验)、抗体检测分离培养与鉴定:标本接种沙氏琼脂室温培养后菌落形成快呈毛状一般为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特征性的分子孢子头和足细胞。根据不同的曲霉的形态和菌落特征确定菌种。组织胞浆菌属组织胞浆菌属有两个种:荚膜组织胞浆菌、组织孢浆菌的杜波变种。本菌传染性极大主要侵犯网状内皮系统有时也可由血行播散而侵犯全身各脏器。组织胞浆菌是一种双相型真菌在℃培养时呈典型菌丝体在℃培养时为酵母型位于细胞内或外。微生物检验微生物检验直接显微镜检查 应涂片染色后检查。痰液等标本:涂片后先用甲醇固定min再用姬姆萨染色镜检。皮损、脓液等标本:用KOH涂片后镜检抗原检测、药物敏感试验、抗体检测分离培养与鉴定①标本含抗生素的沙氏培养基℃培养生长缓慢有时需~周才开始生长逐渐形成白色至棕色绒毛状菌落。②转种于血琼脂培养基上℃培养很快形成酵母型菌落。③培养物显微镜特征:℃沙氏培养可以发现特征性的大分生孢子但初代培养不典型继代培养可有典型大分生孢子。④鉴定:取可疑菌落涂片染色镜检并作脲酶试验和明胶液化试验。荚膜组织胞浆菌菌落为棉絮状镜检可见细长有隔菌丝菌丝侧面或孢子柄上长有特殊的圆形大分生孢子厚壁四周有棘突排列如齿轮直径~μm表面有指状突起形成对组织胞浆菌有突出诊断意义的特征性齿轮状大分生孢子。血液标本油镜下镜检可见在中性粒细胞或单核细胞中有卵圆形或圆形的酵母细胞。卡氏肺孢菌卡氏肺孢菌卡氏肺孢菌(pneumocycsiscarinii,PC)曾称为卡氏肺孢子虫。卡氏肺孢菌可寄生于多种动物也可寄生于健康人体。广泛分布于自然界如土壤和水等。卡氏肺孢菌病的传播途径主要是空气传播在健康人体内多为无症状的隐性感染。当宿主免疫力下降如长期使用免疫抑制剂、器官移植、肿瘤、艾滋病等潜伏的卡氏肺孢菌在病人肺内大量繁殖扩散使肺泡上皮细胞受损导致间质性浆细胞肺炎又称卡氏肺孢菌性肺炎(PCP)。卡氏肺孢菌微生物检验卡氏肺孢菌微生物检验直接显微镜检查 从患者痰液、支气管肺泡灌洗液或肺活检组织中检查PC是确诊本病的重要依据。常用的染色方法有吉姆萨染色、果氏环六亚甲基四胺银染色(GMS)和亚甲胺蓝染色。可以检出包囊和滋养体两种形态。抗原检测核酸检测抗体检测等。卡氏包囊和滋养体毛霉目真菌毛霉目真菌毛霉目真菌属于接合菌门、接合菌纲有个科主要是毛霉科。本病是一种发病急进展快、病死率极高的系统性条件致病性真菌感染。毛霉目真菌有无隔菌丝在一些陈旧培养基中偶见有隔菌丝。毛霉目真菌微生物检验毛霉目真菌微生物检验直接镜检 临床标本+KOH湿片直接镜检可见折光性强的粗大菌丝偶见孢子囊及孢子囊梗。分离培养临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖培养基、马铃薯培养基及沙氏琼脂培养基℃或℃培养。药物敏感试验抗体检测。鉴定根据毛霉、根霉与梨头霉的形态特点。毛霉根霉梨头霉马尔尼菲青霉马尔尼菲青霉双相性在自然界中以菌丝形式存在在组织中则可形成小圆形到椭圆形细胞。马尔尼菲青霉可引起马尔尼菲青霉病引起广泛性播散性感染主要侵犯人的网状内皮系统。马尼尔菲青霉微生物检验马尼尔菲青霉微生物检验标本直接检查:取骨髓涂片、皮肤印片或淋巴结活体组织瑞氏染色后镜检可见到典型圆形或卵圆形有明显横隔的细胞常在巨噬细胞内。分离培养与鉴定:标本接种沙氏培养基上在℃培养为青霉相℃酵母相。抗原检测鉴别要点:马尼尔菲青霉的孢子易与荚膜组织胞浆菌孢子相混淆但前者孢子常有横隔从不出芽。马尼尔菲青霉菌丝相马尼尔菲青霉酵母相镰刀菌镰刀菌镰刀菌生态适应性强广泛分布于自然界土壤、植物的地上及地下部分或植物碎片甚至可存在于沙漠及北极地区。镰刀菌引起人类感染尤其是在免疫缺陷病人正逐年增多其发病率和病死率仅次于白色假丝酵母菌和曲霉感染。镰刀菌微生物检验镰刀菌微生物检验标本直接检验:可见分支、分隔的菌丝与曲霉的镜下特征相似。培养鉴定:常有培养基有燕麦培养基、马铃薯葡萄糖琼脂、石竹叶琼脂、合成琼脂、KCl培养基和土壤琼脂。OA和PDA可用以观察菌落形态和色泽产孢有时较少。KCl培养基可用以观察分生孢子链的形成。土壤培养基有利于快速形成厚壁孢子。

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