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首页 动物细胞培养预习报告-3-换液观察

动物细胞培养预习报告-3-换液观察.doc

动物细胞培养预习报告-3-换液观察

li霞李
2018-12-01 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《动物细胞培养预习报告-3-换液观察doc》,可适用于医药卫生领域

预习报告第组换液观察实验器材器材:酒精灯,镊子,酒精,酒精棉,胶头吸管,超净工作台,废液缸,打火机,显微镜,载玻片等。溶液:培养液。实验步骤一、无菌室准备、实验环境无菌处理:()无菌室消毒:定期清洁,用过氧乙酸熏蒸,紫外线消毒小时。()超净台消毒。()实验者准备:紫外灯关闭min钟后,实验者在缓冲区内穿白大褂,戴口罩,帽子,洗手,泡手,(穿隔离衣),酒精擦手,拿好实验物品进入无菌室(洗手后手不要再碰缓冲区内其他物品,开门由未完成准备的同学帮忙)。、无菌技术要领:()手指不可触及器材使用端()器材使用端经火焰消毒使用()打开或封闭瓶口,安装吸管等都必须在无菌区进行()开口瓶必须顺风°斜放,用后及时关闭。、实验器材无菌使用:()吸管使用:左手持筒,右手取下筒口包装,倒置于安全区内桌面。消毒筒口,左手抖动至吸管长处筒口,右手取管,左手消毒筒口,右手取筒口包装重新套于筒口,将吸管筒放置于远处。此过程中,右手吸管保持管口斜向外上,减小污染几率。吸管吸出液体不要太多,移液时要注意吸管口要保留一段空气柱。移液时吸管不要伸到瓶里放液,而是瓶口微斜,在瓶口外放液。二、超净台操作(一)换液、台面准备:台面消毒,点燃酒精灯放在左前方,左手边放培养瓶,再往右依次摆放培养液、酒精棉瓶,废物瓶,最右是吸管,这样将所有的物品就在自己的面前。、观察:观察培养瓶内细胞的生长情况,培养液的清亮度及其他情况(具体见下观察部分)、镜下观察取材:培养瓶内培养液吸取几滴在载玻片上留作观察(吸管每用完要换掉)。、去液:用镊子取酒精棉球放在台面上,左手持培养瓶,翻转使其细胞面朝上,取下盖子,瓶口消毒,、吸液滴:将培养瓶瓶口垂直朝下,在桌面上的酒精棉球上轻轻压下,使酒精棉球将瓶口的液滴吸试完全。、瓶口擦拭:左手持培养瓶,右手用镊子取酒精棉球,在培养瓶口处从上至下绕圈擦拭,将擦拭完的酒精棉球弃入废物瓶。、加培养液:取吸管,套上胶头,另一位同学在安全区内将装有新培养液的培养瓶打开,瓶口消毒,由主操作者左手持培养瓶,将其侧立,右手使用吸管从另一位同学手中的培养瓶中吸取ml的新培养液,沿侧面加入培养瓶。、收尾:瓶盖瓶口消毒后盖上,培养瓶细胞面在上放回原位,新培养液瓶也消毒盖好,放置一边,进行下一位操作。(二)观察观察培养液的情况,细胞的生长情况,取载玻片进行镜下观察。、观察培养液清亮度:培养液被污染时多数浑浊,少数清亮,常见污染有()细菌污染:培养液浑浊变黄()霉菌污染:多数培养液清亮变黄,镜下可见菌丝和孢子()念珠菌污染:液体清亮色黄,镜下见长短不一的菌链()酵母菌污染:液体浑浊色黄,镜下见成群的酵母菌()支原体污染:液体清亮,支原体分布在细胞表面和细胞之间除此之外还有螨虫污染等。我们可以依此简单判断培养液污染情况。、培养细胞分型:体外培养的动物细胞有两型非贴壁依赖性细胞(又称悬浮生长型,如人淋巴细胞,k细胞)、贴壁依赖性细胞(又称贴壁生长型)。贴壁依赖性细胞又大致分为以下四类:()成纤维细胞型,细胞梭形多突起,如心肌细胞,平滑肌细胞等()上皮细胞型,细胞扁平,多边形,如消化管上皮,肝胰上皮等,实验培养的小鼠细胞属于此种类型()游走细胞型,细胞有吞噬运动,如小鼠富强巨噬细胞()多型细胞型,如神经细胞本次实验小鼠肺细胞所属上皮细胞型,细胞应呈扁平不规则多边形,角为钝角,大小相仿,中央有圆形核。细胞外观透明,生长时成薄膜移动,紧密相连呈单层膜。我们可以依此为标准简单进行判断培养的细胞是否正确。、培养细胞一代生长过程:从细胞接种到分离再培养,一般分为个阶段:()游离期:细胞接种后在培养液中呈悬浮状态。()贴壁期:细胞贴壁后由圆球形细胞变为放射延展型细胞,进而过渡为极性细胞()潜伏期:有细胞活动,无细胞分裂,后期部分细胞进入细胞间期()指数生长期:细胞数成倍增长,增殖细胞近圆球形,体积较大,核大,易见双核细胞,正常细胞会出现接触抑制和密度抑制。()停止期:细胞长满瓶壁,不再增殖,时间长会发生中毒性改变。我们可以依此简单判断实验中培养的细胞所处时期。三、分工情况甲:乙:丙:三位同学依次进行换液操作,每人一瓶,中间的加培养液步骤由后一位同学进行协助。观察由三人共同观察讨论三瓶原代培养细胞的生长情况。

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