高效液相色谱法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量和含量均匀度

高效液相色谱法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量和含量均匀度 高效液相色谱法测定黄杨宁片中环维黄杨 星D的含量和含量均匀度 药物分析杂志ChinJPharmAnal2007,27(02) ?交流? 高效液相色谱法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量和含量均匀度 黄勤安,黄海燕,鲁静,何轶,林瑞超 (1.安徽皖南医学院,芜湖241oo1;2.广西桂林食品药品检验所,桂林541000;3.中国药品生物制品检定所,北京100050) 摘要目的:建立HPLC测定黄杨宁片中环维黄杨星D含量和含量均匀度的方法并进行方法学验证.方法:采取异氰酸苯酯 柱前衍生化,HPLC测定.色谱柱:LichrospherCI8(5m,4.6mill×250mm);流动相:甲醇一水(83:17);流速1mL?min-.;检 测波长:240am;柱温:30?.结果:线性范围在0.08624—0.4312g(r=0.9999);测得环维黄杨星D的平均回收率为 97.92%,精密度,重复性,线性关系良好.结论:该方法可靠,准确,灵敏度高,为黄杨宁片剂的质量控制建立了良好的方法. 关键词:环维黄杨星D;黄杨宁片;高效液相色谱法 中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:0254—1793(2007)02—0264—03 HPLCdeterminationofcontentanduniformityof cyclovirobuxineDinHuangyangningtablets HUANGQin—an,HUANGHai—yan,LUJing,HEYi,LINRui—chao (1.Chemistryd印artmentofWannanMedicalCollege,Wuhu261001,China;2.InstituteforFoodandDrugCon trolofGuilinCity,Guilin541000,China; 3.NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProduct,Beijing10005 0,China) AbstractObjective:ToestablishanHPLCmethodwithprecolumnderivatizationfordetermi nationthecontent anduniformityofcyclovirobuxineDinHuangyangningtablets.Method:Thederivatization wascarryoutbyusing phenylisocyanateasthederivatingregent.ThecolumnwasLichrospherC18(5m,4.6mm× 250mm),themobile phaseconsistedofmethanolandwater(83:17),theflowrateWas1mL?min_..Thedetectionw avelengthWasset at240nmandthecolumntemperatureWas30oC.Results:Thecalibrationcurvewasintherangeof0.08624gto 0.4312g(r=O.9999).TheaveragerecoveryofcyclovirobuxineDwas97.92%.Conclusion:Themethodisspe— cific,sensitive,accurateandprecise.ItcanbeusedforthequalitycontrolofcyciovirobuxineD inHuangyangning tablets. Keywords:cyciovirobuxineD;Huangyangningtablets;HPLC 黄杨宁片中所含环维黄杨星D是由天然植物 黄杨木中提取的甾体生物碱单体,该制剂用于治疗 心血管疾病,可改善心肌缺血,抗心率失常,对血压 有双向调节作用,可有效降低血压且可改善低血压 及其症状,并有改善心功能,抗心力衰竭等作用. 黄杨宁片的质量控制方法已有较多研究,2005年版 中国药典黄杨宁片中环维黄杨星D的测定方法为 溴麝香草酚兰比色法J.本文参考有关衍生化法 文献l4J,建立了黄杨宁片中环维黄杨星D的柱前 衍生化一高效液相色谱测定方法,并考察了含量均 匀度,为黄杨宁片剂质量控制提出了有效方法. 第一作者Te1:0;E—mail:hqaa128@sohu.corn 1仪器和试药 Waters2695高效液相色谱仪,2996二极管阵列 检测器,EMPOWER色谱工作站. 异氰酸苯酯(Phenylisocyanate)为MERCK— Schuchardt试剂;磷酸二氢钠,浓氨水,氯仿为分析 纯,甲醇为色谱纯(Fischer);纯净水为GN—RO一60 型纯水机和Milli—Q纯水系统二次制备.环维黄杨 星D对照品为河南省药品检验所提供,按文献[5], 采用末端吸收的直接HPLC归一化法测得纯度为 98.8%;黄杨宁片,批号20021101,规格:0.5mg? 片,. 药物分析杂志ChinJPharmAnal2007,27(02)..——265..—— 2实验条件和方法 2.1色谱条件色谱柱:HchmspherC.8(5m,4.6 mm×250mm);流动相:甲醇一水(83:17),1mL? min,;检测波长:240nm;柱温:30oC;进样量:10 . 2.2异氰酸苯酯试液制备吸取异氰酸苯酯20 L,加氯仿10mL,摇匀,即得. 2.3对照品溶液的制备精密称取环维黄杨星D 对照品10mg,置25mL量瓶中,加氯仿溶解并稀释 至刻度,摇匀,作为对照品储备液.精密量取1mL, 置10mL量瓶中,加异氰酸苯酯试液0.2mL,摇匀, 室温放置30min,加甲醇稀释至刻度,摇匀,以0.45 m微孔滤膜滤过,即得. 2.4供试品溶液的制备取黄杨宁片样品20片, 精密称定,研细,精密称取适量(约相当于1片的 量),置50mE(1mg?片置100mE)量瓶中,加人 0.05mol?L磷酸二氢钠溶液约40mL(1mg? 片约加80mE),80oC水浴恒温加热1.5h,取出, 放冷至室温,用同一溶液稀释至刻度,摇匀.滤过, 弃去初滤液,精密量取续滤液25mL,置分液漏斗 中.加浓氨试液调pH9,10,用氯仿提取3次,每 次10mL,提取液用通过装有1g无水硫酸钠的小漏 斗滤过,合并氯仿提取液,置茄型烧瓶中,减压回收 溶剂至干.加氯仿1mL,小心溶解提取物,再加人 异氰酸苯酯试液0.2mL,摇匀,放置30min,加甲醇 少量,定量转移至10mL量瓶中,并稀释至刻度,摇 匀,以0.45m微孔滤膜滤过,即得. 261014lst/min 图1环维黄杨星D对照品(A)和黄杨宁片样品(B)高效液相色谱 图 Fig1HPLCchromatogTamsofreferencesubstanceofcyciovimbuxineD (A)andsampleofHuangyangningtablets(B) 1.环维黄杨星D(cyciovirobuxineD) 3方法学验证 3.1线性关系考察取对照品溶液,分别进样2, 4,6,8,10L,进样量分别为0.08624,0.1725, 0.2587,0.3450,0.4312,测定峰面积值,以进样 量(g)为横坐标,峰面积y值为纵坐标,计算回 归方程为: y:一2.628×10+5.848×10Xr:0.9999 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明进样量与峰面积值呈良好线性关系. 3.2定量限测定取浓度为0.004?mL的对 ,测定峰面 照品溶液,分别进样5,10,15L各5次 积值,RSD分别为6.99%,3.43%和1.63%,确定定 量限为0.06. 3.3精密度试验取同一供试品溶液,按上述色谱 条件,连续进样5次,测定峰面积平均值为 1163183,RSD为0.63%. 3.4稳定性试验取同一供试品溶液,按上述色谱 条件,分别在0,1,3,5,7,9h进样测定峰面积值,峰 面积平均值为1169767,RSD为0.66%. 3.5重复性试验取黄杨宁片,分别称取6份,按 "2.4"项下方法制备供试品溶液,测定并计算含量 平均值为0.41mg?片,,RSD为1.7%. 3.6加样回收率试验精密称取环维黄杨星D对 照品10.63mg,置25mL量瓶中,加氯仿溶解并稀 释至刻度.精密量取10mL置100mL量瓶中,以氯 仿稀释至刻度.分别精密量取4,5,6mL各3份置 具塞三角瓶中,回收溶剂至干.分别精密称人已测 知含量的黄杨宁片样品粉末约0.04g,加人0.05 mol?L磷酸二氢钠溶液50mL,以下按供试品溶 液制备方法,自"置80?水浴恒温1.5h,……"起, 同"2.4"项下方法制备供试品溶液,进样测定,计算 回收率.回收率平均值为97.92%,RSD为5.1%. 4样品测定 采用上述衍生化方法,对不同企业生产的3批 样品进行了测定,结果见表1. 表1黄杨宁片中环维黄杨星D含量 和含量均匀度测定结果 TablThequantitativeanalysisand uniformityresultofsamples … 规格 ,, 含量相对含量 Lo 批 t 号 No. (specifi . c 片 ati — on)/ ceO 芝lltellt相(a荨ssay量)sALotNoIOD一A".sos(.)mg?片I1,,(一(mgpertablet) 20O40320 03l202 20040108 5含量均匀度测定 取样品10片,分别置50mL(1mg?片置100 mL)量瓶中,各加0.05mol?L-1磷酸二氢钠溶液约 舵 884 } 佻 33l 蛆蛆鳃 ;.蚪 000 500 0ll 药物分析杂志ChinJPharmAnal2007,27(02) 40mL(1mg?片加约80mL),按上述供试品溶液 制备方法,自"80?水浴恒温1.5h"起,同法操作, 分别制得供试液,并按上述色谱法测定含量.测定 3批样品的含量均匀度,分别计算每片以含量测定 值为100的相对含量,求其均值和标准差,结果见表 1. 6讨论 6.1本文建立了异氰酸苯酯柱前衍生化一高效液 相色谱法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量,并 验证了方法的可行性,表明灵敏度,重复性和精密度 均较好,为黄杨宁片剂的质量控制提供了检测方法. 6.2试验中发现,在供试品溶液制备过程中,氯仿 萃取液如稍带入水液,则使衍生化反应不完全,测定 值明显降低.因此,本试验特别采用氯仿萃取液经 无水硫酸钠脱水处理的方法,从而提高了测定的精 密度. 6.3环维黄杨星D为一甾体生物碱,结构中无发 色基团和共轭体系.曾采用直接测定法,即以 0.005mol?L庚烷磺酸钠(含1.5%三乙胺,磷酸 调pH3.1)一乙腈(75:25)为流动相,203nm检测, 灵敏度较低.虽然衍生化方法操作较烦琐,但测定 检测限较直接测定高数十倍,可满足常规测定要求. 6.4黄杨宁片为环维黄杨星D的单体制剂.2005 年版中国药典 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 环维黄杨星D的含量应不低于 99.0%,黄杨宁片含环维黄杨星D应为标示量的 90.0%,110.0%.上述样品测定结果显示,黄杨宁 片中环维黄杨星D单体的含量仅为标示量的72% , 82%,环维黄杨星D原料的质量需要进一步提 高. 6.5采用高效液相色谱法测定黄杨宁片中环维黄 杨星D的含量均匀度,因实际含量与标示量相差较 大,数据是以含量测定值为100,分别测定每片的相 对含量,求其均值()和标准差(5),以及含量测定 值与均值之差的绝对值A(A=100一X),3批样品含 量均匀度A+1.85值均?15.0. 参考文献 1ClaP(中国药典).2005.VolI(一部):591 2LIANGBing—wen(梁秉文),ZHANGChao—wei(张朝位).Huan? gyangningandtheDiseaseofMind—brainandBloodVessel(黄杨宁 与心脑血管疾病).Beijing(北京):BheskyPress(蓝天出版社), 2OOO.5 3XUXin—jIlll(徐新军),ZHANGZheng—xing(张正行),SHENG Long—sheng(盛龙生),eta1.DeterminationofcyclovirobuxineDby RP—HPLCwithprecolumnfluorescencederivatization(柱前荧光衍 生化RP—HPLC测定环维黄杨星D含量).ActaPharmS/n(药学 ),2002,37(5):359 4XUXin—jIln(徐新军),ZHANGZheng—xlns(张正行),SHENG Long—sheng(盛龙生),eta/.Thecomparisonofdeterminatingcyclo- virobuxineDrelatedsubstancesbyHPLC/MSandprecolumnderivat- izationonRP—HPLCusingI—phenyl—isocyanate(HPLC/MS法与 柱前衍生化HPLC/UV法测定环维黄杨星D有关物质比较).., Ch/naPharmUniv(中国药科大学),2002,33(5):408 5XUXin—jun(徐新军),ZHANGZheng—xing(张正行),ANDeng — kui(安登魁),eta1.Establishmentofthe~ntrolofcycloviroxineD (环维黄杨星D对照品的建立).TraditChinDrugResC//nPhar- macol(中药新药与临床药理),2004,15(2):110 (本文于2006年6月12日收到)