免疫分析检测技术检测方法

免疫分析检测技术 原理: 基于抗原、抗体的特异性识别和结核反应的分析 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ,通过对抗原或抗体进行标记(酶、荧光物质、放射性同位素标记等),利用标记物的信号放大作用,与现代测试技术相结合,对样品中特定的目标物进行一定的目标物进行定性定量测定。 特点: 1)特异性强、灵敏度高 2)方法便捷、分析容量大、检测成本低 3)可提供系列化的产品以及技术,产品可以商业化。 1.免疫检测技术按标记抗原或抗体标记物的不同可区分为放射免疫分析法(RIA)、酶免疫分析法(EIA)、荧光免疫分析法(FIA)等,并由这些方法延伸形成了免疫传感器、免疫亲和层析法等。最早残留免疫检测中,RIA占了很大比重,但由于该方法存在放射性防护和废物处理等问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,应用受到较大限制。免疫检测法特别是酶联免疫吸附法(ELISA)按抗原、抗体的特异性结合过程中是否有两种抗体(抗原)同时与一种抗原(抗体)竞争结合的情况,而区分为非竞争性ELISA法和竞争性ELISA法两种类型。一般目标检测物是大分子的常用非竞争性ELISA法,而目标检测物是小分子的则常采用竞争性ELISA法。大部分残留物质分子量小于1000,不具备免疫原性,以此制备的抗体,进行农药残留免疫检测时多用竞争性酶联免疫反应。 2.免疫检测技术在农畜产品安全检测应用中的技术要点 2.1抗原的制备 大多数残留物是小分子物质(一般分子量小于1000),本身不具备刺激机体产生针对残留物抗原的决定簇的特异性,需与大分子物质(如载体蛋白)偶联后才能刺激动物产生抗体,因此待测残留物小分子需具备有能与大分子物质反应的活性基团。大多数需要引入活性基团合成具有活性基团并尽量保持待测物空间构型和电子分布的半抗原。 2.2抗体的制备 抗体的发展主要经历了3个阶段:多克隆抗体(PAbs)、单克隆抗体(MAbs)、以及基因工程抗体。 多克隆抗体(PAbs)是采用抗原免疫动物制备的血清,为多种抗体的混合物。多克隆抗体具有生产成本低、方法简便、来源广泛、易于制备等特点,但是其抗体的特异性不够强。会随着动物种类及个体差异而有变化,易于发生交叉反应。 单克隆抗体(MAbs)来源于免疫小鼠的脾细和骨髓瘤细胞融合并筛选出的能力稳定分泌目标分析物抗体的细胞株。单克隆抗体虽然对设备 要求 对教师党员的评价套管和固井爆破片与爆破装置仓库管理基本要求三甲医院都需要复审吗 相对较高,技术相对复杂,且成本也高,但其特性稳定,交叉反应少,并可大批量生产,在生产商品试剂盒上很有价值[1]。 基因工程抗体应用重组DNA技术或基因突变方法改造某种抗体基因的编码序列,产生自然界中原本不存在的蛋白质分子。 3.实验方法的建立和条件的优化 获得特异性抗体之后,要得到最高的灵敏度,要对各个环节精心试验并摸索最佳试验条件,如抗原抗体相对亲和性考察、最是工作浓度选择、各种反应条件的选择、目标分子对抗原抗体结合抑制率考察、抗体的特异性考察、待测样品的前处理及基质干扰的影响、与传统理化分析方法进行相关性验证、稳定性试验等。综合各试验因素,使免疫检测方法得以确立[2]。 免疫分析技术在鲜肉检测中的应用 1.免疫酶技术(ELISA) 主要检测鲜肉沙门氏菌,采用特殊材料制成固相体,聚酯布(Polyester cloth)结合单 抗放置在层析柱的底部富集鼠伤寒沙门氏菌,然后直接做斑点印迹实验。也可将沙门氏菌固定到氧化钛膜上,滴加抗沙门氏菌鞭毛抗体,再加酶标抗体。还有一种浸渍片方法,可减少检测时间和ELISA中的繁琐步骤,达到快速检测沙门氏菌的目的。整个过程仅需20min,其敏感性可达106CFU/ml,英国的bio。Merienx公司最新推出了一种全自动ELISA沙门氏菌检测系统。其原理是将捕捉抗体包被到凹形金属片的内面,可以从前增菌中吸附被检沙门氏菌。该系统仅需要做的是用吸管把样品加到测定的试验中就行,其余过程为自动分析。2.免疫传感技术 免疫传感器就是利用抗体的双重功能将抗体或抗原和换能器结合而成的装置。由于蛋白质分子(抗原或抗体)携带有大量电荷、发色基因等,当抗原抗体结合时会产生电学、化学、光学等变化,通过适当的传感器可检测这些参数,从而构成不同的免疫传感器。其选择性强、灵敏度高的特点。许多细菌是引起人感染和中毒的主要病原体,一般细菌检测法费时、繁琐、以电化学为基础的免疫传感器已成功地用于检测细菌毒素蛋白质。 检测鲜肉中的细菌毒素: 多数病原微生物具有内毒素,鲜肉在产前、运输等各个环节都有可能被污染,而且毒性大。主要集中在鲜肉的沙门氏菌、大肠杆菌、变形杆菌和炭疽(荚膜型)杆菌和肉毒毒素、金黄色葡萄球菌等所用的传感器大多采用光纤免疫传感器如葡萄球菌肠毒素B(Staphlococal Enterotoxin)亲和纯化的兔抗SEB捕获抗体(一抗)共价结合到光纤上以结合SEB。然后用结合上Cy5标记的亲和纯化羊抗毒素检测抗体(二抗)、从而在光纤表面形成荧光复合物,损耗波激发纤维表面以产生信号,并在计算机上显示出图形。该方法与ELISA比较,在分析大量样品中的SEB有很大的优势。 检测鲜肉中残留农药: 传统的薄层层析法和气相色谱法已不适应当前消费者对农药的限量,Ase等大多采用表面等离子体共振(SPR)免疫传感器快速测定了脱脂牛奶中的硫胺二甲嘧啶残留物,检出限低于1mg/ml。而这种传感器表面经NaOH和HCl处理后重复使用。有机磷、有机氯等除草剂,杀虫剂,磺胺,抗菌素等兽药可积累在畜禽机体中,通过动物性食品进入人体中,利用压电免疫传感器,表面离子体共振传感器测定鲜肉的农药有着特殊的意义,而且今年来将得到较快的发展[3]。 猪肉中瘦肉精的免疫分析检测技术:免疫分析技术的酶免疫法是克伦特罗残留免疫检测方法中最为常用的一种方法,此外放射免疫法荧光免疫法也是免疫法分析克伦特罗常用的手段。免疫检测法具有异性强,灵敏度高等特点,不需要特殊仪器,适合现场监控但是免疫法检测费用昂贵,对实验条件要求也较苛刻。 (1)酶免疫分析技术酶免疫分析技术是将抗原和抗体亲合反应的特异性、高专一性酶 对底物的高效催化作用结合起来的固相免疫测定技术目前,使用较普遍的是酶联 免疫吸附测定(ELISA)方法。 (2)胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术是将克伦特罗的抗体与胶体金结合成免疫 金,制备成结果肉眼可见的检测试纸条,该方法不仅特异性好,敏高度高,并且简单,便 捷,对操作者没有太高的技术要求,适用于现场的快速检测工作[4]。 (3)荧光免疫分析法荧光免疫分析法是用三价稀土离子及其螯合物作为示踪物标记分析 物,根据荧光强度和相对荧光强度比值,判断反应体系中分析物的浓度我国学者时瑾等 建立了的时间分辨荧光免疫法检测猪尿样品中克伦特罗的浓度,其检出限为0.01 g/L,并 证实这种检测方法受其他干扰物影响较小荧光免疫分析法灵敏度高,无放射性污染,是一 种稳定,理想的检测方法但该法对温度的有较高要求和荧光强度取决于激发波长,也限制 了其在瘦肉精检测上的应用[5]。 参考文献 [1]Queffelec A L,Nodet P,Healters J P,et al.Hapten synthe-sis for amonoclonal antibody based ELISA for deltamethrin [J].J Agric Food Chem ,1998,46:1670-1676. [2]李春生.免疫检测技术在农畜产品安全检测中的应用[J].河北省科学院学报,2009,26(1):50-54. [3]黄素珍,陈汉中.免疫分析技术在鲜肉检测中的应用[J].肉品卫生,2000(9):31-34. [4]刘见.免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗,上海交通大学学报(农业科技版),2009,22(4)350-354. [5] 王芳,马艳梅,丁原春. 猪肉中瘦肉精检测方法研究进展[J].湖南农机, 2012,39(7):236-237.