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一、缺氧模型的实验性复制.doc

一、缺氧模型的实验性复制

花落知多少334
2017-11-13 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《一、缺氧模型的实验性复制doc》,可适用于初中教育领域

一、缺氧模型的实验性复制病理生理学实习指导一、缺氧模型的实验性复制目的与原理通过给动物低氧环境影响Hb的带氧能力及使组织不能利用氧等方法复制不同类型缺氧模型经呼吸、机能状态、皮肤粘膜颜色等指标显示了其不同症状与特征同时对复制模型的方法及原理又有大概的了解有利于深入和研究各缺氧症的发生、发展和转归的规律。实验对象小白鼠。器材与药品缺氧瓶(装有管道瓶塞的ml广口瓶)酒精灯一氧化碳发生器ml注射器ml和ml刻度吸管粗天平(附砝码)剪刀普通镊。钠石灰(氢氧化钠、氧化钙)甲酸浓硫酸氰化钾溶液亚硝酸钠溶液硫代硫酸钠溶液。步骤与观察表观察指标呼吸机能状态皮肤粘膜颜色型(频率、幅度)(活动度)类––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––低张性缺氧一氧化碳中毒氰化钾中毒低氧性缺氧将小白鼠至于ml广口瓶(内装钠石灰吸收二氧化碳)中观察上述指标。将瓶塞紧同时记录时间每min重复观察上述指标一次(如有变化则随时记录)直到动物死亡为止。一氧化碳中毒性缺氧如图装好一氧化碳发生装置。将小白鼠一只放入瓶中观察上述指标。取甲酸ml放入试管内加入浓硫酸ml塞紧。如气泡产生较少可用酒精灯加热加速一氧化碳的产生(但不可过热以至液体连续沸腾因一氧化碳产生过快动物迅速死亡血液颜色改变不明显)。在整个过程中注意观察上述指标。(注):一氧化碳产生原理:HSOHCOOHCOHO氰化钾中毒性缺氧称小白鼠体重观察上述指标预先准备亚硝酸钠及硫代硫酸钠各mlKg以备急救用。图一氧化碳发生装置腹腔注射氰化钾mlKg立即观察上述指标。待小白鼠出现共济失调或竖尾时将准备好的急救药注入腹腔。重复步骤不予抢救。将三种缺氧实验动物尸体打开腹腔比较血液或肝脏颜色。附:硫代硫酸钠(NaSO)及亚硝酸钠(NaNO)急救机制NaSO是一种氧化剂能使血红蛋白氧化成高铁血红蛋白后者与氰酸根结合成氰化高铁血红蛋白使细胞色素氧化酶解脱出来从而恢复细胞的生物氧化功能。NaSO在体内S与HCN结合变成无毒性的HCNS由肾脏排出。NaSOCOHONaHCONaHSOSHCNSHCNS硫氰酸酶(肝)注意事项吸取硫酸与甲酸时注意不要溅到衣服或皮肤上。CO中毒实验完毕后及时处理CO发生器内的残余物。思考题注射亚硝酸盐所观察指标有改变为什么,二、呼吸功能衰竭目的与原理本实验通过复制呼吸功能衰竭的病理模型观察血气和呼吸的变化并分析其机制。呼吸功能包括外呼吸、内呼吸和气体运输功能。呼吸衰竭指的是由于外呼吸功能严重障碍以致动脉血氧分压低于正常范围的病理过程。肺通气障碍或,和肺换气功能障碍都可导致呼吸功能衰竭。实验对象健康成年兔。器材与药品兔手术台哺乳动物手术器械一套连接三通的动脉插管二道生理记录仪张力换能器血气分析仪输液装置。氨基甲酸乙酯溶液肝素生理盐水生理盐水肾上腺素。步骤与观察麻醉与固定取兔一只称重从耳缘静脉按mlkg注射氨基甲酸乙酯溶液。麻醉后将兔仰卧位固定于兔台上。颈部手术剪去颈部被毛切开皮肤分离皮下组织作气管插管再分离左侧颈总动脉作动脉插管(插管内充满肝素生理盐水)。分离右侧颈外静脉作静脉插管并与输液装置相连缓慢输入生理盐水。血气分析用ml注射器先抽取少许肝素润湿注射器壁后推出使注射器死腔和针头内充满肝素溶液然后略松支动脉夹放血注许冲去动脉插管内的肝素生理盐水再用肝素处理过的注射器与动脉插管相连让血液自动流入注射器内(切勿进入气泡)取血,ml采血后迅速套上带软木塞的针头作血气分析。呼吸运动的描记将张力换能器上的挂钩钩在兔剑突部位的皮肤上调节挂钩与换能器敏感梁之间的牵引线使张力适中且牵引线须垂直。将换能器与二道生理记录仪连接好。二道生理记录仪的―时间常数‖置于DC―滤波‖置于Hz灵敏度mVcm走纸速度mms。描记一段正常呼吸曲线。复制窒息用弹簧夹将气管插管上所套橡皮管完全夹住使动物处于完全窒息状态s取动脉血作血气分析并观察呼吸变化。立即放开弹簧夹等min待动物恢复正常。复制气胸于兔右胸第~肋间插入一号针头造成右侧气胸min~min时取动脉血作血气分析同时观察呼吸变化。用ml注射器将胸腔内空气抽尽拔出针头等min~min,待动物呼吸恢复正常。复制肺水肿从颈外静脉快速(滴~滴,min)输入生理盐水(mlkg)滴注接近完毕时立即向输液瓶内加入肾上腺素mlkg输完全部液体观察呼吸的变化并作血气分析。动物出现明显的血气变化及呼吸变化后用止血钳夹住气管处死动物打开胸腔在气管分叉处结扎气管以防止水肿液流出在结扎处以上切断气管小心将心脏及其血管分离取出肺脏后用滤纸吸净肺表面称重计算肺系数。正常肺系数为,~,。肺系数,体重(kg)肺重量(,)观察肺脏体积、颜色的改变并切开肺脏观察有无泡沫样的液体流出。注意事项取动脉血切忌与空气接触如针管内有小气泡要立即排除。复制气胸后一定将胸腔内空气完全抽出。取肺脏时应避免损伤肺组织并尽量减少对肺组织的挤压。思考题实验中复制肺水肿的机制是什么,实验中由气管插管中流出大量液体而肺系数值增大并不明显应考虑哪些因素,附:实验性肺水肿的其它复制方法抬高兔台头端用ml注射器吸取葡萄糖溶液ml~ml将针头插入缺管插管分叉处缓慢注入气管造成渗透性肺水肿min~min后放平兔台取动脉血作血气分析并观察呼吸的变化。从耳缘静脉缓慢注入液体石蜡ml或油酸ml~ml(用前经水浴加热至左右)观察呼吸的变化于注射后min和min时分别取血作血气分析。三、急性右心衰竭病理模型制备目的与原理本实验要求掌握急性右心衰竭模型的制备方法。观察复制过程中机体出现的表现理解其发生机制。由耳缘静脉缓慢注入栓塞剂经静脉回流至肺脏并栓塞在肺循环引起肺动脉高压即右心室后负荷增加。如再输入大量生理盐水使回心血量大大增加则在后负荷增加的基础上又增加了前负荷右心功能则急剧衰竭症状加重甚至有腹水直至动物死亡。实验对象健康成年兔kg以上。器材与药品兔手术台哺乳动物手术器械中心静脉压测定装置呼吸描记装置心室插管听诊器注射器(mlmlml)二道生理记录仪与电刺激器(或MSPC型生物信号处理系统)。氨基甲酸乙酯溶液生理盐水液体石蜡尼可刹米肝素溶液。步骤与观察二道生理记录仪兔称重、麻醉固定二道生理记录仪参数见附。颈部剪毛作正中切口钝性分离颈部组织作左侧颈总动脉插管(连接动脉压换能器)与气管插管(连接玛俐氏气鼓并调节好玛俐氏气鼓与张力换能器的距离)。右侧颈外静脉插入导管至右心房或右心房口(cm左右)。通过输液管连上输液瓶和中心静脉压检压计先使导管与输液瓶相通保持静脉插管通畅。或有多导仪实验组用经右侧颈外静脉插入心室插管至右心室(cm左右)插管的同时开动多导仪描记压力曲线以观察是否插入了右心室。此组输液从耳缘静脉处。观察记录各项生理指标、心率、心音强度、肺部听诊(有无异常呼吸音)、动脉血压、中心静脉压(见附)或右心室内压(包括收缩与舒张期压力)、循环时间(由耳缘静脉注射尼可刹米mlKg作标记然后测量从标记到呼吸加深加快这段距离根据走纸速度计算时间即循环时间。用ml注射器吸取液体石蜡按mlKg由耳缘静脉缓慢注射同时密切观察中心静脉压(或右心室内压)、血压的变化。如前者升高或后者下降则终止注射。复测记录各项指标。待血压、呼吸稳定后以滴min的速度输入生理盐水直至血压降到kPa以下。复测记录各项指标。动物死亡后剖开胸、腹腔(注意不要损伤脏器与大血管)观察有无胸、腹水、肠系膜血管充盈与脏器水肿。注意事项(液体石蜡注入速度要慢否则易引起急性肺栓塞很快死亡。(外加因素或试剂时均要做标记。(输入生理盐水过程中可适当加注些液体石蜡。(测量动脉血压、中心静脉压每次要观察与记录实验因素前与实验因素之后的数值。思考题本右心衰竭模型机体可出现哪几型缺氧表现,其机制是什么,四、失血性休克实验目的复制兔失血性休克模型。观察兔在失血性休克时的表现及微循环变化。抢救失血性休克。探讨失血性休克的发生机制。实验对象健康成年兔体重,kg。器材与药品手术器械(手术刀止血钳眼科剪眼科镊手术镊等)输血输液装置中心静脉压测试装置微循环观察装置气管插管动脉套管静脉导管输尿管导管记滴器温度计注射器(mlmlml)。,氨基甲酸乙酯溶液生理盐水微循环灌流液肝素溶液。步骤与观察取兔一只称重后耳缘静脉麻醉。将麻醉的兔仰卧位固定在兔台上行气管插管术、左侧颈总动脉和右侧颈外静脉插管术。经耳缘静脉注入肝素溶液(mlkg)将气管插管与呼吸描记装置连接。将动脉插管接上三通管一侧与血压描记装置连接描记血压另一侧连上放有肝素(约g)的ml注射器并暂时夹闭导管以备放血用。将颈外静脉插管连接水减压计的细塑料导管(导管内充满含肝素生理盐水)。导管的外端用三通管连上输液瓶和水减压计用以测中心静脉压和输液。在测压前阻断减压计侧管使导管与输液瓶相通缓慢输入生理盐水(滴~滴,min)保持静脉通畅。行输尿管插管术。用记滴器记录每分钟排尿的滴数。在右侧腹直肌外缘作长cm纵行的中腹部切口钝性分离肌肉打开腹腔后推开大网膜找出一段游离度较大的小肠肠袢轻轻从腹腔拉出放置在微循环恒温灌流盒内用显微镜观察肠系膜的微循环。放血前观察动物的各项生理指标包括一般情况、皮肤粘膜颜色、肛温、血压、呼吸、心率(快放记录纸)、中心静脉压、尿量、肠系膜微循环等并作记录。附:中心静脉压的测量方法从颈外静脉插入静脉导管应插到上腔静脉入右心房入口处(相当于锁骨下cm~cm)插入导管长度为cm~cm并经三通管与输瓶和水检计相连。测压前使输液瓶内生理盐水灌满水检压计检压计""点刻度与心脏水平一致。测压时应阻断与输液瓶相通的侧管使水检压计与静脉导管相通观察水检压计内液面逐渐下降到某一刻度时不再下降此时液面随呼吸上下波动读取此时的液面刻度即中心静脉压。测完压力后再使检压计内充满生理盐水然后阻断与检压计相通的侧管使输液瓶与静脉道管相通维持慢速输液(滴~滴,min)维持道管通畅。附:肠系膜微循环的观察向恒温水浴灌流盒内注入的灌流液(台氏液加入明胶配成)。选择一段游离度大的小肠袢从腹腔内拉出后放入恒温灌流盒的水浴槽内使肠系膜均匀地平铺在有机玻璃凸形观察环上压上固定板调整灌流盒的液面使液面刚覆盖过肠系膜用透射光源或侧射光源在生物显微镜下观察。在镜下选好视野分清肠系膜各种血管包括动脉、静脉和毛细血管(仅能通过一个红细胞的血管)。观察血流速度血管口径(可用测微器测定)及视野下某一固定区域内毛细血管管袢数目找出标记血管以便固定视野作动态的前后比较也可用显微镜电视进行动态观察。打开颈总动脉插管与注射器相连的侧管使血液从颈总动脉流入注射器内一直放血至血压降到kPa(mmHg)时调节注射期内放出的血量使血压稳定在低水平上。使血压维持在kPa~min观察注射器中血量的增减失血期间动物各项生理指标(同步骤)改变以及肠系膜微循环改变。停止放血将注射器内的血液注入输液瓶内快速从静脉输回原血和失血量等量的生理盐水(滴,min)进行抢救输血、输液再复查动物的一般情况及各项生理指标和微循环是否恢复正常。可根据休克的病理生理改变自行设计抢救方案再观察抢救效果。注意事项麻醉要深浅适度以免因疼痛刺激导致神经源性休克。尽量减少手术出血。牵拉肠袢要轻以免引起创伤性休克。动脉套管和注射器中操作前应加一定量的肝素。静脉导管一经插入应立即缓慢滴注生理盐水。本实验因手术较多宜几个人分工协作以保证实验成功率。思考题兔失血性休克模型怎样制备,失血性休克时兔有哪些表现,微循环有什么变化,失血性休克发生主要机制是什么,五、肝性脑病【实验目的】、掌握氨中毒复制肝性脑病动物模型的方法。、探讨氨在肝性脑病发生机制中的作用。【实验原理】肝性脑病是继发于严重肝病的神经精神综合征。有关肝性脑病的发病机制有很多学说其中之一是氨中毒学说。该学说认为由于肝细胞严重受损使血氨生成增多而清除不足时可使血氨增高。增多的血氨通过血脑屏障进入脑组织通过干扰脑的能量代谢使脑内神经递质发生改变以及抑制神经细胞膜等作用引起脑的功能障碍病人从而出现相应的症状和体征。本实验通过肝大部分结扎的方法人为地阻断肝脏的血流造成肝细胞功能急性损伤在此基础上再经消化道输注复方氯化铵溶液使血氨水平明显升高从而出现抽搐、昏迷等类似肝性脑病的临床症状。【实验对象】家兔【器械与药品】常规手术器械兔固定台ml注射器细导尿管棉线普鲁卡因复方氯化铵溶液(含氯化铵碳酸氢钠葡萄糖)生理盐水【步骤与方法】、取家兔一只称重后仰卧位固定在兔台上剪去腹部正中的被毛沿上腹部中线用普鲁卡因做局部浸润麻醉。、自胸骨剑突下沿腹正中线作一长约~cm左右的切口分层局麻钝性分离皮下组织沿腹白线剪开腹壁打开腹腔暴露肝脏。用左手指腹向下轻压肝脏膈面可见在肝与膈肌之间有一薄而透明、呈三角形的镰状韧带小心将其剪断以增加肝脏的游离度。观察正常的肝脏颜色探查家兔肝脏的叶数。、急性肝功能不全动物模型的制备肝大部结扎:棉线用生理盐水浸湿后沿肝左外叶、左中叶、右中叶和方形叶之根部围绕一周并结扎以阻断大部分肝血流造成家兔急性肝功能不全。由于右外叶和尾状叶之间门脉血管为独立分支不会同时被结扎因而得以保留。待上述肝叶变成暗褐色后用眼科剪在已结扎的肝叶上剪一小口如无明显渗血说明肝大部结扎成功否则就要重新结扎。、十二指肠插管:沿胃幽门向下找出一段十二指肠在肠管下方血管稀疏处用止血钳穿透肠系膜并穿两根线备用。用眼科剪在肠壁上剪一小口将细导尿管顺远胃端方向插入肠腔约cm直接连肠管一起结扎固定防止插管脱落。近胃端也应用线结扎以防胃内容物流出。然后将肠送回腹腔内细导尿管另一端置于腹腔之外用止血钳夹住腹壁关闭腹腔。、观察、记录家兔的一般情况、呼吸、角膜反射、四肢肌张力及对刺激(敲打兔台或用针刺)的反应。、制备肝性脑病动物模型:用注射器每间隔分钟向十二指肠插管注入复方氯化铵溶液ml仔细观察家兔呼吸、肌张力等指标的变化当出现全身性抽搐时停止注射。停止注射。记录出现痉挛的时间和所灌注复方氯化铵溶液总量并计算每公斤体重的用量(kgml)。、对照组:另取家兔一只称重后固定于兔台上腹部正中切口打开腹腔行肝大部结扎及十二指肠插管术后每隔分钟向十二指肠内注入ml生理盐水观察动物有无异常并与注入复方氯化铵溶液的实验家兔进行比较分析。【注意事项】、游离肝脏和剪破镰状韧带的动作应准确、轻柔以免肝叶破裂出血和损伤膈肌造成气胸结扎肝叶应尽量靠近根部肝门处以防拦腰结扎肝叶造成出血结扎线松紧要适度过紧可能造成肝叶撕裂而出血过松达不到阻断血流的目的。、十二指肠插管要插入一定深度必须牢固固定因家兔并为全身麻醉以防实验中家兔挣扎或剧烈抽搐时插管滑脱复方氯化铵溶液漏入腹腔。、关闭腹腔前检查液体注入管道是否通畅有无渗漏。(先推注ml后再关闭腹腔)、动物经输入一定量氯化铵后一般会出现抽搐但由于动物未做全身麻醉实验期间可能出现挣扎误判为抽搐。故实验中要注意与氨中毒抽搐的鉴别。【思考题】、从肠道注入复方氯化铵溶液为什么可使家兔的血氨升高,、灌注复方氯化铵溶液后家兔的呼吸如何变化,如何解释这些变化,、家兔氨中毒后发生昏迷的机理是什么,、给家兔体内注入复方氯化铵溶液后,家兔出现痉挛的机制是什么,、肠道灌注生理盐水的家兔是否出现异常表现,其实验结果有何意义,、为什么本实验注入的是复方氯化铵制剂,、你对本实验的实验设计思路、方法与步骤安排及救治原理设计等有什么更好的想法与建议,六、高钾血症【实验目的】、掌握家兔高钾血症模型的复制方法、观察高钾血症家兔心电图变化的特征、了解血钾升高后对心肌细胞的毒性作用、通过实验进一步了解高钾血症产生的原因、机理和抢救措施并比较各抢救治疗方案的效果。【实验原理】血钾浓度升高可对心肌细胞产生毒性作用干扰正常心肌细胞的电生理活动引发多种心律失常尤其是心室纤颤和心跳骤停。本实验旨在通过静脉给钾复制高血钾症通过观测心电图变化了解高血钾症对心脏的影响。【实验对象】家兔(雌雄不限)【器材与药品】,乌拉坦生理盐水,及,氯化钾生理盐水溶液,碳酸氢钠溶液,氯化钙溶液,葡萄糖溶液婴儿秤兔手术台BL生物实验系统多媒体心电针形电极输液装置一套手术器械一套气管插管,ml、ml、ml注射器。【步骤与方法】l、称重、麻醉和固定动物家兔称重后经耳缘静脉缓慢推注,乌拉坦(ml,kg))行全身麻醉仰卧位固定于兔台上。、心电描记:标II导联导线连接的方法:在动物四肢远端显露部位分别用金属注射针头刺入皮下(不能刺入肌肉以防止肌颤的干扰)进针约cm。按右前肢(白)右后肢(黑)左后肢(红)的顺序联接电极另一端连接计算机的任一通道。打开BL(系统在―输入信号‖菜单中相应通道选中―心电‖启动实验描记实验前正常心电图观察心电波形:区分P、QRS主波波群以及T波。观察记录输入氯化钾前的心电。观察过程中做好标记如:―正常‖、―注射,KCI第一次‖等以便于比较分析。、颈部手术:()气管切开术()颈外静脉插管术:缓慢输入生理盐水(,滴,min)以保持管道通畅、高钾血症的复制(耳缘静脉推注法)以lml,min速度经耳缘静脉缓慢推注,氯化钾溶液lml,kg间隔分钟再推注同等剂量氯化钾共次。然后每间隔min推注,氯化钾溶液ml,kg共次。注射氯化钾的过程中注意观察心电图波形的变化规律。观察到高血钾的心电图异常改变(高尖T波P波低平、增宽QRS波群低压变宽出现心室扑动或颤动)后立即停止注射并开始实施抢救措施。、高钾血症的抢救在滴注氯化钾生理盐水溶液之前必须选择和准备好抢救药物包括:()单独用,葡萄糖溶液静脉缓慢滴注(),碳酸氢钠ml,kg快速静脉滴注严重者可缓慢静脉注射(),氯化钙ml,kg缓慢静脉推注。事先选择好耳缘静脉输注通道在心电图出现典型高血钾改变后立即实施抢救通过耳缘静脉快速注入抢救药物。如果秒内无法输入抢救药物救治效果欠佳。实施各项抢救项目同时观察心电图恢复状态。、致死作用观察当心电图基本恢复正常后迅速打开胸腔暴露心脏肉眼直接观察心脏活动情况。静脉推注致死剂量的,氯化钾(ml,kg)边注射边观察心电波形的改变出现室颤或成一直线时停止注射观察心室纤颤及心脏停搏时的状态。【实验结果记录】心电图变化特点注射前注入KCl严重心律失常NaHCO溶液抢救CaCl溶液葡萄糖溶液KCl致死作用观察【注意事项】、动物麻醉深浅要适度麻醉过深易抑制呼吸过浅时动物疼痛则易引起肌肉颤动对心电图记录造成干扰。、保持静脉导管的通畅确保各种液体能及时准确地输入。、针型电极剌入部位要对称位于皮下导线避免纵横交错实验台上的液体要及时擦拭干净。由于动物的个体差异有时T波会融合在ST段中而不呈现正向波很难观察到典型的高尖T波需要更换动物。若记录心电图时出现干扰信号应及时找出原因并排出干扰。、严格控制推注KCI溶液的浓度、速度必须缓慢、匀速推注要随时观察各项指标的变化。当各项指标急剧变化时应减慢速度。如发现动物突然挣扎或呼吸急促要立即停止注射。防止滴入速度太快导致动物突然发生心室纤颤而死亡动物对注入氯化钾溶液耐受性有个体差异有的动物需注入较多的氯化钾才出现异常心电图改变遇到这种情况时应适当调整注入氯化钾的浓度和间隔时间。、电极用毕用酒精擦净以保持良好的导电状态。【讨论思考题】l、血钾升高会出现哪些心电图变化发生机制是什么用相关理论加以说明。、分析你所选择的药物抢救高钾血症的机制。它们是否都能降低血钾的浓度、严重高钾血症使心脏停搏在何种状态为什么

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