对流动分析烟草中纤维素酶解

对流动分析烟草中纤维素酶解 --------------------------------------------精品文档 Word可编辑 值得收藏------------------------------------------------ 对流动分析烟草中纤维素酶解 /h1 -- -- 本站首页 免费课件 免费试题 整册 教案 中职数学基础模块教案 下载北师大版¥1.2次方程的根与系数的关系的教案关于坚持的教案初中数学教案下载电子教案下载 教育资讯 计划总结 英语角 幼儿教育 文书写作 海量教案 免费 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 1 ----------------------------------------------------精品文档 值得收藏----------------------------------------------------------- --------------------------------------------精品文档 Word可编辑 值得收藏------------------------------------------------ 网站地图 设为首页 收藏本站 语文科 数学科 英语科 政治科 物理科 化学科 地理科 历史科 生物科 中考备战 高考备战 高 考试题 教师业务能力考试题中学音乐幼儿园保育员考试题目免费下载工程测量项目竞赛理论考试题库院感知识考试题及答案公司二级安全考试题答案 中考试题 教学论文 作文园地 2 ----------------------------------------------------精品文档 值得收藏----------------------------------------------------------- --------------------------------------------精品文档 Word可编辑 值得收藏------------------------------------------------ 教学论文 经济论文 理工论文 管理论文 法律论文 行政论文 艺术论文 医学论文 文史论文 农科论文 英语论文 课程改革 教育法规 教育管理 家长频道 您现在的位置:3edu教育网免费论文农科论文农科论文正文3edu教育网,百万资源,完全免 费,无需注册,天天更新～ 3 ----------------------------------------------------精品文档 值得收藏----------------------------------------------------------- --------------------------------------------精品文档 Word可编辑 值得收藏------------------------------------------------ 对流动分析烟草中纤维素酶解 纤维素是烟草中主要的细胞壁物质,其含量高低直接影响烟叶的品质。低等级烟叶由于纤维素含量较高,其烟气会产生强烈的刺激性、呛咳、涩口、枯焦气,因此,测定烟草中的纤维素,对于评价烟叶品质具有重要意义。传统的测定方法主要采用稀酸、稀碱与样品依次共煮后用有机溶剂处理,再经烘干后称重,这种方法操作繁琐,费力耗时,且由于操作人员的技术差异会带来很大的误差。近年来,近红外(NIR)光谱分析技术也被用于烟草中纤维素含量的测定,但是因其数据模型的建立需要大量的数据支撑,其应用受到一定的局限。根据纤维素水解后生成葡萄糖的性质,采用酶解纤维素得到葡萄糖,然后利用流动分析仪检测还原糖含量,可计算得到纤维素的含量,而且酶水解具有专一性和高效性,流动分析仪在行业内的应用也比较广泛,因此,建立测定烟草中纤维素含量的流动分析法,可为评价烟叶的品质提供技术支持。 1材料与方法 1.1材料、试剂与仪器2009年初烤烟叶样品17个(川渝中烟工业公司提供)。冰醋酸、柠檬酸、柠檬酸三钠(AR,重庆川东化工有限公司化学试剂厂);葡萄糖、氯化钙、氢氧化钠(AR,重庆北碚化学试剂厂);纤维素酶(BR,活力15000DU,国药集团化学试剂有限公司);聚乙氧基月桂醚、对羟基苯甲酸酰肼(AR,荷兰Skalar公司)。SkalarSan++流动分析仪(荷兰Skalar公司);AX504分析天平(感量:0.0001g,瑞士MettlerToledo公司);恒温摇床(中国科学院武汉科学仪器厂);循环水真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);G3玻璃砂心漏斗(长春市玻璃仪器厂)。 1.2样品处理和分析准确称取0.25g40目烟粉,置于100mL锥形瓶中,加入25mL5%醋酸溶液,摇床振荡萃取30min,萃取出样品本身含有的水溶性糖,用G3漏斗过滤,滤渣用蒸馏水冲洗3次,每次50mL;将滤渣转移到100mL锥形瓶中,加入60mL含有0.25g纤维素酶的柠檬酸/柠檬酸三钠缓冲溶液(pH4.7),然后放入37?恒温摇床水解24h;水解结束后将样品冷却至室温,过滤,用蒸馏水将滤液定容至100mL,利用流动分析仪测定样品液中的葡萄糖,测得葡萄糖含量乘以转 4 ----------------------------------------------------精品文档 值得收藏----------------------------------------------------------- --------------------------------------------精品文档 Word可编辑 值得收藏------------------------------------------------ 换系数0.9(由纤维素水解方程式计算得到)即得纤维素含量。 2结果与讨论 2.1酶解条件的选择 2.1.1缓冲溶液用量对纤维素水解的影响准确称取0.25g烟粉样品5份,按照1.2的方法除水溶性糖,然后分别加入固定纤维素酶量(0.25g纤维素酶)的缓冲溶液40,50,60,70,80mL,在固定温度(37?)条件下水解24h,纤维素含量的测定结果如图1所示。由图1可知,随着缓冲液体积的增大,纤维素测定量也逐渐升高,当缓冲溶液用量为60mL时,达到最高值,说明此时纤维素水解完全;当缓冲溶液用量大于60mL后,纤维素测定量逐渐降低,这可能是由于缓冲溶液用量过大,导致了酶浓度降低,酶不能与底物充分接触,从而使酶解效果变差。因此,选择缓冲液用量为60mL。 2.1.2酶用量对纤维素水解的影响在缓冲液用量为60mL、其他条件不变的情况下,分别考察酶用量为0.05,0.10,0.15,0.20和0.25g时的酶解效果,结果如图2所示。由图2可知,当酶用量为0.20g时,纤维素测定量最高,考虑到生物酶较容易部分失活,为保证纤维素水解完全,所以确定酶用量为0.25g。 2.1.3温度对纤维素水解的影响在缓冲液用量为60mL和 下的水解效果,结果如图3所酶用量为0.25g的情况下,分别考察纤维素在30,35,40,45和50? 示。由图3可知,当温度35?时,纤维素水解不完全,测定量较低;当温度40?时,纤维素测定量降低,这可能是因为温度过高导致酶失活,使纤维素水解不完全;较适宜的水解温度为35~40?,实验选择37?。 2.1.4时间对纤维素水解的影响在缓冲液用量为60mL、酶用量为0.25g和水解温度为37?的情况下,分别水解20,22,24,26和28h,结果(图4) 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,24h后,纤维素水解完全,所以确定水解时间为24h。 2.2工作曲线与检测限准确称取2.2009g葡萄糖,用蒸馏水溶解并定容至100mL,摇匀,得 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 储备液。移取1,2,3,4,5mL标准储备液,分别用蒸馏水稀释并定容至100mL,摇匀,即得葡萄糖系列标准溶液,浓度分别为0.2,0.4,0.6,0.8和1.0mg/mL,相当于纤维素0.18,0.36,0.54,0.72,0.90mg/mL。用流动分析仪测定标准溶液中的葡萄糖含量,并对电信号响应值Y(峰高,DU),与其浓度X(纤维素含量,mg/mL)进行线性回归分析,得其工作曲线回归方程为:Y=15893.3X+2117.5,r=0.9998。可以看出,纤维素在0.18~0.90mg/mL浓度范围内,工作 5 ----------------------------------------------------精品文档 值得收藏----------------------------------------------------------- --------------------------------------------精品文档 Word可编辑 值得收藏------------------------------------------------ 曲线线性良好,适合于定量分析。通过测定空白试样,测得纤维素的检测限为0.11mg/mL。 2.3 精密度和回收率采用本方法对烟草样品的纤维素分别测定6次,测定量分别为 125.8,120.7,126.9,127.3,126.2和125.1mg/g,相对标准偏差(RSD)为2.40%,说明本方法的重复 性较好。在脱糖烟草样品中加入葡萄糖,测定其回收率,结果如表1所示。纤维素的回收率为 96.7%~103.8%,说明本方法的准确性较高。 2.4与经典方法比较分别用本方法和经典方法测 定16个烟草样品的纤维素含量,结果如表2所示。通过对两组数据进行配对样品t检验,发现 二者无显着性差异,说明该方法适合于烟草中纤维素含量的检测。 3结论 确定了流动分析法 测定烟草中纤维素水解条件为:缓冲溶液60mL,纤维素酶0.25g,水解温度37?,水解时间24h; 与经典方法相比,该方法具有重复性好、回收率高、操作简便等优点,适合于批量烟草样品中 纤维素含量的快速分析。 6 ----------------------------------------------------精品文档 值得收藏-----------------------------------------------------------