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多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测.doc

多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测.doc

上传者: 李江丽 2017-12-22 评分 0 0 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测doc》,可适用于综合领域,主题内容包含多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测第卷第期年月生态毒理AsianJournalofEcotoxicolog符等。

多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测第卷第期年月生态毒理AsianJournalofEcotoxicologyVoNoSep多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测詹翠琼,黄絮洁,方展强,马广智,姚静华南师范大学生命科学学院,广州摘要:为探讨利用孔雀鱼(Poeciliareticulata)卵黄蛋白原(Vitellogenin,,tg)作为生物标志物检测环境雌激素的可行性,采用浸浴法分别使用一雌二醇(E)和多氯联苯(PCBs)对雄性孔雀鱼成鱼进行染毒,d后测定其性腺系数(GS)和肝指数(LS),并将鱼体整体匀浆进行常规聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)及磷,脂和糖蛋白特异染色分析结果表明,PCBs对雄性孔雀鱼具有雌激素效应,和E均可以诱导雄性孔雀鱼体内产生Vtg,但诱导组雄鱼GSI及LSI与对照组比较均无显着性差异(P)NativePAGE及磷,脂,糖蛋白特异性分析表明,孔雀鱼Vtg是一种富含磷,脂,糖的蛋白,具有VtgI,VtgU和VtgHI等种形式,其分子量分别为kDa,kDa和kDa雄性孔雀鱼Vtg可作为环境雌激素监测的有效生物标记物关键词:一雌二醇多氯联苯卵黄蛋白原常规聚丙烯酰胺凝胶电泳孔雀鱼文章编号:()中图分类号:X,X文献标识码:AInductionandDeterminationofVitellogenininMaleGuppies(Poeciliareticulata)afterExposedtoPolychlorinatedBiphenylsZHANCuiqiong,HUANGXujie,FANGZhanqiang,MAGuangzhi,YAOJingSchoolofLifeScience,SouthChinaNormalUniversity,GuangzhouReceivedDecemberacceptedMarchAbstract:Theeffectsofestradiol(E)andpolychlorinatedbiphenyls(PCBs)oninducingvitellogenin(Vtg)inadultmaleguppies(Poeciliareticulata)wereinvestigatedinordertotestiftheVtgcouldbeavalidbiomarkerforenvironmentalestrogensGuppieswereexposedtoEandPCBswithlOOIxg'L一andxg'LrespectivelyAfterdaysinduction,thegonadosomaticindex(GSI)andliversomaticindex(LSI)ofguppiesweremeasuredWholebodyhomogenate(WBH)ofguppieswascarriedoutbynativepolyacrylamidegelelectrophoresis(NativePAGE)andstainingofgelsforphosphoruswithmethylgreenforhpidswitllsudanblackBandforcarbohydrateswithperiodicacidschiffreagentTheresultsshowedthatVtgcouldbeinducedfrommaleguppiestreatedbyEandPCBs,whichindicatedthatPCBsandEpossessedestrogenicactivityhowever,therewerenosignificantdifferencesinGSIorLSIofmalefishbetweentreatedgroupsandcontrolgroups(P)TheVtgofguppieswascharacterizedasaphospholipoglycoproteinNativePAGEshowedthatguppieshadtypesofVtgMolecularweightsforVtgI,VtgIIandVtgIIwereestimatedtobekDa,kDaandkDa,respectivelyTherestdtsindicatedthatVtgoftheadultmaleguppiescotddbeavalidbiomarkerforenvironmentalestrogensKeywords:,estradiolpolychlorinatedbiphenylsvitellogeninNativePAGEPoeciliareticulata收稿日期:录用日期:基金项目:广东省科技计划项目(NoBNoB)华南师范大学,年度学生课外科研项目(No)作者简介:詹翠琼(一),女,学士,华南师范大学附属中学南海实验高级中学二级教师黄絮洁(),女,学士,中山市第一中学二级教师通讯作者(Correspondingauthor),TeJ:Email:fangzhqscnueducn生态毒理第卷引言(Introduction)环境雌激素(Environmentalestrogens)对水生生物的影响及对人类健康的潜在威胁正益为人们所关注多氯联苯(Polyehlorinatedbiphenyls,PCBs)是一种在环境中普遍存在的持久性有机污染物,与一雌二醇(一estradiol,E)类似,PCBs由于具有雌激素效应,现已被列入对人类健康带来危害的重要污染物(Folineta,)由于水环境中环境雌激素类物质的含量极低,使用化学分析的方法虽然可以检测,但其方法繁琐且费用成本较高,因而目前使用生物标志物快速检测环境雌激素的方法得到推崇鱼类终生生活在水中,对水环境污染物非常敏感,因此可作为检测水体环境雌激素效应的良好实验动物利用鱼类受环境雌激素(如E,PCBs等)诱导生成卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)的原理,建立起一套对环境雌激素的筛选,检测,评价体系,已成为近年来生态毒理学研究的热点之一(Sumptereta,Roubaleta,Christianseneta,李康等,邴欣等,IAeta,温茹淑等,)孔雀鱼(Poeciliareticulata)属鳝形目(Cyprinodontiformes)花鲔科(Poeeilidae)花鲔属(Poecilia),是一种小型淡水热带观赏鱼由于繁殖周期短,易饲养,对外源性激素类物质较敏感,是检测环境雌激素的理想实验鱼虽然目前利用孔雀鱼Vtg作为生物标志物检测环境雌激素的研究已有一些报道(Westereta,Torteta,Lieta,),但有关PCBs对孔雀鱼的雌激素效应以及孔雀鱼Vtg结构特点的研究报道仍然较少因此,本文的研究目的在于:)探讨PCBs是否对雄性孔雀鱼具有雌激素效应以及利用孔雀鱼Vtg作为生物标志物检测环境雌激素的可行性)初步分析孔雀鱼Vtg的结构特点,为最终建立起利用鱼类Vtg定性和定量检测水环境中环境激素的实用方法提供基础依据材料与方法(MaterialsandmethodsJ仪器和试剂DYYIH一型电泳仪和DYYIII一A型电泳槽(北京六一仪器厂),MP一C低温循环槽(上海一恒科技有限公司),VIBERLOURMAI全自动凝胶成像分析系统,国产瀑布式生化过滤器一雌二醇(Sigma公司),多氯联苯(Aroehlor公司),丙烯酰胺(天津市大茂化学试剂厂),甲叉双丙烯酰胺(Bis)(天象人生物有限公司),甲基磺酰氟(PMSF)(AmershanPharmaeia公司),高分子量标准蛋白(上海生物化学研究所)等化学试剂均为分析纯实验动物孔雀鱼(Poeciliareticulata)购自广州花地湾"花鸟鱼虫市场",为性成熟的雌,雄个体,体重()g,体长(cm在华南师范大学生命科学学院生态毒理学实验室去氯自来水中驯养周后进行Vtg诱导实验实验方法卵黄蛋白原诱导实验采用浸浴法进行诱导E母液浓度L,,乙醇助溶PCBs母液浓度gL一,丙酮助溶,配好后避光保存E和PCBs诱导实验各设个对照组(含雌,雄鱼),个诱导组(只含雄鱼)E诱导实验中,诱导组E浓度为~gL一,PCBs诱导实验中,诱导组PCBs浓度为~gL,每组各投入实验鱼尾,诱导时间为d使用L的水族箱,加入水体积为L实验过程中每周换水次,实验用水为连续曝气h的自来水,水温(~),pH为,硬度为度(德国度)每天投喂次红虫,及时清除余食和粪便每组用同样型号的微型瀑布式过滤器进行水体过滤诱导d后,制备对照组雌,雄孔雀鱼和诱导组雄孔雀鱼的整体匀浆液(为防止蛋白降解,此实验操作过程保持温度在左右),其中对照组雌性个体在整体匀浆前,去除卵巢,防止卵黄蛋白对实验的影响样品分装保存于一备用常规聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)参照邴欣等()的方法,采用分离胶和浓缩胶对样品进行非连续的聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白分子量Marker采用同样的方法与样品同时电泳来测定蛋白样品的分子量电泳后取出凝胶放入考马斯亮蓝染色液中染色过夜,再用脱色液(乙酸)脱色后用全自动凝胶成像系统拍照第期詹翠琼等:多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测卵黄蛋白原含磷,脂,糖特性的鉴定将NativePAGE电泳后的凝胶样品分别进行磷蛋白染色,脂蛋白染色和糖蛋白染色糖蛋白的检测参照Fairbank等()和Sun等()的方法进行脂蛋白的检测参照杨安钢等()的方法,将样品用蒸馏水洗涤后放人的苏丹黑B染色液中染色过夜,然后用脱色液(甲醇:乙酸:水=::)进行脱色,直至背景清晰磷蛋白的检测参照Cutting等()的方法进行,将电泳后的凝胶转人用molLCaC配制的磺基水杨酸(SSA)中固定h以上,最后用甲基绿染色液染色min,SSA脱色至背景较浅而磷蛋白条带清晰为止卵黄蛋白原的相对分子量计算经过NativePAGE和考马斯亮蓝染色,磷蛋白染色,脂蛋白染色和糖蛋白染色的结果分析后,确定Vtg的形式以及所在位置,然后根据高分子量Marker,由全自动凝胶成像分析系统的凝胶图像分析软件完成Vtg相对分子量的计算死亡率,性腺系数和肝指数检测实验过程中记录每天孔雀鱼的死亡情况,并作统计分析实验d后,每组取尾雄性孔雀鱼,分别测量其湿体重,性腺湿重和肝脏湿重,并计算出对照组,诱导组雄性孔雀鱼的性腺系数(Gonadosomaticindex,GSI),肝指数(Liversomaticindex,LSI)计算公式为:GSI()=(性腺湿重,湿体重)LSI()=(肝脏湿重,湿体重)数据统计分析采用SPSS进行统计分析,组间比较采用t检验结果(Results)E,PCBs诱导下雄性孔雀鱼死亡率,GSI和LSI实验过程中,对照组及E:,PCBs诱导组孔雀鱼的死亡率均为,存活率为表列出E:和PCBs诱导d后各组雄性孔雀鱼的体重,GSI和LSIt检验结果表明,诱导组雄鱼GSI,LSI与对照组比较没有显着性差异(P)表E,PCBs诱导d后雄性孔雀鱼的GSI和LSITableGSIandLSIofmaleguppiesafterdaysofexposuretoEandPCBs注:表中数据为平均值SD,n=NativePAGE电泳结果及磷,脂,糖蛋白分析对未经诱导的雄鱼,未经诱导并去除卵巢的雌鱼和E:诱导d的雄鱼整体匀浆样品进行NativePAGE电泳,考马斯亮蓝染色(图),结果表明,对照组雌鱼(图)和E:诱导组雄鱼(图)均有条特异蛋白带,而对照组雄鱼(图)则没有根据蛋白分子量与其相对迁移率之间的关系,得出它们的分子量约为kDa,kDa,kDa为了证明这条蛋白带就是Vtg,根据Vtg富含糖,磷酸和脂的性质,将诱导组雄鱼整体匀浆样品进行NativePAGE电泳后,分别进行磷,脂,糖染色(图)结果发现,磷蛋白(图a),脂蛋白(图一b)和糖蛋白(图c)均在蛋白图谱的同一位置出现,没有发现可以被种染色方法同kDaOkDakDal图E诱导后的雄鱼与对照组雄鱼,雌鱼整体匀浆液的NatlvePAGE图谱(:标准蛋白:未诱导的雌鱼:受E诱导后的雄鱼:未诱导的雄鱼箭头所示即卵黄蛋白原)FigNativePAGEpatternofthewholefishhomogenateofmalefishinE~treatedgroupsandmale,femalefishincontrolgroups(:marker:femalecontrol:maletreatedwithE:malecontrolarrowheadshowingVtg)生态毒理第卷abC图E诱导组雄鱼整体匀浆NativePAGE电泳后的凝胶进行磷,脂,糖种蛋白染色图谱(a:磷蛋白染色b:脂蛋白染色c:糖蛋白染色)FigTheVtgofmalefishinEztreatedgroupswascharacterizedasaphospholipoglycoproteinbyNativePAGEandstaining(a:phosphorusstainingb:lipidsstainingc:carbohydratesstaining)时染色的其他蛋白带根据以上电泳结果,可以确定这条蛋白带为Vtg由图可以看出,这条蛋白带和雌性对照组在考马斯亮蓝染色凝胶上的蛋白带相对应,由此可见,E:能够诱导雄性孔雀鱼Vtg的产生再将对照组雌,雄鱼和经PCBs诱导的雄鱼整体匀浆样品置于同一块凝胶上电泳,并经考马斯亮蓝染色和脱色(图),结果显示,经PCBs诱导的雄鱼以及对照组雌鱼的电泳图谱中也出现了条蛋白带,这条蛋白带在对照组雄鱼中没有出现,可以说明它们是雌性特异性蛋白(图)将诱导组雄鱼电泳后的凝胶分别进行蛋白的磷,脂,糖特异性染色,结果表明,磷蛋白,脂蛋白和糖蛋白均在蛋白图谱的同一位置出现相同的带,没有发现可以被种染色方法同时染色的其他蛋白带(图)由此推断,这条蛋白带为孔雀鱼的Vtg,它具有种形式:VTGI,VTGlI和VTG,根据高分子量Marker,由全自动凝胶成像分析系统的凝胶图像分析软件计算出其分子量分别是kDa,kDa和kDa由此表明:PCBs浸浴染毒同样可以诱导雄性孔雀鱼合成VtgPCBs的雌激素效应性成熟的雌鱼Vtg在肝脏中合成,通过血液IkDa,kDakDa黼lkDaml图PCBs诱导的雄鱼与对照组雄鱼,雌鱼整体匀浆的NativePAGE图谱(:标准蛋白:未诱导的雄鱼:未诱导的雌鱼:受PCBs诱导后的雄鱼箭头所示即卵黄蛋白原)FigNativePAGEpatternofthewholefishhomogenateofmalefishinPCBslreatedgroupsandmale,femalefishincontrolgroups(:marke~:malecontrol:femalecontrol:maletreatedwithPCBsarrowheadshowingVtg)abC图PCBs诱导组雄鱼整体匀浆NativePAGE电泳后的凝胶进行磷,脂,糖种蛋白染色图谱(a:磷蛋白染色b:脂蛋白染色c:糖蛋白染色)FigTheVtgofmalefishinPCBstreatedgroupsWaScharacterizedasaphospholipoglyeoproteinbyNativePAGEandstaining(a:phosphorusstainingb:lipidsstainingc:carbohydratesstaining)循环运输到卵巢,经过修饰后,成为鱼卵生长发育的营养物质卵黄蛋白雄鱼肝脏中也有Vtg基因,因而在雌激素的作用下,也能诱导肝脏合成和分泌VtgE:作为一种雌激素作用于鱼类,已被证实可引起多种鱼类Vtg的产生研究表明,无论是腹腔注射还是水体暴露,E:均能诱导性成熟的雄性鲫鱼,雄性金鱼和幼鱼产生Vtg(李康等,邴欣等,)Wester等()用E诱导第期詹翠琼等:多氯联苯对孔雀鱼卵黄蛋白原的诱导及检测孔雀鱼亦检测到Vtg的产生IJi等()研究表明孔雀鱼雄鱼血液中Vtg浓度与雌激素的作用时问,剂量成正比本实验结果表明采用浸浴法,E:和PCBs均可诱导成年雄性孔雀鱼产生Vtg,因而PCBs具有雌激素效应一些实验也证实了这一结论,如PCBs可使雄性海龟发生性逆转而变成雌性(Bergeroneta,)用PCB和PCB诱导蝌蚪直至变态发育结束,其出现明显的卵睾体和异常性腺(Qineta,)一般环境雌激素物质的雌激素效应是通过模拟雌二醇来实现的(即类雌激素效应),当PCBs进入鱼体内后,与鱼体肝脏中的雌激素受体(ER)结合,促使肝脏合成卵黄蛋白原,因此,环境雌激素物质与ER结合是影响其雌激素效应的重要因素(赵兵等,)此外,PCBs具有较强的脂溶性,脂溶性的增加也可能是造成雌激素效应增强的因素之一另一些研究结果显示,PCBs也具有抗激素活性,如暴露于PCBs和多环芳烃(PAHs)中的鱼,如硬头鳟,虹鳟,黄鳝等血浆中卵黄蛋白原的含量较低,这可能是鱼体内雌二醇含量减少的缘故(Andersonela,)由此可见,PCBs是十分复杂的一类内分泌干扰物GSI和LSI是鱼类生殖腺和肝脏生理结构及功能状况的重要参考指数,在雌激素作用下,鱼体肝脏新陈代谢增强,雌鱼Vtg基因表达增多,或使雄鱼肝脏Vtg基因开始表达,Vtg生成量增多,以致肝脏增大,LSI上升(Cardinalieta,)对雌鱼而言,其生成的Vtg通过血液运送到卵巢,使卵巢活动增强并表现为GSI的上升但对于雄鱼则使精巢活动不活跃,表现为精子数量与活力下降,交配行为减少(Bayleyeta,),精巢结构发生器质性改变(Kinnbergeta,Toftet,O),从而使GSI下降Cardinali等()以txgL的壬基酚(Nonylphenol,NP)对孔雀鱼幼鱼染毒个月,发现雌鱼LSI和GSI均显着上升:雄鱼LSI显着上升,而GSI则显着下降目前雌激素对于雄性鱼类LSI和GSI的影响还存在不同的结论Li等()研究发现E染毒使孔雀鱼雄鱼GSI明显下降,但即使长时间E:诱导,雄鱼LSI也无显着性变化Toft等()使用E和壬基酚对孔雀鱼成鱼诱导个月,发现雄鱼GSI并无显着性变化本实验以较高浓度的E:和PCBs对孔雀鱼雄鱼染毒d后,虽然可检测到雄鱼Vtg的产生,但GSI,LSI与对照组比较没有显着性差异推测原因,其一可能是因为实验用鱼为成体雄鱼(一般用幼鱼实验),其精巢已发育成熟,对雌激素作用敏感性较弱其二可能是因为染毒时问较短,仅为个月的时问(一般为个月的时间),因此E,PCBs作用于雄孔雀鱼,尽管检测到Vtg产生,但还未反映到GSI和LSI水平有关外源雌激素对雄性鱼类GSI和LSI的影响将有待进一步深入研究孔雀鱼卵黄蛋白原的检测与分析本实验通过NativePAGE测定及磷,脂,糖蛋白特异染色分析发现,孔雀鱼Vtg具有种形式,其分子量分别约为kDa,kDa和kDa这与已报道的其他硬骨鱼类的Vtg分子量(,kDa)相符(Roubaleta,)Ohkubo等()报道日本刺缎虎鱼(Acanthogobiuslavimanu~)的血浆中Vtg有种形式:VtgI和VtgI,分子量分别为kDa和kDa邴欣等()诱导金鱼(Col"assilz砌)并通过NativePAGE发现其仅有条蛋白带李康等()报道,经诱导的鲫鱼Vtg用ELISA检测后电泳只显示条蛋白带,相对分子量为kDa由此可见,各种鱼类的Vtg存在不同形式,可能介于,种之间,相对分子量也不同,大致介于kDa之间目前Vtg的电泳检测主要通过断尾采集血液样品进行但若实验鱼个体小,如孔雀鱼,斑马鱼等,则存在血量少,取血困难的问题IJi等()采用孔雀鱼血液进行纯化,电泳时是通过采集,条孔雀鱼的血液作为一个样品,技术难度比较大本实验采用孔雀鱼整体匀浆液,进行NativePAGE,并结合种染色方法同样可以检测出雄鱼被诱导而产生的Vtg这种方法重复性好,无干扰,花费少,与基于抗原抗体反应发展起来的放射性免疫测定法(Radiimmunassav,RIA),酶联免疫吸附测定法(Enzymelinkedimmunosorbentassays,ELISA),Westernblotting等方法比较,不需要根据鱼种的差别进行抗原抗体的纯化,更适用于利用Vtg进行大规模的环境雌激素的初步筛选因此本研究的结果表明,利用雄性孔雀鱼Vtg作为生物标志物监测环境雌激素是可行的综合以上实验结果表明:)与E:类似,PCBs能够诱导孔雀鱼卵黄蛋白原的产生,具有雌激素效应)对于个体较小的实验鱼,采用整体匀浆液生态毒理第卷进行电泳以检测卵黄蛋白原是一种可行的实验方法)孔雀鱼的卵黄蛋白原有种形式,VTGI,VTGII和VTGIII,其分子量分别为kDa,kDa和kD)利用雄性孔雀鱼卵黄蛋白原作为生物标志物监测环境雌激素是可行的,通讯作者简介:方展强(一),男,教授,博士生导师,主要研究方向为持久性有毒物质的水生态毒理学ReferencesAndersonMJ,OsenH,MatsumuraF,HintonDEInvivomodulationof一estradiolinducedvitellogeninsynthesisandestrogenreceptorinrainbowtrout(Oncorhynchusmykiss)livercellsbybnaphthotlavoneJToxicolApplPharmacol,:SayleyM,JacobRNielsenJRGuppysexualbehaviorasaneffectbiomarkerofestrogenmimicsJEcotoxicologyandEnvironmentalSafety,:BergeronJM,CrewsD,McLachlanJAPCBsasenvironmentalestrogens:turtlesexdeterminationasabiomarkerofenvironmentalcontaminationJEnvironHealthPersp,:BingX,RuSG,IsodaH,JiangM,WangW,WangSHTheidentificationofvitellogenininductionby一estradiolinmaleCarassiusattra~usJJournalofFisheriesofChina,():(inChinese)CardinaliM,MaradonnaF,OhvoaoI,BoaolumiG,MosconiG,PolzonettiMAM,CamevaliOTemporaryimpairmentofreproductioninfreshwaterteleestexposedtononylphenolJReproductiveToxicology,:ChristiansenLB,PedersenKL,KomgaardB,Sje~egaardBEstrogenicityofxenobioticsinrainbowtrout(Oncorhynchusmykiss)usingvivosynthesisofvitellogeninasabiomarkerJMarEnvironRes,:CuttingJA,RothTFStainingofphesphoproteinsonac~lamidegelelectropberogramsJAnalBiochem,:FairbankG,SteckTL,WalliceDFHElectrophoroeticanalysisofthemajorpolypeptideofthehumanerythrocytemembraneJBiochemJ,:FolinL,NorrgrenLPhysiologicalandmorphologicalstudiesofferalperchbeforeafterremediationofaPCBcontaminatelake:JarnsjnlJJAmbio,():KirmbergK,ToilGEffectsofestrogenicandantiandrogeniccompoundsonthetestisstructureoftheadultguppy(Poecilia~twulata)JEcotoxicologyandEnvironmentalSafety,:LiK,ZhouZL,YuJ,WangMS,YuXJDevelopmentofELISAfordetectingCarassiusnMvitellogeninJChinaEnvironmentalScience,():(inChinese)LiMH,WangZREffectofnonylphenolonplasmavitellogeninofmaleadultguppies(Poeciliareticulata)JEnvironmentalToxicology,():OhkuboN,MochidaK,AdachiS,naraA,HoflaK,NakanluraY,MatsubaraTDevelopmentofenzymelinkedimmunosorbentassaysfortwoformsofvitellogenininJapanesecommongoby(Acanthogobius)JGeneralandpVeEndocrinology:QinZF,ZhouJM,ChuSG,XuXBEffectsofChinesedomesticpolychlorinatedbiphenyls(PCBs)ongonadaldifferentiationinXehopuslaevisJEnvironPemp,:RoubalWT,LomaxDP,WillisML,JohnsonLLPurificationandpartialcharacterizationofEnglishsole(Pleuronectesvetulus)vitellogeninJCompBiochemPhysiol,lB:SumpterJP,JoblingSVitellogenesisasabiomarkerforestrogeniccontaminationoftheaquaticenvironmentJEnvironHealthPerspect,(supp):SunXT,ZhangSCPurificationandcharacterizationofaputativevitellogeninfromtheovaryofamphioxus(Branchiostomabelcheritsingtaunese)JCompBiochemphysical,B:ToilGBaatnlpESexualcharacteristicsarealteredbytartoctylphenoland一estradiolintheadultmaleguPPY(Poeareticulata)JEcotoxicologyandEnvironmentalSafety,:ToilG,BaatmpEAlteredsexualcharacteristicsinguppies(Poeciliareticulata)exposedto一estradiolandtertoctylphenolduringsexualdevelopmentJEcotoxicologyandEnvironmentalSafety,:WenRS,FangZQ,JiangSG,XuJ,MaGZDevelopmentofELISAfordetecting叩lonhellerivitellogeninJResearchofEnvironmentalSciences():(inChinese)WesterPW,CantonJH,BisschopAHistopathologlcalstudyofPoeciliareticulata(guPPY)afterlongtermhexachlorocyclohexaneexposureJAquatToxicol,:YangAG,MaoJF,YaoLBExperimentalTechnologyofBiochemistryandMoleculeBiologyMBeijing:HighEducationPress(inChinese)ZhaoB,LiuZT,XuZF,YangYBEstrogeniceffectsofphenoliccompoundsonjuvenilegoldfish(Carassiusattra~us)JActaScientiaeCiroumstantiae,():(inChinese)中文参考文献邴欣,汝少国,IsodaH,姜明,王蔚,王诗红OO一雌二醇对雄性金鱼卵黄蛋白原的诱导作用J水产,():李康,周忠良,于静,王明山,余晓君鲫鱼(Carassiusauratus)卵黄蛋白原的ELISA检测J中国环境科学,():温茹淑,方展强,江世贵,徐杰,马广智剑尾鱼卵黄蛋白原的ELISA检测J环境科学研究,():杨安钢,毛积芳,药立波生物化学与分子生物学实验技术M北京:高等教育出版社赵兵,刘征涛,徐章法,杨永滨酚类化合物对金鱼幼鱼的雌激素效应研究J环境科学,():

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