植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚比色法)
简介：
过氧化物酶(peroxisome，POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。该酶属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
Leagene植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚比色法)检测原理是以愈创木酚(又称2-甲氧基酚)作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光度计检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的过氧化物酶活性，尤其适用于检测水果中过氧化物酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
编号
名称
TE0425
50T
Storage
试剂(A): POD Lysis buffer
250ml
4℃
试剂(B): POD Assay buffer
100ml
4℃ 避光
试剂(C): POD氧化剂
4ml
RT
使用说明书
1份
自备
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
：
1、 蒸馏水
2、 研钵或匀浆器
3、 离心管或试管
4、 低温离心机
5、 水浴锅或恒温箱
6、 比色杯
7、 分光光度计
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
植物样品：取2g植物组织或水果中层果肉加入4ml预冷的POD Lysis buffer研磨或匀浆离心，留取上清液，冻存，用于过氧化物酶的检测。
血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于过氧化物酶的检测。
细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用POD Lysis buffer进行适当匀浆，离心，取上清液，冻存，用于过氧化物酶的检测。
高活性样品：如果样品中含有较高活性的过氧化物酶，可以使用POD Lysis buffer进行恰当的稀释。
2、 配制POD Assay buffer工作液：取适量POD氧化剂和POD Assay buffer，POD氧化剂：POD Assay buffer按一定比例混合，即为POD Assay buffer工作液，即配即用，不宜久置。
3、 加样：按照下
表
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设置对照管、测定管，注意：对照管、测定管中为同一待测样品，但对照管中为提前加热煮沸的样品。溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的POD活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管，求平均值。
加入物(ml)
对照管
测定管
待测样品
0.05
0.05
POD Lysis buffer
1.45
1.45
POD Assay buffer工作液
1
1
4、 POD检测：立即以分光光度计，比色杯光径1.0cm，以对照管为对照，测定测定管的吸光度(A测定0)。准确孵育后，立即加入POD终止液终止反应(备选
方案
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)，以分光光度计，比色杯光径1.0cm，以对照管为对照，测定测定管的吸光度(A测定1)。注意：加入POD终止液终止反应不是必须步骤，可准确孵育后直接以分光光度计，比色杯光径1.0cm，以对照管为对照，测定测定管的吸光度(A测定1)。
计算：
POD活性单位的定义：在该实验条件下，每1min吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。
组织样本POD(U)={(A测定1-A测定0)×VT}/(W×VS×0.01×t)
式中：A测定1=孵育3min后测定管的吸光度值
A测定0=加入POD Assay buffer工作液后立即测定的测定管吸光度值
W=组织样本的重量(g)
VT=提取酶液的总体积(ml)
VS=测定时所用酶液体积(ml)
液体样本POD(U)=(A测定1-A测定0)/(0.01×t)
式中：A测定1=孵育3min后测定管的吸光度值
A测定0=加入POD Assay buffer工作液后立即测定的测定管吸光度值
t=反应时间
注意事项：
1、 待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、 POD酶液提取时，注意低温操作，防止酶活性，亦可-20℃保存。
3、 以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。
4、 POD氧化剂和POD终止液具有一定腐蚀性，请小心操作。
5、 POD氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。
6、 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
编号
名称
CC0007
磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CM0004
LB培养基
DC0032
Masson三色染色液
DF0135
多聚甲醛溶液(4% PFA)
NR0001
DEPC处理水(0.1%)
PS0013
RIPA裂解液(强)
TC1167
尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
相关：
浙公网安备 33021202002483