【doc】HPLC法测定烟草肥料中己酸二乙氨基乙醇酯柠檬酸盐

【doc】HPLC法测定烟草肥料中己酸二乙氨基乙醇酯柠檬酸盐 HPLC法测定烟草肥料中己酸二乙氨基乙 醇酯柠檬酸盐 安徽农业科学.Journalat"AnhuiA.Sci.2008.36(3):848.852责任编辑李玮责任校对李玮 HPLC法测定烟草肥料中己酸二乙氨基乙醇酯柠檬酸盐 李卫华,黄晓书,李鹏坤,卫丽,谢惠玲 (河南农业大学,河南省农业生物技术与工程技术重点学科开放实验室,河南郑州450002) 摘要用高效液相色谱法测定烟草肥料中己酸二乙氨基乙醇酯柠檬酸盐值(DA.6)含量.先用超纯水将样品溶解后,在AQ-C18(150n'En x4.6millID,5肿)色谱柱上以pH值3.0的磷酸缓冲液为流动相,以O.8ml/min的流量洗脱,用二极管阵列检测器在紫外205nm对 DA-6进行检测.结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,DA-6在O.002一O.200mg/m]呈良好线性,相关系数R=O.998. 关键词烟草;肥料;己酸二乙氨基乙醇酯柠檬酸盐;液相色谱法;测定 中图分类号$572文献标识码A文章编号0517—6611(2O08)?一00848—01 Dc0fDA-6.mr功Fertilizer?噎tlIHi曲l:~'fO/UqI埘'】?r0m咄0phy UWei-lHmetal(KeyDisciplineandOpenI_~omtoryofAgriculturalBiologicalandEI1giIT echnique,HeronInstituteofHigherL朗?ling,Heron AgrieulruralUniversity,e玎?l,Heron450002) AbsI喇AnanalyticalmethodforthedeterminationofDA.6witIlHighPeffon'~nee"Chr~tgmphywl 册developed.DA-6w鹅is~latedfDn1鼹m— plebypurewater.1lleehron~tgrophieseparationw鹅carriedonwithan_A~-c18(150m×4.6nellID,5~m)eolunm,developedwithpurewatercon— t~inlngnb0snborjc~eid(pH3.0)ataflowrateof0.8ml/minandmonitoredwitIlaPIAdetector atUV205m.ThemethodwaslinearovertIlec0noerIml— tionrangeof0.O0—0.20onw/m1. ywDrdsTobacco;Fertilizer;DA-6;;Detection 己酸二乙氨基乙醇酯柠檬酸盐(oA-6)作为一种作物生 长调解剂,已用于多种农作物生产_1J,但目前还没有简便 的检测方法,为此,笔者探索并建立了用高效液相色谱仪快 速检测DA.6的方法.并对烟草肥料中DA.6含量进行测定. 1材料与方法 1.1仪器与试剂Waters2~5高效液相色谱仪(美国Wa. ters),2996二极管阵列检测器(美国Waters),Empower色谱工 作站(美国Waters),Nilli.Q纯水机(美国Nillipore),AQ.C18 (150n~n×4.6millID,5肿)色谱柱(上海月旭),超纯水 (18MQ,自制),磷酸(GR,北京化工),DA.6(郑州农达公司 赠),烟草开片肥(市售). 1.2色谱条件在AQ.C18色谱柱上,以pH值3.0磷酸溶 液为流动相,色谱柱温度为室温,进样10,以0.8ml/min的 流量洗脱,在波长UV205nnl检测. 1.3标准曲线称取0.1000gDA.6对照品,用超纯水溶解 定容至50ml,此系浓度为2.000mg/ml的储备液.将储备液 稀释,配得浓度为0.002,0.010,0.020和0.200mg/ml的工作 溶液,作工作曲线.分别取10进行HPLC分析. 1.4样品配制称取0.1000g样品,用超纯水溶解并定容 至100ml,浓度为1.0mg/ml;取10ml定容稀释至50rT1l,浓度 为0.200mg/ml;取10进行HPLC分析. 2结果与分析 2.1流动相的选择在C18色谱柱上.以甲醇.水(40+ 6o),甲醇.水(20+8o),甲醇.水(8+92),不同pH值的乙酸.水 等都不能分离DA.6.当把流动相调整为pH3.0磷酸溶液时 获得很好分离,DA.6的色谱峰有很好的对称性(图1). 2.2溶剂对样品的影响用甲醇作溶剂,色谱图上标准品 呈现多个峰且不能很好分离;用纯水作溶剂,色谱图上仅有 1个DA.6组分峰.可能是DA.6在甲醇中发生了反应. 作者简介李卫华(1982一),男,河南鄢陵人,硕士研究生,研究方向 生物化学和仪器分析.*通讯作者. 收稿日期2007-07—19 2.3线性考察取对照溶液按上述色谱条件分析,以对照 品质量浓度(mg/m1)为横坐标,响应对照品峰面积(*s)为 纵坐标进行线性回归,方程y=0.295X一0.272,相关系数R =0.998,表明DA.6在0.O02,0.200mg/,~内线性关系良好. 毫 暮 图1DA_6色谱图 里.1DA_6dl删叫吐0锄 图2样品中1)A-6色谱图 . 2am哪均t0g唧0fDA_6轴II叫e 2.4系统适应性取上述质量浓度为0.020mg/ml的对照品 溶液连续进样6次,测得面积的相对标准差RSD为0.298%. 容量因子为5.7,拖尾因子为1.02,理论塔板数为 51937/m.用二极管阵列检测器对DA-6相应色谱峰的不同 位点进行扫描(200,400nn1),样品的紫外光谱与标准品的紫 外光谱一致.(下转第852页) 852安徽农业科学2008生 乙醇回流提取4次,每次60min. 表1川西獐牙菜提取正交设计因素水平 "I]lble1Facto~andlevelsin0Itll蠼=0IIaldegl~aonextractionofSweala- sotllFranch 表2川西獐牙菜提取正交设计结果 "l~JJle2Resullsoforaaogonaldesi~aonextl'a~onofSwealamussotiiFranch 2.2验证实验根据实验结果,按最佳优化条件:l5倍量 75%乙醇回流提取4次,每次60min,进行3次实验,测得提 取物中浸膏收率为36.72%,芒果苷质量分数为1.91%,与正 交实验最佳值非常接近, 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 该方法可行. 3讨论 文献报道_5_5,以獐牙菜山酮苷为指标的抱茎獐牙菜的最 佳提取工艺为8倍量80%乙醇回流提取2次,每次2h,而笔 者以川西獐牙菜中山酮类有效成分和高含量成分——芒果 苷作指标,得最佳提取条件为l5倍量75%乙醇回流提取4 次,每次60min,实验结果接近.在工业应用中,75%乙醇不 仅可降低工业生产成本,还可有效抑制细菌的生长;有效地 缩短提取时间,增加提取次数,更有利于有效成分的溶出. 黄秀梅等_6_6回流提取川西獐牙菜,单独以芒果苷为指 标,得出最佳工艺为6倍量75%乙醇回流提取3次,每次2h. 在实验过程中发现:第1次提取加入溶剂后,干燥的药材会 吸收大量的溶剂,且乙醇浓度越小的溶剂越容易被药材吸 收,而工业生产惯于将药材浸泡过夜后提取,这样将导致剩 余的提取液大量减少,所以过少的溶剂量不利于有效成分充 分溶出.该实验的最佳溶媒比为l5倍,在工业放大实验中 较6倍量更可取. 龙胆苦苷和芒果苷均为葡萄糖苷,用反相液相色谱检测 其二者色谱保留时间接近.同时,笔者采用星点设计一效应 面法对川西獐牙菜提取条件进行优化的实验表明,以龙胆苦 苷质量分数和浸膏收率为指标得最佳工艺为86%乙醇l2.4 倍量回流提取3次,每次63min,与得出的最佳工艺条件相 近, 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 实验设计因素的水平合理,结果可靠. 实验结果表明,提取时间对两个指标值没有显着影响, 预实验时比较了冷浸和回流O,2…468h的指标值,冷浸与0 h相差较大,而后5者差异不明显.可能的原因是:提取过程 为先加入溶剂浸泡药材过夜,水浴加热,以溶剂沸腾时开始 计时,经过这样一个浸泡和逐渐升温的过程后,指标成分已 经基本上溶出,导致回流提取时间对指标值没有显着影响. 缩短提取时间,可以节约工业成本,但同时也要求在放大生 产时,浸泡和回流提取过程尽可能地搅动,使药材充分接触 溶剂. 参考文献 [1]中国科学院西北高原生物研究所.藏药志[M].西宁:青海人民出版 社,1991. [2]党合群,王志平,张杰.藏茵陈制剂及其有效成分对实验性肝损伤的药 理实验研究[J].青海医药,m83(5):20—23. [3]中国医学科学院药用植物资源开发研究所.中药志[M].北京:人民卫 生出版社,1988. [4]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:4t~m业出版社, 20晒. [5]田薇,张喜民,陈朝辉,等.正交试验优选獐牙菜的提取工艺[J].中草 药,2007,38(4):545—548. [6]黄秀梅,邢素丽,吉元德.正交设计法研究藏茵陈的提取工艺[J].中国 药学志,l994,29(8):491—492. (上接第848页) 2.5样品测定对市售烟草开片肥抽样测定(n=5),分离 结果表明(图2),DA.6含量为(1.154?O.419)g/kg. 3讨论 以甲醇.水体系作流动相不能分离DA.6,与用甲醇作溶 剂溶解后不能分离DA.6有相似性,可能是在甲醇作用下发 生了反应.以纯水作溶剂溶解样品,用pH值3.O磷酸溶液 作流动相在AQ.C18色谱柱上能很好地分离DA一6. 参考文献 [1]梁广坚,李芸英,邵玲.DA-6和BR+GA-3对菠菜生长和光合速率的影 响[J].园艺,1998,25(4):356—360. [2]刘祥英,柏连阳.DA-6缓解胺苯磺隆对后茬水稻伤害的作用[J].现代 农药,2005,4(3):31—32. [3]张子龙.DA-6浸种对水稻幼苗生长及抗寒性的影响[J].贵州农业科 学,2001,29(4):14—16.