氨基糖甙类抗生素抗分枝杆菌作用的研究

氨基糖甙类抗生素抗分枝杆菌作用的研究 氨基糖甙类抗生素抗分枝杆菌作用的研究 第17卷第12期 2007年6月 中国现代医学杂志 ChinaJournalofModernMedicine Vo1.17No.12 Jun.2007 文章编号:1005—8982(2007)12—1507—03 氨基糖甙类抗生素抗分枝杆菌作用的研究 李国利,张灵霞 (解放军总医院第二附属医院结核病研究所,北京100091) 摘要:目的研究氨基糖甙类抗生素抗分枝杆菌的作用.方法分别测定8种氨基糖甙类抗生素对20种 分枝杆菌(包括结核,牛分枝杆菌和18种非结核分枝杆菌)的试管内最低抑菌浓度.结果不同药物显示不同 的试管内抗菌作用谱.结论氨基糖甙类抗生素是临床非结核分枝杆菌病治疗可选择的药物. 关键词:氨基糖甙类抗生素;分枝杆菌;最低抑菌浓度 中图分类号:R961文献标识码:B Studyoneffectofaminoglycosideantibiotics againstmycobacteria LIGuo—li,ZHANGLing-xia (TuberculosisResearchInstitute,theSecondAffiliatedHospital ofGeneralHospitalofPLA,Beijing10091,P.R.China) Abstract:【Objective】Toevaluatetheeffectofeightaminoglycosideantibioticsagainstmycobacteria.【Meth- ods】 Minimalinhibitoryconcentration(MIC)ofeightaminoglycosideantibioticsagainsttwenty mycobacteriaspecies invitroweredeterminedrespectively.【Results】Thevariousdrugsshowdifferentantibacterialeffectspectrumin vitro.【Conclusion】Aminoglyeosideantibioticsareselectiondrugsinthetreatmentofnontuberculosismycobact erial diseasesclinically. Keywords:aminoglyeosideantibiotics;mycobacteria;minimalinhibitoryconcentration 分枝杆菌菌种繁多,分枝杆菌属内除结核分枝 杆菌复合群和麻风分枝杆菌外统称为非结核分枝杆 菌(nontuberculosismycobacteria,NTM),临床可见 的致病性NTM主要包括堪萨斯,鸟,胞内,猿猴,蟾 蜍,海,瘰疬,苏加,施氏,偶然,龟,脓肿分枝杆菌,机 会致病性NTM主要包括土地,不产色,次要,戈登, 亚洲,耻垢和草分枝杆菌. 近年来,国内外NTM感染及发病率有所升高, 全国结核病流行病学抽样调查(以下简称流调)结 果亦 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明[1],2000年第4次流调NTM分离株占分枝 杆菌分离株的11.1%,明显高于1979年第1次流调 的4.3%,1984/1985年第2次流调的4.2%和1990 年第3次流调的4.9%.临床上遇到NTM病的机率 正在增加. NTM与结核分枝杆菌对药物敏感性不同,结核 收稿日期:2006—11-20 分枝杆菌除非对抗结核药物产生抗药性,通常对抗 结核药物敏感,而许多NTM对抗结核药物不同程度 天然抗药,临床对NTM病的治疗往往缺乏可选择药 物,使NTM病趋于长期,反复,而难以治愈.由于以 往对NTM病的认识不足,许多目前临床常用抗生素 缺乏抗NTM作用的研究.随着对NTM的不断认识, 研究临床常用抗生素抗NTM作用,对现有常用抗生 素药的开发利用,对临床NTM病治疗均有重要意 义.氨基糖甙类抗生素通过与细菌核糖体3Os亚基 结合,抑制蛋白质合成而显示抗菌作用,是临床常用 的一类抗生素12],我们分别测定8种氨基糖甙类抗生 素对2O种分枝杆菌的试管内最低抑菌浓度 (MIC),研究氨基糖甙类抗生素抗分枝杆菌的作用. 1材料与方法 ? 1507? 中国现代医学杂志第l7卷 1.1菌株 试验所用2O种分枝杆菌标准菌株见附表,来源 于中国药品生物制品检定所. 1.2药物 硫酸链霉素(streptomycinsulfatesalt,SM), Sigma,纯粉,批号t58H0442;硫酸卡那霉素注射 液(kanamycinsulfateinjection,KM),徐州莱恩药 液有限公司,O.5g,2mU安瓶,批号031120—2;硫酸 阿米卡星(amikacinsulfateinjection,AMK),江苏 吴中实业股份有限公司苏州第六制药厂,0.2g/(2 mL?安瓶),批号050723;注射用硫酸奈替米星(ne— timicinsulfateforinjection,NETM),南京圣和药业 有限公司,0.2g/瓶冻干粉,批号200501282;硫酸异 帕米星注射液(isepamicinsulfateinjection,ISM), 旭化成制药株式会社名古屋医药工厂,200mg/(2 mL?安瓶),批号EXA12KT,进口药品注册证号 H20040258;注射用硫酸依替米星(etimicinsulfate fori~eeflon,ETM),杭州爱大制药有限公司,0.1g/ 瓶冻干粉,批号605059;硫酸妥布霉素注射液(to— bramycinsulfateinjection,TM),广州明兴制药有限 公司,80mg/(2mL?安瓶),批号040901;硫酸庆大霉 素注射液(gentamyeinsulfateinjection,GM),天津 药业焦作有限公司,80mg/(2mL?安瓶),批号 05092632. 1.3试剂 DifcO'IMMiddlebrook7H9Broth,干粉,BD公司 产品,批号Lot6052580. 1.4培养基 不含药及含药改良罗氏斜面培养基,其配方和 制备方法参照"结核病诊断实验室检验 规程 煤矿测量规程下载煤矿测量规程下载配电网检修规程下载地籍调查规程pdf稳定性研究规程下载 "131.按 试剂说明配制Middlebrook7H9Broth液体培养基, 并按10%比例加入ADC促生长剂,同时制备不含药 及含药培养基.ADC促生长剂:5%牛血清白蛋白V, 2%葡萄糖,0.003%过氧化氢酶,0.85%NaC1,0.22Ill 滤膜过滤除菌备用.各种药物在改良罗氏斜面及 Middlebrook7H9Broth液体含药培养基中的终浓 度均为0.5,1,5,10,50和100g/mL. 1.5药物抗分枝杆菌MlC检测 挑取适量在改良罗氏斜面培养基上传代生长良 好的分枝杆菌菌株,慢生长分枝杆菌菌龄3,4周,快 生长分枝杆菌菌龄5—7d,用磨菌器研磨制备菌悬 液,用MacFarlandNo.1比浊管确定浓度为1ms/mE, 1O倍稀释至0.1rag/mE,取0.1mL分别接种于含药 和不含药培养基,即每管接种菌量为10-Kmag,置 37.c培养箱培养,慢生长分枝杆菌4周观察结果,快 生长分枝杆菌7d观察结果.不含药改良罗氏培养 基细菌生长旺盛,含药培养基菌落1+以上判定为 耐药,无细菌生长为敏感;不含药Middlebrook7H9 Broth液体含药培养基中细菌生长良好,含药培养基 内细菌成膜或沉淀或浑浊生长判定为耐药,无细菌 生长为敏感. 2结果 药物抗分枝杆菌试管内MIC结果见附表. 附表氨基糖甙类抗生素抗分枝杆菌的MIC 菌株 改良罗氏斜面含药培养基(MIC,咖L) SMKMAMKNETMISMETMTMGM Middlebrook7H9broth液体含药培养基(MIc,咖L) SMKMAMKNETMISMETMTMGM ? 1508? 第12期李国利,等:氨基糖甙类抗生素抗分枝杆菌作用的研究 苏加分枝杆菌(ATCC35799)Mszulgai.101055O5100 龟分枝杆菌(ATCC35752)Mchelone.100>100100501050 脓肿分枝杆菌(ATCC19977)M.abseesaus>100>10010010050100 偶然分枝杆菌(ATCC6841)M.fortuitum>100>1005010050100 耻垢分枝杆菌(ATCC19420)Msmegamfis.55O51O55 草分枝杆菌(ATCCl1758)M.5phlei510051O11O 1o05O5 1005o100 1o01o05O 1o01o0.5O 5O5OO.5 1o05OO.5 1O.5 5050 1O1O 105 5O.5 10O.5 11O 51O 51O 101O 15 O.55 1O5 105 1O5 5O5 55 55 注:ATCC美国标准菌种收藏所;CMCC中国医学微生物菌种保藏管理中心 3讨论 目前,国内测定分枝杆菌药物敏感性常规方法 采用改良罗氏斜面培养基,试验中笔者同时采用改 良罗氏斜面和Middlebrook7H9Broth液体培养基, 主要目的是想了解药物在改良罗氏斜面培养基制备 过程中的损耗,为今后采用该培养基药物敏感性测 定提供参考依据. 在不同培养基中,由于成分,制作,测定过程中 药物变化程度不同出现不同的MIC值.表中结果表 明所测定药物在改良罗氏斜面培养基上MIC值通 常比Middlebrook7H9Broth液体培养基高2,lO 倍,这是由于改良罗氏斜面培养基制备过程中蛋白 质对药物的吸附作用,以及药物在培养基灭菌前加 入,灭菌过程中对药物热耗使其部分失活所致,因此 改良罗氏斜面培养基测定的MIC值可能并非真正 的药物浓度.理想的MIC测定采用液体培养基方 法,药物在培养基灭菌后加入,药物吸附,降解少,加 入的浓度可认作是实际作用浓度,测定的MIC可与 Cmax和其他药代动力学参数比较. 体外药物MIC测定是判断细菌对药物敏感性, 即药物对细菌作用的重要指标【4].其判定标准须参 照药物在体内的药代动力学参数,主要是最大血药 峰浓度(Cmax).在临床药物常规用量时,如果分枝 杆菌对药物通常达到的Cmax抗药则被认为耐药, 如果受到抑制则被认为敏感.据文献[5?导常规用 量SM,KM,AMK,NETM,ISM,ETM,TM和GM的 Cmax分别为2O,40mg/L(平均30mg/L),15,3O rag/L(平均22.5mg/L),15,30rag/L(平均22.5mg/L), 4,12mg/L(平均8mg/L),10.2,17.3mg/L(平均13.5 mg/L),11.3,14.6mg/L(平均13mgCL),4,8rag/L(平 均6rag/L)和4,8mg/Lf平均6rag/L).参照药物 Cmax值分析本试验,结果表明结核分枝杆菌和牛分 枝杆菌对SM,KM,AMK,ISM和ETM敏感,对 NETM,TM和GM耐药;鸟分枝杆菌对SM,KM, AMK,NETM,ISM和ETM敏感,对TM和GM耐药; 胞内分枝杆菌对SM,KM,AMK,NETM,ISM,ETM和 GM敏感,对TM耐药;蟾蜍分枝杆菌对SM,KM, AMK,NETM,ISM,ETM和GM敏感,对TM耐药;土 地分枝杆菌对ETM和GM敏感,对SM,KM,AMK, NETM,ISM和TM耐药;不产色分枝杆菌对SM, NETM,ISM,ETM和GM敏感,对NETM,KM,AMK 和TM耐药;施氏分枝杆菌对SM,KM,AMK,NETM, ISM和ETM敏感,对TM和GM耐药;次要分枝杆 菌对SM,KMAMK,NETM,ISM,ETM,TM和GM均 敏感;堪萨斯分枝杆菌对KM,AMK,ISM,ETM,GM 敏感,对SM,NETM和TM耐药;猿猴分枝杆菌对 ,对KM,AMK,NETM,ISM,ETM,TM和GM SM敏感 耐药;亚洲分枝杆菌对SM,KM,AMK,NETM,ISM, ETM敏感,对TM和GM耐药;瘰疬分枝杆菌对SM, KM,AMK,NETM,ISM,ETM,TM和GM均敏感;戈 登对SM,KM,AMK,ISM和ETM敏感,对NETM,TM 和GM耐药;苏加分枝杆菌对SM,KM,AMK, NETM,ISM,ETM和GM敏感,对TM耐药;龟分枝 杆菌对NETM,ISM,ETM和GM敏感,对SM,KM, AMK和TM耐药;脓肿分枝杆菌对KM,AMK, NETM,ISM,ETM和GM敏感,对SM和TM耐药;偶 然分枝杆菌KM,AMK,NETM,ISM,ETM和GM敏 感,对SM和TM耐药;耻垢和草分枝杆菌对SM, KM,AMK,NETM,ISM,ETM,TM和GM均敏感.不 同药物显示了不同的试管内抗菌作用谱,为临床 NTM病的治疗选择用药提供了一定参考依据. 参考文献: (下转第1513页) ? 1509? 第12期陈兰,等:不同尿白蛋白排泄量的2型糖尿病患者可溶性P一选择素的变化 及意义 Haemost,1996,76(3):328—332. 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