脑心通胶囊对冷水负重游泳模型小鼠的心脑保护作用

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V。!与正常对照组相比，模型小鼠脑组织乳酸含量增加，M* ! 8a ! 8IK@酶活力降低，一氧化氮合酶（Mbc）活力增加（) _ !5 !W），一氧化 氮含量未见明显变化；心脏组织乳酸含量增加，M* ! 8a ! 8IK@酶活力和肌 酸激酶活力降低（) _ !5 !W）。脑心通胶囊可以不同程度地逆转模型小鼠 脑组织及心脏组织上述生化指标的异常改变（) _ !5 !"） 结论：脑心通胶囊可延长冷水负重游泳模型动物的存活时间，改善脑 组织及心脏组织生化代谢可能是其发挥脑保护作用和心脏保护作用 的部分机制。 主题词：中药疗法；乳酸；M*T ! V aT ! V交换 IK@酶；一氧化氮；一氧化氮合 酶；肌酸激酶 9 引言 脑心通胶囊临床已广泛用于治疗脑卒中所致半身不遂、肢体 麻木、口眼歪斜、舌强语謇及胸痹所致胸闷、心悸、气短等。本研究 采用小鼠 ! "冷水负重游泳的方法，通过测定模型动物存活时间 以及游泳一定时间后脑组织及心脏组织生化代谢的改变，验证该 复方的脑保护和心脏保护作用，并阐明其部分作用机制。 : 材料和方法 设计：随机对照的实验研究。 地点和材料：#$%清洁级小鼠，雌雄兼用，体质量（&’ ( &）)，由 北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：*$+,（京） &’’&-’’’.。饲养条件：温度 &/ "，湿度 0’1 2 3’1，自然光照，自 由饮水，普通饲料。 药品与试剂：受试药：脑心通胶囊，由黄芪、丹参、桃仁、红花、 乳香、地龙、全蝎等 43味中药组成，功能益气活血、化瘀通络。临 床人常用量 /5 ! ) 6 7，主要用于治疗脑卒中和胸痹证 8由咸阳步 长制药有限公司提供，批号 ’&’0&0 9。阳性对照药：天保宁片，临 床人常用量 &/’ :) 6 78浙江康恩贝制药股份有限公司产品，每片 含银杏叶精提物为 /’ :)，其中银杏总黄酮苷 ;5 3 :)，批号 ’4’04! 9。化学试剂：蛋白定量（考马斯亮蓝法）、乳酸、<= ! -, ! ->?@酶、一氧化氮、一氧化氮合酶（KL-&&’型电子分析天平，日本 *MN- :=7OH公司产品。 参与者：设计者：北京中医药大学中药学院中药药理系徐秋 萍教授；干预实施和评估者：第一、二作者。 干预措施：脑心通胶囊对冷水负重游泳模型小鼠存活时间的 ·中医康复研究· 中国临床康复 第 ! 卷 第 "" 期 +--#B-CB-) 出版 /)%!010 2#*3!"4 #. /4%!%,"4 50)"6%4%&"&%#!7 8*’*1& 9 :;;< =#4> ? @#> :: !"#$ !""# $%&$ ’ ()*% +# *$ ’ $,&- . / !!!" #$%&’(" &)* !"#$$%&’%$( +,-." &)* 高琦瑛，等 ! 脑心通胶囊对冷水负重游泳模型小鼠的心、脑保护作用 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf ! 脑心通胶囊对冷水负重游泳模型小鼠存活时间的影响 "!! ! " # 组别 剂量 ! " # $" % ! 存活时间 ! & % ’()* +, - ./* +/ .+.* 01 - 120* /’! ’,/* ). - 1.2* +, ,0/* )) - 1((* (+" .02* +, - 1+1* )0# 与模型对照组相比，! ! ! " #$ %&’( " ! &$ &%#( " ! ! " )$ #&’( " ! &$ &&&( # ! ! " %$ ’*’( " ! &$ &&# 1, 12 1. 1. 1, 3 0) 4" # $" )* 0 )* , 1* ’ 模型对照组 天保宁片组 脑心通胶囊组 脑心通胶囊组 脑心通胶囊组 表 $ 脑心通胶囊对冷水负重游泳模型小鼠脑组织生化代谢的影响 "!! ! " # 与模型对照组相比，! ! ! #$ **# + #$ ,#*( " - &$ &.，" ! ! " #$ #)/( " ! &$ &%’( # ! ! %$ **’ + )$ .*.( " - &$ &*( $ ! ! " %$ *’. + " **$ &%*( " - &$ &* 56 $ 78 $ 79:;酶 !!$6< # " %组别 剂量 ! " # $" % ! 5=> （!$6< # "） 组别 剂量 ! " # $" % ! 乳酸 !44?@ # " % 一氧化氮（!4?@ # "） )* .)2 - )* 1’’ )* ’’( - )* 1/) )* /(( - )* 0)+ )* .)2 - )* (1, )* ./1 - )* +(/ )* 0.’ - )* 1++# 模型对照组 正常对照组 天保宁片组 脑心通胶囊组 脑心通胶囊组 脑心通胶囊组 3 3 0) 4" # $" )* +( )* ’0 1* (, 1( 1( 10 10 10 10 模型对照组 正常对照组 天保宁片组 脑心通胶囊组 脑心通胶囊组 脑心通胶囊组 1( 1( 10 10 10 10 3 3 0) 4" # $" )* +( )* ’0 1* (, 1* ))) - )* ()) )* ./) - )* (1.! 1* 1/) - )* +/) )* ’/) - )* +1.# )* ,/) - )* 1’.! )* /,+ - )* 1++"# )* 0)2 - )* 1(1 )* +1’ - )* )0(! )* +), - )* )/0! )* (’2 - )* )’2# )* +)2 - )* )..! )* (,’ - )* )’0# )* (12 - )* )/0" )* (.2 - )* ).0"% )* 0+. - )* )0’"% )* +0’ - )* )/0"% )* +1’ - )* )0’"% )* (.. - )* )0)"% 影响：!分组及给药：在进行冷水负重游泳模型小鼠存活时间测 定时，实验动物按分层随机法分为 !组，即模型对照组、天保宁片 "# $% & ’%组、脑心通胶囊 #( " % & ’%组、#( ) % & ’%组、*( + % & ’% 组，分别相当于人常用剂量的 !，*# 和 ,# 倍。共计 )- 只小鼠，其 中模型组 *)只，天保宁片组 *-只，脑心通胶囊小剂量和中剂量 组各 *. 只，大剂量组 *) 只。动物先连续灌胃给药 / 0，一日剂量 分两次给予，每次给药容积为 *# $1 & ’%。第 "天 * 次给药全日 量 +# $23后造模。模型对照组灌服等容积的 ! % & 1羧甲基纤维 素纳（454678）溶液。实验过程中动物均无死亡。"造模方法及 模型小鼠存活时间测定：小鼠尾尖部约 ,( ! 9$处系一 *#:体 质量的橡皮泥球，放入（)( # ; #( !）<冷水中游泳至溺水死亡 （室温保持 ," <）。记录小鼠由放入冷水起至溺水死亡的一段 时间作为存活时间。 脑心通胶囊对冷水负重游泳模型小鼠脑组织及心脏组织生化 代谢的影响：!分组及给药：实验动物按分层随机法分为 +组，即 正常对照组、模型对照组、天保宁片 "# $% & ’%组、脑心通胶囊 #( /, % & ’%组、#( +" % & ’%组、*( ,) % & ’%组，分别相当于人用剂量 的 "，)和 *+倍。共计 )#只小鼠，其中模型组和正常组均为 *,只， 天保宁片组和脑心通胶囊 / 个剂量组均为 *" 只。给药方法同 上。正常对照组和模型对照组灌服等容积的 ! % & 1 454678溶 液。实验过程中动物均无死亡。"造模方法：同上。正常对照组 不予冷水游泳。 生化指标测定：将模型小鼠自冷水中取出后，迅速置于 " < 冰盘上取脑（去除嗅球、小脑及下位脑干）和心脏，加 - 倍生理 盐水制备成 *## % & 1匀浆备用，以测定脑组织乳酸含量、78 ! 6= ! 6>?@酶活力、一氧化氮含量和 7AB活力；心脏组织乳酸含 量、78 ! 6= ! 6>?@酶活力和肌酸激酶活力。测定均按照试剂盒说 明进行。 主要结局观察指标：各组小鼠游泳死亡时间；脑组织乳酸 含量、78 !一氧化氮含量和 7AB活力；心脏组织乳酸含量、78 ! 6= ! 6>?@酶活力和肌酸激酶活力。 统计学分析：数据以 !! ! "表示，采用 B@BB *#( # CDE F230DFG 统计软件包，由第一作者进行组间比较 #检验。 ! 结果 ,( * 脑心通胶囊对模型小鼠存活时间的影响 脑心通胶囊 #( ) % & ’%，*( + % & ’%可以明显延长模型小鼠的存活时间（ $ H #( #*），而脑心通胶囊 #( " % & ’%对模型小鼠的存活时间无明显 影响（ $ I #( #!）。结果见表 *。 ,( , 脑心通胶囊对模型小鼠脑组织及心脏组织生化指标的影 响 与正常对照组相比，模型小鼠脑组织乳酸含量明显增加， 78 ! 6= ! 6>?@酶活力明显降低，7AB活力增加（ $ H #( #!），一氧 化氮含量未见明显改变；心脏组织乳酸含量明显增加，78 ! 6= ! 6>?@酶活力和肌酸激酶活力明显降低（$ H #( #!）。脑心通胶囊 / 个剂量可以不同程度地逆转模型小鼠脑组织及心脏组织上述 生化指标的异常改变（ $ H #( #!，$ H #( #*）。结果见表 ,，/。 " 讨论 本研究借冷水负重游泳小鼠模型探讨了脑心通胶囊益气活 血、化瘀通络作用，并通过测定模型小鼠脑组织及心肌组织生化 指标的变化，阐明了该复方的部分作用机制。 模型动物受到缺氧、寒冷刺激后，机体组织 78 ! 6= ! 6>?@酶 活力下降，细胞膜功能异常 " # $，导致离子转运受抑，从而诱发一 系列病理生理反应。实验中还发现，模型小鼠脑和心肌组织乳 酸含量增加。脑心通胶囊可以明显增强模型小鼠脑和心肌组织 的钠泵活性，使其在物质转运、能量转换以及信息传递等方面所 起的作用得以发挥，并可抑制乳酸过多产生。故认为脑心通胶 囊的抗酸中毒作用可能与其改善能量代谢有关。 各种强度的运动均使血清中肌酸激酶活性增加，这可能与 肌细胞膜出现暂时通透性变化或损伤，导致酶类物质向细胞外 释放，以及运动时剧烈振荡，细胞内代谢产物的积累所致渗透压 增高，肌糖原耗竭致细胞内供能相对不足，导致细胞膜的结构产 生变化等有关 "% $。本实验中负重运动造成小鼠心肌细胞损伤，肌 酸激酶渗漏，导致肌酸激酶活力降低。脑心通胶囊可以回升模型 小鼠已降低的肌酸激酶活力，提示该复方有助于维持细胞膜结 构的完整性，减少肌酸激酶等关键酶的丢失。 一氧化氮由前体 1 J精氨酸（168E%）在 7AB 催化下生成， 其生理和病理作用的发挥有赖于 7AB 活性，而 7AB 活性具有 十分复杂的生物调控机制 " & ’ ( $。本实验研究表明，模型小鼠脑 组织 7AB 活力增加。这可能由于 168E% 由细胞外进入细胞内 属于主动转运 " ) $，需要消耗钠泵活动形成的势能储备，但此时 模型小鼠能量匮乏，使进入细胞内的 168E% 减少，7AB 活力反 馈性增高。脑心通胶囊可以明显逆转这种改变。但在本实验 条件下，未观察到各组间模型小鼠脑组织一氧化氮含量的差 异，分析认为与一氧化氮化学性质不稳定，## * % 短，不易直接 测定有关。 表 % 脑心通胶囊对冷水负重游泳模型小鼠心脏组织生化代谢的影响 "!! ! " # 与模型对照组相比，! ! ! #$ &00( #$ ,’)# " - &$ &.，" ! ! " #$ &,. + " #$ /’/( " - &$ &.( # ! ! %$ *)% + 0$ &0*( " - &$ &*( $ ! ! " )$ &’’( " .$ *)/( " ! &$ &&& )* (+) - )* )/) )* (2+ - )* )/(" )* (., - )* )/." )* (,) - )* )/(" )* (21 - )* )0." )* (0( - )* )0( 组别 ! +/,* +/ - 12* )) +,’* /’ - +.* (1" 002* ’’ - /(* ’,% +20* ., - /(* .+" 0+(* 0( - 02* /0% +’+* +0 - (0* 1( 1( 1( 10 10 10 10 3 3 0) 4" # $" )* +( )* ’0 1* (, 模型对照组 正常对照组 天保宁片组 脑心通胶囊组 脑心通胶囊组 脑心通胶囊组 )* +/) - )* ).. )* (20 - )* )/(! )* (.0 - )* )/’! )* (’’ - )* )/0# )* 1(’ - )* )0)# )* ()1 - )* )0(# 剂量 ! " # $" % 肌酸激酶 !!$6< # " % 乳酸 !44?@ # " % 56 $ 78 $ 79:;酶 !!$6< # " % !"#$ !""# $%&$ ’ ()*% +# *$ ’ $,&- . / !!!" #$%&’(" &)* 中国临床康复 *--, 年 0 月 ( 日 第 0 卷 第 ** 期 现代药理研究表明：脑心通处方中，黄芪升高外周血细胞， 增强造血系统功能 ! " #，抑制血小板聚集；丹参、桃仁、红花扩血 管，抑制血栓形成，改善微循环；地龙抗血栓形成。诸药协同使 用，补气活血，药少力专，共收益气活血，化瘀通络，标本兼治之 功。从实验结果来看，药物的量效关系虽然不是很好，但是仍然 可以证实该药具有减少乳酸堆积，增加钠泵活性，抑制 !"#活 性增加，增强肌酸激酶活力的作用，这可能是其治疗脑卒中，延 长存活时间的重要机制。 结论：本研究采用小鼠 $ %冷水负重游泳的方法，发现脑心 通胶囊可以延长模型小鼠的存活时间，抑制模型小鼠脑组织乳 酸含量增加，!& $ ’( $ ’)*+酶活力降低，!"#活力增加，心脏组 织乳酸含量增加，!& $ ’( $ ’)*+酶活力和肌酸激酶活力降低，部 分阐明了该复方发挥心、脑保护作用的机制。 ! 参考文献 听觉脑干诱发电位在偏头痛中的评估 价值 娄 平, 李雪梅 !驻马店市第一人民医院神经内科，河南省驻马店市 "#$%%% & 摘要! 对 "#$例偏头痛临床发作期患者同时进行听觉脑干诱发 电位（%&’()*+,- ’./(+0&1 ,203,/ 40+,)+(’56 789:）及经颅多普勒 （+&’)*;&’)(’5 <0445,&6 =><）检查，并与 ?@@ 例无偏头痛症状的健 康人对照。结果表明，偏头痛患者发作期 789:异常 "?A 例，异 常率 BCD $E；=><异常 "?$例，异常率 B#D ?E，两者异常率相 似。789:与 =><在偏头痛的检测中都有良好的敏感性，对偏头 痛 789:可作为一种重要的检测手段应用于临床。 主题词：偏头痛；诱发电位，听觉，脑干；超声检查，多普勒，经颅 ! 对象和方法 "D " 对象 ?@@@ F @C G ?@@C F "@驻马店市第一人民医院神经内 科门诊按国际头痛学会制定的标准 !" #。选取偏头痛患者 "#$例。 男 ##例，女 "@?例，年龄 "$ H I?岁，平均年龄（CID " J "ID "）岁； 病程 "D ? H "$D @年，发作频率平均 AD ?次 G年，再发 ?@ -() H " / 不等。所有病例都先后经 >=检查排除颅内占位病变，排除高血 压、糖尿病病史。其中有典型偏头痛发作者 "?#例，普通型偏头痛 A?例，有精神紧张、心理因素、睡眠不足、被动吸烟、饮酒、月经周 期等诱发因素者 "@#例，无明显诱因者 #?例。#$例有头痛症家族 史。按发作时头痛的程度和对日常生活、工作的影响分为 !$ #：!级 （轻度头痛）：发作时头痛较轻微，不影响日常生活和工作；"级（中 度头痛）：发作时头痛较重，影响日常生活和工作；#级（重度头 痛）：发作时头痛严重，不能坚持日常生活和工作，甚至被迫卧 床。"#$例中，轻度头痛 "?例，中度头痛 K"例，重度头痛 #I例。 另选本院 ?@@@ F @A G "@体检 ?@@例 "$ H I@岁的无症状的健康人 为正常组。正常组与偏头痛组年龄、性别间无统计学差异。 "D ? 方法 被检者均于检测前 C /末服用扩血管药、解热镇痛 剂、潘生丁等药物，于发作期同时行经颅多普勒（+&’)*;&’)(’5 <0445,&6 =><）及听觉脑干诱发电位（%&’()*+,- ’./(+0&1 ,203,/ 40+,)+(’56 789:）检测，分别测双侧大脑前动脉、大脑中动脉、大 脑后动脉、基底动脉及椎动脉，观察平均血流速度、脉动指数； 在安静闭目状态下测 789:，分别记录!，"，#，$和%波绝对 潜伏时间、!，#，!，%，#，%波峰间期、% G!波幅比、# H% G !H#峰间期比值及波形分化。统计学方法：计数资料用例数和 百分数表示，配对 !!检验。 " 结果 ?D " 偏头痛发作期和正常组 =><比较 以平均血流速度异常 为主，其中以大脑中动脉、大脑后动脉、基底动脉、左侧椎动脉和 右侧椎动脉为显著。偏头痛发作期大脑前动脉异常 "?例，大脑 中动脉异常 K$例，大脑后动脉异常 AK例，基底动脉异常 A?例， 左侧椎动脉异常 I?例，右侧椎动脉异常 I$例，其中大脑中动脉 伴基底动脉异常 "I例，大脑中动脉伴左侧椎动脉异常 "$例，大 脑中动脉伴右侧椎动脉异常 "K例。脉动指数异常 "#例。 ?D ? 偏头痛发作期和正常组 789:比较 偏头痛患者发作期#， %波绝对潜伏时间及# H%波峰间期及# H% G!H#峰间期比 值明显异常，其中偏头痛发作期各波绝对潜伏时延长及波形分化 不良例数分别为!波 #例，#波 $B例，%波 "@?例及各波峰间期 延长例数!H#波 #例，!H%波 ?A例，# H%波 #$例，# H% G !H#峰间期比值 L "者 K#例。 ?D C 偏头痛发作期 =><和 789:异常率比较 "#$例中 =><异 常 "?$例，异常率 B#D ?E；789:异常 "?A例，异常率 BCD $E，两 种检测结果比较差异无显著性意义（ !$ M ?D ?I6 ! L @D @I）。 # 讨论 目前多认为偏头痛是一种脑功能失调，其所有症状都是脑 功能相关改变的结果。神经递质学说认为，I F羟色胺、去甲肾 及多巴胺等与偏头痛发作有关，I F羟色胺 " 受体广泛分布于 脑，特别是颅内血管及脑干的中缝背核及大核。本文结果显示， 偏头痛发作期无临床症状，发作期 =><显示 B#D ?E的患者有血 流速度的增加或降低，符合 "K$$ 年国际头痛协会制定的诊断标 准 ! " #。789:的波形起源：N波，产生于与耳蜗紧密相连的一段听 神经纤维的动作电位或为与毛细胞相连接的听神经树突的突触 后电位；NN波产生于脑干耳蜗核；NNN波 产生与内侧上橄榄神经 核；NO产生与外侧丘系腹核；O波产生于外侧丘系上方或下丘 ! % #。脑干听觉通路的血液供应主要是小脑前下动脉。本试验结果 NNN H O波峰间期延迟 #$ 例，NNN H O G N H NNN峰间期比 L " 有 K# 例，说明听觉通路在脑干部主要是桥脑部传导减慢，其原因可能 是由于反复出现的“偏头痛启动点”神经介质异常及继发性颅内 血管，尤其是脑干血管异常变化，导致脑干听觉通路神经纤维不 同程度的髓鞘脱失有关，有待于进一步研究证实。 $ 参考文献 收稿日期：’%%" ( %) ( *+ !%+ , -. & $ * 1 23454673 +8499:;:64<:=> +=??:<<33 =; <73 !><3@>4<:=>48 23454673 "=6:3 4>5 5:4D>=9<:6 6@:<3@:4 ;=@ 73454673 5:9=@53@9E 6@4>:48 >3F@48D:49 4>5 ;46:48 G4:>B !"#$%&%’(% $)00H 0 I 9FGG8 J K $ L38?3@9 2MB #:?=5:G:>3 4 >3N 6486:F? 4><4D=>:9< :> <73 G@=G784<:6 <@34< =; ?:D@4:>3B )"%*%+$" $)01；*1K $-%1 潘映福 B 临床诱发电位学 OP Q B 北京：人民卫生出版社，*---：1(- ’ ( R=>=7=3 S2E T39< ULE V=F<:8:3@ /LB W46<=@9 4;;36<:>D ?3?X@4>3 G3@?34X:8:5 :=>:6 7=?3=9<49:9 :> <73 6=85C9FX?3@D35 ;@=DB , -.# /(0& *---H *-1 S< *K ,-( ’ $, 苏全生，唐戎 B 递增负荷运动对人体血清一氧化氮、肌酸激酶等指标的影 响 O M Q B 中国临床康复，*--1，&（$*）：$0,0 ’ ) Y=84Z4 Y[E V388 //E M4>993> RE "1 %&B \]48F4<:=> =; <73 8=>DC<3@? 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