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首页 包涵体蛋白_PH梯度洗脱方法

包涵体蛋白_PH梯度洗脱方法.doc

包涵体蛋白_PH梯度洗脱方法

妞妞
2012-11-19 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《包涵体蛋白_PH梯度洗脱方法doc》,可适用于自然科学领域

bufferANaHPOmmolLTrisHClmmolL尿素molL用NaOH调整pH值到。bufferBNaHPOmmolLTrisHClmmolL尿素molL用HCl调整pH值到。bufferCNaHPOmmolLTrisHClmmolL尿素molL用HCl调整pH值到。bufferDNaHPOmmolLTrisHClmmolL尿素molL用HCl调整pH值到。挑取含有pETHisPrP质粒的菌落接种mlkanaLB培养基中℃摇菌过夜。按照:接种菌液于LkanaLB培养基℃摇菌h。加入IPTG使其终浓度为mmolL℃摇菌h。×gmin离心收获菌体。用ml预冷PBS重悬菌体×g离心min收获菌体如此重复三遍菌体可储存于℃备用。已知rHisbPrP存在于细菌包涵体中纯化rHisbPrP的方法有两种方法一为pH梯度洗脱步骤如下:将按照mlg湿重的比例加入bufferA重悬菌体放置在冰上超声强度超声s冰上放置s至min重复多次直至菌体全部裂解。室温条件下×g离心min弃沉淀取上清上清用μm过滤器过滤。NiNTA用两倍体积的bufferA洗涤、平衡然后加入等体积bufferA制备成NiNTA。取ml的上清加入ml的NiNTA冰上震荡混匀h。将孵育好的菌体上清和介质的混合液小心的移入一个底部封闭的空柱内去除底部的密封盖使液体流出收集流穿液用于SDSPAGE分析。用mlbufferB洗涤介质收集洗涤液用于SDSPAGE分析。用mlbufferC流洗重组蛋白次然后用mlbufferD流洗蛋白次收集各收集液用于SDSPAGE分析。

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