微量样品RNA提取试剂盒

◆ TRIpure Reagent 抽提 指南 验证指南下载验证指南下载验证指南下载星度指南下载审查指南PDF ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ EASYspin Plus 微量样品 RNA 快速提取试剂盒 ◆ 目录号 1139 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 - 1 - EASYspin Plus 微量样品 RNA 快速提取试剂盒 目录号：1139 目录编号 包装单位 113901 50次  适用范围： 适用于快速提取微量动物细胞、微切割组织和易裂解动物组织等样品总RNA，使 用独有基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，不需要使用DNase消化，RNA 可直接用于PCR，荧光定量PCR.。  试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50 次 裂解液 RLT Plus 室温 20 ml 去蛋白液 RW1 室温 40 ml 漂洗液 RW 室温 10ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温 10 ml 70%乙醇 室温 9ml RNase-free H2O 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Carrier RNA —20℃ 310μg 基因组 DNA 清除柱 和收集管 室温 50 套 RNase-free 吸附柱 RA 和收集管 室温 50 套 微量研磨杵 室温 3 根 本试剂盒在室温储存 6 个月不影响使用效果。 - 2 - 储存事项： 1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直 接使用，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。 2. 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此 运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。 3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及 时盖紧盖子。  产品介绍： 本公司独家推出 EASYspin 无苯酚、氯仿 RNA 快速提取技术基础上，又独家研发 成功基因组 DNA 清除柱技术确保有效清除 gDNA 残留，得到的 RNA 不需要 DNase 消 化，可直接用于 PCR、荧光定量 PCR 等实验。独特的裂解液迅速裂解微量样品的细胞 和灭活细胞 RNA 酶，然后裂解混合物通过一个基因组 DNA 清除柱，基因组 DNA 被 清除而 RNA 穿透滤过。滤过的 RNA 用乙醇调节结合条件后,RNA 在高离序盐状态下 选择性吸附于特制离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白 液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的 RNase free H20 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。  产品特点： 1. 完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 2. 快速，简捷，单个样品操作一般可在 30 分钟内完成。 3. 独家研发成功基因组 DNA 清除柱技术确保有效清除 gDNA 残留，得到的 RNA 不 需要 DNase 消化，可直接用于 PCR、荧光定量 PCR 等实验。 4. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值达 1.9～2.0，基本无 DNA 残留, 可用于 RT-PCR，Northern-blot 和各种实验。 - 3 -  注意事项： 1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机， 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造 成DNA残留或者产量降低。如细胞处理量不超过5x105，组织不超过5mg。 3. 一般本试剂盒最小处理量可以处理10个以上的组织细胞。 4. 裂解液RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避 免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲 洗。 5. Carrier RNA 储存液的配制：在第一次使用Carrier RNA 时，将Carrier RNA（310 μg）溶解在1 ml RNase-free H2O 中，将溶液分装后储存于-20℃，此时该溶液的 浓度为310 μg/ ml（310 ng/μl）；该储存液应避免反复冻融，冻融次数不能超过3 次。 （当处理的细胞量小于5000 个或者处理组织量小于10μg时，请在裂解液中加入 20ng Carrier RNA。） 6. Carrier RNA 工作溶液的配制（以配制10 次用量为例）：将5μl Carrier RNA储存 溶液加入34μl 裂解液RL 中，用移液器混匀，将混匀后的溶液6μl 加入54μl 裂解 液RL 中， 此时Carrier RNA 终浓度为4 ng/μl，取5μl 终浓度为4 ng/μl 的Carrier RNA 加入裂解液中。 7. 预防RNase 污染，应注意以下几方面： 1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。 2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。 3) RNA 在裂解液RLT Plus 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使 用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小时，塑料器皿可 在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。 - 4 - 4) 配制溶液应使用无 RNase 的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入 DEPC 至终 浓度 0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。） 8. 关于DNA 的微量残留： 一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留 （DNase消化也无法做到 100%无残留），本公司的 EASYspin Plus RNA 提取产品， 由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组 DNA 清除柱技术，绝大多数 DNA 已 经被清除，不需要 DNase 消化，可直接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别 特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的 mRNA 表达量分析荧 光定量 PCR，我们建议在进行 模板 个人简介word模板免费下载关于员工迟到处罚通告模板康奈尔office模板下载康奈尔 笔记本 模板 下载软件方案模板免费下载 和引物的选择时： 1) 选用跨内含子的引物,以穿过 mRNA 中的连接区,这样 DNA 就不能作为模板参与 扩增反应。 2) 选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。 3) 将 RNA 提取物用 RNase-free 的 DNase I 处理以提高效果。本试剂盒还可以用于 DNase I 处理后的 RNA 清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。 4) 在步骤去蛋白液 RW1 漂洗前，直接在吸附柱 RA 上进行 DNase I 处理。请联系我 们索取具体操作说明书。 - 5 -  操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示：  第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!  如果处理的细胞量小于 5000 个或者处理组织量小于 10μg时，匀浆前请在裂解液 中加入 20ng Carrier RNA（按照注意事项 4 和 5 指示） 1. 组织培养细胞 a. 收集<5x105 悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管，对于贴壁细胞，孔板培养可以直 接裂解，细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。 b. 13，000rpm 离心 10 秒（或者 300g 离心 5 分钟），使细胞沉淀下来。完全吸 弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。 c. 轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬，加 350μl（<5x105细胞）裂解液 RLT Plus， 吹打混匀后用手剧烈振荡 20 秒充分裂解。 d. 匀浆：（处理细胞量极少时<1x105 一般不需要，涡旋振荡一分钟匀浆）。用带 钝针头的一次性 1 ml(配 0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到满 意匀浆结果(或者电动匀浆 30 秒),可以剪切 DNA，降低粘稠度防堵塞柱子和提高 产量。 e. 将裂解混合物或匀浆混合物全部加到 DNA 清除柱上（清除柱放在收集管内）。 f. 接操作步骤项下 3。 2. 动物组织（例如鼠肝脑） a. 电动匀浆： <5mg组织加入 350μl 裂解液 RLT Plus 后电动彻底匀浆 20-40 秒。 b. 研磨杵+匀浆：1.5ml 离心管内，加入 100μl 裂解液 RLT Plus ，加入<5mg组 织立刻用微量研磨杵研磨匀浆完全。补足裂解液 RLT Plus 到 350μl。用带钝针头 的一次性 1 ml(配 0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到满意匀浆结 - 6 - 果(或者电动匀浆 30 秒) ，可以剪切 DNA，降低粘稠度防堵塞柱子和提高产量。 c. 液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(<5mg )转入 装有 350μl 组织裂解液 RLT Plus 的 1.5ml 离心管中, 用手剧烈振荡 20 秒，充分裂 解。用带钝针头的一次性 1 ml(配 0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物 10 次或直到 得到满意匀浆结果(或者电动匀浆 30 秒),可以剪切 DNA，防堵塞柱子和提高产量。 d. 将匀浆后裂解物 13，000rpm 离心 3 分钟,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或 者不溶物, 将裂解物上清全部加到 DNA 清除柱上（清除柱放在收集管内）。 e. 接操作步骤项下 3。 3. 13,000 rpm 离心 30 秒，保留滤过液（RNA 在滤过液中）。 4. 用微量移液器较精确估计滤过液体积（通常为 350μl，滤过时候损失体积应该减 去）,加入等体积的 70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇!） ,此时可能出现沉 淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀 ,不要离心。 5. 立刻将混合物(每次小于 700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中，（吸附 柱放入收集管中）13,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。 6. 加 700μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1 分钟，12，000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。 7. 加入 500μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心 30 秒， 弃掉废液。加入 500μl 漂洗液 RW,重复一遍。 8. 将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液, 以免 漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 9. 取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 离心管中，在吸附膜的中间部位加 15-20μl RNase free water（事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量）， 室温放置 1 分钟， 12,000 rpm 离心 1 分钟。 减少洗脱体积可以提高 RNA 浓度，但是 RNA 产量会降低，用户根据需要选择。