茶树花中茶皂素和花多酚的综合提取、分离纯化及抑菌性的研究（可编辑）

茶树花中茶皂素和花多酚的综合提取、分离纯化及抑菌性的研究（可编辑） 茶树花中茶皂素和花多酚的综合提取、分离纯化及抑菌 性的研究 独创性声明 本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论 文彳包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得安徽 农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作 的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 芷 .帚、 学位论文作者签名: 签字日期:加年 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的 规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文件, 允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可以将学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索,收录到《中国学位论文全文数据 库》,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文,向社 会公众提供信息服务。保密的学位论文在解密后适用本授权书。 学位论文作者签名: 指导教师签名: 签字日期: 签字日期:如年 学位论文作者毕业后去向: 作单位: 电话: 通信地址: 邮编:?中文摘要 茶树花是茶树 江..的牛殖器官之一。茶树花中含 有丰富的茶多酚、茶皂素、茶多糖、氨基酸和维牛素等多种牛物活性物质,对人体具 有解毒、降脂、抗癌、养颜等多种功效。本文利用超声波辅助提取技术对茶树花中茶 皂素和茶多酚进行综合提取和分离纯化,并对其抑菌性进行研究,旨在开发茶树花中 天然活性物质资源,为茶树花的综合利用提供理论依据。 茶皂素是山茶科山茶属植物茶叶皂素 的统称,是一类结构相近的七墩果烷型五环三萜类皂苷的混合物,广泛存在于茶树的 根、叶、种子和花中,茶皂素是一种性能良好的天然的表面活性剂,具有祛斑、消炎、 止咳、镇痛、抗渗透、杀菌、杀虫及促进植物牛长等多种作用。茶多酚 , 简写亦称“茶鞣质”、“茶单宁”,是一类存在于茶树中的多元酚的混合物,它不 仪是一种天然无毒的抗氧化剂,而且也是一种理想的天然药物,具有抗氧化、抗病毒、 抗菌、抗辐射和抗癌等多种保健功能和药理作用。 实验以茶树花为材料,采用超声波辅助浸提技术对茶树花中茶皂素和茶多酚进行 综合提取,分别以乙醇浓度、浸提温度、料液比、超声波功率、浸提时间为因子,首 先进行单因素实验,在单因素实验的基础上,采用正交试验对乙醇浓度、浸提 温度、料液比、超声波功率和浸提时间进行优化。方差分析 结果表明,对茶皂素得率影响显著的因素依次为:、、、、,而对茶多酚得 率影响显著的因素依次为:、、、、,研究结果表明,茶皂素和茶多酚最佳 综合浸提工艺条件为:乙醇浓度为%,浸提温度为。,料液比为:/,超 声波功率为,浸提时间为,在此条件下,茶皂素和茶多酚的浸提得率达 到.%矛 .%,此最佳浸提工艺提取的结果重复性好。 实验采用大孑树脂对浸提粗品分离纯化,首先通过静态吸附实验,从、 、一、、这五种常用大孔吸附树脂中筛选出比较适宜的大孔 树脂,根据这五种大孔树脂对茶皂素和茶多酚的吸附率和解析率的情况,最终选择 为最佳大孑吸附树脂用于产品的分离纯化。将大孔吸附树脂装入层析 柱后,采用不同浓度梯度的乙醇溶液进行洗脱,最后将两种物质的样品流份进行浓缩 燥,通过分光光度法得出茶皂素和茶多酚样品的纯度分别为.%和.%。 利用条皂素和茶多酚样品对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、四联球菌和酵母菌 的抑 菌试验,来研究这两种天然提取物的抑菌性。结果表明,茶皂素和茶多酚对这 四种菌 都有一定的抑制作用,特别是茶皂素对酵母菌的抑制性非常强。 关键词:茶皂素茶多酚茶树花提取分离纯化抑菌 ,, , , ,,. ,?,? ,. ,. .,, , , ?. , , , ,, , ,, , , . “”, , . , ,,,,. ?,? , , , , , ., , , , ,. :,,, ,:,,, . :% , , 。 ,:/ . , ..% .%, ,,一,. , , ,. , .% .%.. , , , , .: , , ,,?噶’二:.??量‘?世上..。目 录 中文摘 要............................。..................................... ................................................................ 目蜀专. 文献综述? .茶树花概述.茶皂素的概述? ..茶皂素的结构.. ..茶皂素的理化性质?. ..茶皂素提取方法的研究??.. ..茶皂素的纯化方法?. .茶多酚? ..茶多酚的概述. ..茶多酚的丰要牛理活性和药效作用. ..茶多酚的提取方法研究进展. ..茶多酚的纯化方法? 引言? .研究目的及意义??.. .研究的丰要内容及技术路线.. ..茶皂素定量测定中去干扰研究..茶树花中茶皂素和茶多酚的综合提取技 术 ..茶皂素和茶多酚分离纯化? ..茶皂素和茶多酚相关抑菌的研究? ..技术路线材料与方法??. .材料、试剂及仪器?.. ..实验材料..试剂及试材? ..实验仪器与设备.实验方法 ..茶树花中茶皂素和茶多酚的综合提取..茶皂素和茶多酚的分离纯化 ..茶皂素和茶多酚的鉴定分析..茶皂素和茶多酚的抑菌试验 结果与分析??. .茶树花中茶皂素和茶多酚的综合提取??一 .. 对茶皂素测定影响?一 ..单因素浸提效果的分析..正交试验结果分析? ..验证实验结果 .大孔树脂分离纯化?一 ..大孔树脂的筛选..大孔树脂洗脱纯化试验结果 .茶皂素和茶多酚的鉴定实验结果?一 ..茶皂素的鉴定实验结果..茶多酚的鉴定实验结果.. 茶皂素和茶多酚的纯度?. .抑菌试验??一 寸论?. .茶树花中茶皂素和茶多酚的综合提取 .茶皂素和茶多酚的分离纯化.. .茶皂素和茶多酚样品的鉴定分析?.. .茶皂素和茶多酚的抑菌试验? 结论?. .茶树花中茶皂素和茶多酚的综合提取??.. .茶皂素和茶多酚的分离纯化.. .茶皂素和茶多酚的抑菌试验.. 参考文献?. 附录:??. 致谢. 作者简介?.文献综述 .茶树花概述 茶树花是茶树 化./.的牛殖器官之一【 。我国茶园 面积非常广阔,所以茶树花资源也很丰富,各地茶树花的开花时间会受茶树 周围的牛 长环境和茶树品种的影响,一般通常情况下茶树花芽于每年月芹右开始分化,花期 长达数月之久,其中月中下旬至 月中旬为茶树花的盛花期。我围南部茶区由于 。 气候条件的影响,花期则更长,有的可延续至翌年?月,甚至全年茶树花开放【‘ 通常茶树花的寿命很短,如果没能及时受精,茶树花便会脱落。由于茶树花的结实率 受到很多内外因素的影响,导致结实率低,所以茶树花具有“花期长、开花多、结实 少”的特点。 长期以来,人们对于茶树的利用大多关注其芽叶,而忽视了茶树花的利用价值, 绝大部分都任其自牛自灭,为了得到高产的茶叶,有的茶园甚至通过喷施植物牛长调 节剂来除花落果。其实,茶树花与茶鲜叶同属于茶树的一部分,但茶树花比其他部分 的牛长期长,这样吸收和积累的营养物质也多,所以如果只利用茶鲜叶,而放弃茶树 花,这对茶资源实在是一大浪费。调查表明,成龄茶园每亩可采鲜花.,我 国茶园面积/。阔,茶树花资源同样非常丰富,具有很大的开发前景。茶树花中的活 性成分与茶叶很相似,含有丰富的茶多糖、茶多酚、茶皂素、氨基酸、维牛素等,所 以,茶树花也同样具有降脂、解毒、抗癌、养颜、滋补等功效【‘。充分利用茶树花 资源,不仪可以进一步延长茶叶产业链,而且对促进茶鲜叶的牛长,提高茶园经济效 益,均具有重要意义。 .茶皂素的概述 ..茶皂素的结构 茶皂素是山茶科山茶属植物茶叶中皂素的统称,是一 类结构相近的七墩果烷型五环三帖类皂苷的混合物。,习惯上称这种混合物为茶皂 素,而把茶皂素单体结构称作茶皂苷。 茶树中的皂甙是年由日木青山新次郎苗‘次从茶树种子中分离出来,直到 世纪年代,茶皂甙的结构研究才开始有了新的进展,三萜类茶皂素的结构才逐渐 明确起来。它的基本结构由皂甙元、糖体、有机酸三部分组成。其中,三帖类皂甙丰 要有茶皂苷元、、、、即茶皂草精醇、、、、和华茶皂苷元、 即山茶皂苷、七种。糖体部分丰要有阿拉伯糖、半乳糖、 四种,有机酸包括当归酸、惕各酸、 木糖、葡萄糖醛酸醋酸和肉桂酸等?】。年,四又从茶籽中分离纯化出四种新型皂甙, 分别为阿萨姆皂甙、、、,同时从茶叶分离出阿萨姆皂甙。其中一种常见的 分子结构式如图?: 脚 四? 、《:》白 图一茶皂素分子结构图 嘻一年,日本学者等人首次在茶树花中分离出种具有抑制血清甘 油三酸脂的茶皂素成分,在这之后又有余种茶树花中所特有的茶皂苷单体被检测 出来,其化学结构、生物活性以及两者之间的关系也被相继确定。经研究发现,茶树 花中的皂苷具有降血脂、降血糖、保护肠胃等牛物活性。 茶皂素是一种性能良好的天然表面活性剂,此外,茶皂素还具有显著的镇痛、止 咳、抗渗透、祛斑、消炎、杀菌‘。 、杀虫及促进植物牛长等作用。因而广泛应 用于日用化工、农药、医药、食品及建材、冶金和金属材料加工等许多领域,茶皂素 的利用己引起人们的广泛关注。 ..茶皂素的理化性质 茶皂素的物理性状 ,具有味苦、辛辣, 茶皂素具有山茶属植物皂苷的一般通性,熔点为。【 起泡及溶血等作用,其精制品一般为无色无灰的的结晶,同时具有刺激鼻粘膜的特性。 纯的茶皂素为乳白色或淡黄色固体无定形粉末。茶皂素结晶可稍溶于温水、二硫化碳 和醋酸乙酯,易溶于含水的甲醇、含水乙醇、正丁醇及冰醋酸、醋酐和吡啶中,但难 溶于冷水、无水甲醇和无水乙醇,不溶于丙酮、乙醚、苯、氯仿和石油醚等,在稀碱 性水溶液中溶解显著增。。茶皂素是一种优良的天然表面活性剂,具有发泡、稳 泡、乳化、去污、湿润、分散等多种表面活性作用。 颜色反应【.三萜类化合物在无水条件下,与强酸、中等强酸或酸作用后,会产牛颜 色变化或荧光反应。推测这种颜色反应的丰要作用原理可能是由于分子中的羟基脱水 后,使双键结构增加,然后经一系列反应牛成共轭双烯系统,然后在酸的作用形成 阳碳离子盐而呈色,这样就解释了有共轭双键的皂苷会很快呈色,而孤立双 键呈色较 慢的现象。这些特征的颜色反应丰要有:反应;?反应; 反应;反应;反应 光谱特征 紫外光谱,简称:一些研究表明,茶叶皂素和茶籽 皂素在处均有较大吸收峰.,但在处茶叶皂素有很高的吸收峰,而 茶籽皂素没有,这一现象应该是由于茶叶皂苷中有机酸部分的当归酸具有、共轭 双键,而茶籽皂苷中不含有当归酸,虽然皂苷配基中位的地方有一个双键,但可 能因为是环内孤立双键,导致紫外吸收峰很弱,使得紫外吸收峰有所差异。 红外光谱 ,简称:由于山茶属植物皂苷具有酯皂苷 和羟基,所以有。和。两个吸收带,而不同的皂苷因 为结构差异,也会有不同的现象。 沉淀反应 皂苷的水溶液与稀硫酸加热可以牛成白色沉淀。酸性皂苷通常指三萜类皂苷 的水溶液一般于乙酸铅、硫酸铵或其他中性盐类反应会牛成沉淀,而中性皂苷通常 指甾体皂苷的水溶液则需要加入一定量的氢氧化钡或碱式乙酸铅等碱性盐类,才能 有不溶性沉淀产牛。 ..茶皂素提取方法的研究 水提法 水提法是一种很普遍的浸提方式,丰要是利用茶皂素可溶于热水的性质,采用热 水为浸提液。这种浸提方法简单易行、成木低,但浸提时间较长,会导致茶皂素在热 水中变质,并且由于一般植物中水溶性的物质较多,使得浸提的针对性不强,导致很 多杂质溶于浸提液中,还容易产牛淀粉糊化和蛋白质胶体化,造成浸提效果不佳,所 得茶皂素颜色深,得率不高,纯度较差。所以水提法浸提的后续分离相对较复杂,但 是由于成木较低,方法简单,在工业牛产中运用还是很广泛。 张可等【 以油茶饼粕为原料,研究茶皂素的水提法。其工艺条件为:浸提温度 ?、.、料液比:、浸提时间,所得茶皂素的得率较低,大概只有% 芹右,为了进一步得到纯度较高的茶皂素,实验中采用壳聚糖絮凝沉淀除去杂质,再 结合超滤膜,得到含量为%的茶皂素,超滤的回收率为%。金月庆等‘用水提 法提取茶皂素,结合发酵法纯化粗品茶皂素,水提法的工艺为:料液比:、浸提温 度。、浸提时间.;发酵纯化的工艺参数为:.%的酶、.%的酶,酵母液与待发酵液体积比为:,所得茶皂素的纯度为.%。 有机溶剂浸提法 由于茶皂素易溶于含水的甲醇、含水乙醇、正丁醇等有机溶剂,而茶多糖,蛋白 质等水溶性较强的物质不易溶于浸提液中,所以大大提高了茶皂素的浸提效果,有机 溶剂浸提法就是利用这点,以甲醇、乙醇和正丁醇等有机溶剂为浸提液的提取方法。 但在实际运用中,由于甲醇毒性较大,而正丁醇回收网难,成本较高,所以大多采用 乙醇为浸提液,它不仪成本较低,安全可靠,而且易回收利用。有机溶剂法提取的茶 皂素一般颜色较浅,纯度也较高,所以运用面很广泛。李肇奖等【 运用乙醇浸提法提 取浸提茶皂素,其工艺为:浸提温度。,乙醇浓度%,料液比:/,浸 提时间.,茶皂素得率为.%。杨坤围等【 以茶籽为原料,?水乙醇为浸提液, 料液比为:.,回流,最后用丙酮去残油,得到纯度为.%的茶皂素。 混合溶剂浸提法 混合溶剂浸提法根据化合物的特点,选择不同的溶剂综合浸提,这样可以去除杂 质.扰,得到较纯的产品,这种浸提方式对溶剂要求较严格,是一种新工艺,但茶皂 素的得率相对较低,所以运用较少。钟海雁等以油茶枯饼为原料,浸提液为:/ 的%乙醇和己烷混合溶剂,其工艺条件为:浸提温度?,料液比:,浸提时间 ,残油和油茶皂素的得率分别为.%和.%。 微波辅助提取法 微波辅助提取法? ,简称,是利用微波能来提 高萃取率的一种技术。微波提取过程中,快速振动的微波电磁场,产牛大量的热能, 使得细胞内温度迅速上升,液态水汽化产牛很强的压力,会形成微小的孔洞和裂纹, 使得溶剂容易进入细胞内,提高了浸提率。的特点为穿透能力强、操作简单、 效率高、适用性广,使得现在人们越来越关注这种浸提方式。 吴雪辉等利用微波辅助提取法,从油茶饼粕中提取茶皂素,其工艺条件为:微 波功率,浸提时间,固液比:,原料粒度小于.,茶皂素得率为 .%。彭应兵掣利用微波辅助提取法提取茶皂素,工艺为:乙醇浓度%,微 波功率,固液比:,浸提时间,茶皂素产率可达.%。 超声波辅助提取法 超声波提取法 ,简称,是应用超声波强化提取有效成 分,对媒质产牛独特的空化作用和机械振动作用,是一种物理破碎过程,整个过程能 在瞬间完成。另外,超声波产牛的许多次级效应如热效应、扩散、击碎、乳化、化学 效应、牛物效应、凝聚效应等也能加速植物中的有效成分在溶剂中的扩散释放,促进 植物有效成分充分与溶剂混合,并且被浸提物质的牛物活性也保持不变,提高了破碎 速率和有效成分的提取率。但是由于超声波的作用力很强使得溶液中混入大量杂质, 影响了后续的纯化过程和产品的纯度,并且高频率的超声波对人也会产牛一些不良反 应,这些因素良制了其在工业中的广‘泛利用。 刘昌盛等【利用超声波法提取油茶粕中的茶皂素,其工艺 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 为:超声波频率为 ,超声功率为,提取时间为,乙醇浓度为%,料液比为:,提 取溶液温度为。,该工艺的提取率为.%,茶皂素纯度为.%。李静等【以 乙醇浓度为%、料液比为:、提取温度为?,超声波功率为,提取时间 为的工艺条件浸提茶皂素,所得粗品的得率为.%,茶皂素含量达.%。 超临界流体萃取法 超临界流体萃取,简称或,是以高压、 高密度的超临界流体为溶剂,溶解所需的组分,然后采用改变温度、压力等手段将溶 剂与所萃取的组分分离,最终得到所需纯组分的操作。超临界流体萃取是目前比较先 进的提取技术,该萃取技术的丰要特点是提取率高,无污染,并且产品中不会含有害 物质。但是超临界提取设备的价格比较昂贵,使得牛产成本较高,所以这项浸 提技术 目前仍不能进行大规模的牛产应用。 吕晓玲等【研究运用超临界流体萃取技术提取油茶皂苷,其工艺条件为: 压力,流量~,温度。,以%乙醇为夹带剂,萃取时间, 最后油茶皂苷的得率为.%,纯度.%。 ..茶皂素的纯化方法 因茶皂素有着很好的牛物活性和药理学功能,所以很多学者希望能够拿到尽量纯 的茶皂素来做后续的研究,也有很多保健产品加工中需要有纯度较高的茶皂素。但是 目前市场上,茶皂素的纯度都较低,所以如何能够拿到色泽白纯度高的茶皂素已引起 多数学者的关注,也已有不少茶皂素纯化方法被开发出来。 目前茶皂素的纯化方法中的工序都比较复杂,比如其脱色工序需采用氧化 破坏或离子交换树脂,甚至需要两者结合使用。常见的茶皂素纯化方法有化学沉淀法 、重结晶法、正丁醇萃取法、硅胶、明矾絮凝剂法、聚酰胺柱层析法等。这 些方法有其优点,也有很多不足之处。想要得到稳定、色浅及搞纯度的茶皂素比较苦 难,且得率都较低嘲。而杨国坤等‘使用胆甾醇的乙醇溶液可有效的分离纯化条皂 素【?,另外对该法改进后,可得到纯度超过.%的茶皂素纯品。新近也有在水 提法 基础上结合大孔树脂法和超滤膜法来对茶皂素进行分离纯化。 化学沉淀法 化学沉淀法常用的沉淀剂有氢氧化钙、氧化钡、碳酸氢钙以及盐基性醋酸铅等, 而沉淀转化剂应用较多的是碳酸氢钠、盐酸和碳酸氢氨等。丰要纯化过程是在茶皂素 水提液中加入沉淀剂沉淀茶皂素后释放茶皂素 。杨坤困等将氧化钙加入茶皂素 的%乙醇提取液中,再加入碳酸氢氨释放,获得了高纯度茶皂素产品。重结晶法 重结晶法是使用热乙醇重结晶,需将茶皂素粗样品加入并重新溶解后过滤,重 复~次该操作后,将盐酸加入合并的滤液中,待冷却后茶皂素即会结晶析出。根据 颜色粗略判断纯度,若不符合要求可再用此法纯化一次,可得到高纯度茶皂素。口; 。 法回收率较低,不适合工业生产使用【 正丁醇萃取法 等利用此方法来 茶皂素易溶于热的无水乙醇而难溶于冷的?水乙醇,故卢仁杰【 纯化茶皂素,可得到纯度达%芹右的茶皂素。另外,通过试验验证低级醇正丁醇是 较好的提纯试剂,通过对茶皂素样品连续浸提,得到茶皂素不仪得率高并且纯度也高。 而王路等首次将在茶皂素的纯化中使用萃取技术,其利用原理是低碳链脂肪醇对 茶皂素的作用规律。其通过多粗试验,最终利用辅助试剂.,得出一个完整的高含 量茶皂素的制备工艺,其中核心耳口是:正丁醇:一:粗茶皂素液:.:,,。 该法制得的茶皂素含量超过%,且表面活性改善明显,得率大于%。 絮凝剂法 絮凝剂法中的絮凝剂一般为硫酸铝钾或壳聚糖溶液,加入茶皂素提取液中,可使 其中的杂质发牛絮凝沉淀,静置过滤即可得到纯茶皂素的溶液,透明度和稳定性均较 好。絮凝剂法是一种快速、低成本的茶皂素纯化方法,所以在探索出工艺的基础上可 。 将此法应用于茶皂素的工业牛产中 硅胶柱层析法 硅胶柱层析法以硅胶填料为固定相,正丁醇为流动相洗脱,薄板层析检测洗脱结 果,浓缩含有纯茶皂素的洗脱液馏分即得到产品。此法因硅胶柱采用法装柱,上样 也采用法上样,则节约时间且节约溶剂。但干法装柱容易不均匀并产牛短路,易导 致不佳的纯化效果,所以该法虽得到的茶皂素产品质量较好,但也不适用于工业牛产 大孔树脂法 在茶皂素浸提过程中,蛋白质因不溶于高浓度乙醇而被除去。所以茶皂素提取液 丰要的杂质一般为单宁、黄酮及糖类物质,因这些物质和茶皂素都是非离子型极性物 质,故选择中性大孑树脂来分离较为适合,多数学者采用型大孔树脂来分离。分 离过程中,粗品中无机盐和低分子量糖类比皂素先被洗脱下来,而黄酮和单宁是酚类 物质易被碱液洗脱,只需在洗脱过程中增加碱液洗脱步骤即可去除这些酚类物质。另 。 外大孔树脂去除色素效果明显,结果得到的茶皂素产品质感好,纯度可达到%【 赵晓东 】根据吸附树脂能够吸附有机物的原理对茶皂素进行吸附纯化,用 .%水溶液洗脱为的聚苯乙烯型树脂上的样品以去除杂质和色素,再使 用%甲醇洗脱茶皂素组分,减压浓缩并燥后,得到纯度.%的性能优良的高纯茶皂素。该茶皂素纯化方法采用的是选择性强的树脂,其吸附量大,且容易发牛吸附 和解吸附,牛产周期短,整个试验过程使用的材料成本低,可大大降低纯化成本。而 唐明远等的研究中表明%乙醇为洗脱液时洗脱效果较好。徐德平等【 】同时研究 了几种不同的大孔树脂对茶皂素的纯化效果,最终确定一树脂效果最为理想,其 利用一大孔吸附树脂分离纯化、再使用丙酮进行沉淀、最后甲醇结晶,这个流程 最终得到的茶皂素产品纯度达%以上。 超滤膜法 超滤膜法纯化茶皂素是指使用截留分子量为~超滤膜分离技术来过滤 茶皂素的水提液,因水溶液中的各物质分子量不同,可将糖类、盐类及色素等分子量 与茶皂素相差较大的杂质去除,达到浓缩和精制茶皂素的目的。采用超滤膜法纯化茶 皂素较甲的时候是由曹万新提出的;而后续由黄自强验证了该方法的可行性。 曹万新等【】利用该法对少量茶皂素进行纯化,得到的产品纯度超过%,茶皂素纯 品质量也较好。 因超滤膜法纯化是在水提基础上的,即样品不需要使用有机溶剂来提取,这就大 大降低了牛产投资和运行成本,并且因水不会像有机溶剂那样具有毒性,故牛产上的 安全性提高,该法是茶皂素纯化牛产中很好的选择。但此法中所使用的超滤膜易受污 染,其的再牛较为网难。 .茶多酚 ..茶多酚的概述 茶多酚 ,简写即,亦称“茶鞣质”、“茶单宁”,是一类存在于 茶树中的多元酚的混合物。茶多酚由儿茶素类、黄酮甙类、花青甙类酚酸及缩酚酸 类等多种化学物质组成,其中儿茶素类化合物是茶多酚的丰要成分,约占茶多酚 含量的%~%左右。儿茶素类化合物丰要包括儿茶素、表儿茶素、表 没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯 和表没食子儿茶素没食子酸酯。其中结构式可表示为如图?:’’。’ 图?儿茶素分子结构图. ..茶多酚的主要生理活性和药效作用 自世纪年代.等对茶多酚类开展系统研究以来,茶多酚类的许多 功能被陆续发现。大量的研究表明,茶多酚不仪是一种天然无毒的抗氧化剂, 而且也 是一种理想的天然药物,具有多种保健功能和药理作用。 清除自由基 自由基是指具有基数电子或不配对电子的分子、原子和原子团。细胞在正常的代 谢过程中或不利的外界环境影响下,都会产牛自由基,如果人体内自由基过多就会导 致各种疾病,而茶多酚可有效地清除人体内过剩的自由基。有研究表明茶多酚对 ‘、.清除率可达%以上,在一定范围内呈显著的量效关系,清除速率均在 与数量级。 抗氧化作用【 茶多酚具有很强的抗氧化作用,其丰要体现在以下几个方面:?抑制脂质过氧化 反应;?螯合金属离子;?直接清除活性氧自由基;?激活细胞内抗氧化防御系统。 抗菌,抗病毒作用 茶多酚的抗菌作用已经被人们所认识,可以作为一种很好的天然活性物质开发利 用。在众多的抗菌试验中,人们发现它对普通变形杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、、 乳酸杆菌、肉毒杆菌、黄色弧菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、蜡状芽胞杆菌、 肠炎沙门 氏菌、绿脓杆菌、福氏痢疾杆菌、宋氏痢疾杆菌、伤寒杆菌等都具有不同程度的抑制 和杀伤作用。其中与具有特殊的作用。除此以外,茶多酚对很多真菌都 有很强的抑制作用和较强的抗病毒作用。日本岛村忠藤发现,绿茶和红茶的提取物具 有抑制甲、乙型流感病毒的效果。抗紫外线,抗辐射作用 茶多酚可有效抵抗紫外线造成的伤害,研究表明,在表儿茶酸的种衍牛物中, 以的作用最强。并且茶多酚还可减轻射线辐射诱发体外细胞转化,提高细 胞存活率~倍,增强细胞增殖能力.~.倍。 防治心血管病【 可通过多种药效作用预并阻止心血管病的发牛和发展,目前比较明确的作 用包括:降血压作用; 降血脂作用: 抗动脉粥样硬化;对心肌损伤的保护 作用;改善高凝和高粘状态。 除此之外,茶多酚还具有除臭、延缓衰老、抗龋护齿、抗肿瘤印等作用,可见 茶多酚的用途很广泛,具有很高的利用价值。 ..茶多酚的提取方法研究进展 目前茶多酚粗品的提取方法有溶剂萃取法、微波浸提法、超声波浸提法、超临界 萃取法等。 溶剂萃取法【 溶剂萃驭法是传统的提取工艺,该法利用茶多酚可溶于水、甲醇、乙醇、乙 酸乙 酯、丙酮、乙醚等溶剂而不溶于氯仿的性质,将其从茶叶中分离出来。这种萃取方法 可根据被提物的溶解性选择适合的浸提液,丰要分为水提取法和有机溶剂萃取法两 种。熊何建等【利用溶剂法对茶叶中茶多酚进行提取分离,首先将茶叶用%的乙 醇溶液在?恒温下提取两次,每次,将浸提液浓缩后,先后利用复合 物溶液进行脱色、乙酸乙酯提纯、柠檬酸水溶液洗涤,最后将乙酸乙酯回收利用,所 得茶多酚得率为.%,茶多酚的纯度为.%。姜绍通等【运用水提法对绿茶茶 多酚的提取工艺进行了研究,结果表明:?该提取纯化工艺适用于工业化规模牛产。 在控制好浸提条件茶多酚工业化牛产的提取率大于%,纯度高于%,儿茶素含量 大于%;?茶叶破碎达到~目,茶汤制备宜取茶水比:~:,浸提时间 ~分钟,水温?。对茶水进行膜分离预处理,可以改善茶汤的溶液性质,有 利于进行萃取操作。?乙酸乙酯是萃取茶多酚的理想溶剂。工业牛产上采用间歇式三 级逆流操作,萃取率可达到稳定可萃取值的%。 微波浸提法 微波浸提法是利用微波能来提高萃取率的一种新技术。其原理是利用物质在 微波 场中分子高速振动,产牛大量的热量,大大提高茶多酚的浸提率。经研究表明, 微波浸提对物质本身化学结构和性质影响都较小,大大地缩短了提取时间,防止茶多 酚氧化。宁楠等【 研究微波萃取法,以儿茶素提取率为指标时,其最佳提取工艺为: 微波功率为,乙醇浓度为%,料液比为:,浸提时间为;以茶多酚提 取率为指标时,最佳提取工艺为:微波功率为,乙醇浓度为%,料液比为:, 浸提时间为。 超声波浸提法 超声波浸提法 ,,是利用超声波利用超声波在液体中 传播,使介质不断压缩和拉伸,产牛一些列特殊效应,促进被提取物溶于浸提液中, 通过对茶叶中丰要化 这种方法提取茶多酚高效,简单,但对仪器要求较高。夏涛等【 学成分的研究,比较微波和超声波两种浸提方式,尝试将微波和超声波浸提技术应用 于茶饮料的牛产加工中,并结合感官审评结果,其中微波浸提的最佳工艺为:粉碎度 ~目,茶水比:,浸提.;超声波提取的最佳工艺条件为:功率, 温度?、浸提时间。得出微波和超声浸提法对茶多酚、氨基酸和咖啡碱的提 取效果与常规浸提法差不多,但可以抑制茶叶中的蛋白质和果胶等大分子物质的浸 出,其中超声波浸提法更加有利于儿茶素的提取。 超临界萃取法 超临界流体萃取,简称或的原理是利 用超临界流体的溶解能力与其密度的关系,即利用压力和温度对超临界流体溶解能力 的影响而进行的。通常以流体作为一种萃取溶剂,本身无毒无味,容易获得, 价格便宜,极易渗透到被提取物中,并且也容易分离,此外流体还可以是复合 的,添加适当的夹带剂可大大增加其溶解性和选择性。在萃取过程中,对温度和压力 的要求很严格,通过控制和改变这些因素,可以使得所提物更好地浸提出来。不 仅萃取效率高,而且可以有效地防止热敏性成分的氧化和逸散,能较好地保存有效成 分不受破坏,并且临界流体一般为无毒的气体,分离后也不会有任何溶剂残留。一般 来说,不同超临界流体的溶解性也不同,为了使流体与溶质更好地融合,可以添加少 量修饰剂,促进浸提效果【孙?。 目前,超临界萃取法是一种比较新型的分离技术,在很多领域都运用广泛,国外 很早对技术进行了研究,并且申请了专利。技术应用于茶多酚的提取上, 不仪可以得到纯度很高的茶多酚,而且在提取过程中还防止了茶多酚氧化,所以这种 浸提技术有很大的应用前景。王小梅等利用超临界萃取技术研究茶多酚的提取工 艺,得出其最佳实验条件是:萃取压力为,萃取温度为。,萃取时问为, 分离压力为,分离温度为?,流量为./,所得茶多酚萃取率可达到 %,所以超临界萃取技术在茶多酚的提取上是有效可行的。 ..茶多酚的纯化方法 目前茶多酚的纯化方法丰要有溶剂萃取法、沉淀法、树脂法等三种。 溶剂萃取法 溶剂萃取法是一种较为传统的提取工艺,丰要是利用物质在不同溶剂中的溶解性 萃取所需物质。茶多酚易溶于热水、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯等极性溶剂,而不溶于氯仿、正丁醇、石油醚、己烷等非极性溶剂,所以很多纯化工艺采用乙酸乙 酯、氯仿等有机溶剂反复萃取,精制。此纯化方法所得的有效成分含量较低,且需要 使用大量的有机溶剂,有些溶剂甚至有毒,操作步骤也较复杂,所以牛产上的可行性 不高。 沉淀法 九十年代以来,人们根据茶多酚在一定条件下易与金属离牛成沉淀的性质,研 究利用沉淀法来萃取茶多酚的方法。研究表明,、十、、、、 等可溶性金属离子均可作为茶多酚的沉淀剂,但以和效果最好。由于茶多酚 在碱性条件下极不稳定,所以此纯化方法采用在酸性或中性条件下萃取,并且无氧化 损失。该方法选择性较强,所得有效成分含量较高,产品的色泽和水溶性都较好,并 且工艺比较简单,成本低,易被医药工业和食品工业接受。但是这种方法对值的 要求较高,并且对金属离子的选择也很重要,要避免有毒重金属离子的使用。 此方法对沉淀剂的选择很重要。目前,常用沉淀剂有三种:、金属盐离子,如: 、、、等,简单易得,但易在碱性条件下沉淀;、氢氧化物,如 、等,这些均有腐蚀作用,不易控制;、重金属碱式盐,如、 以低档茶为原料,利 等。沉淀法的提取率相对较高,杂质少。杨晓林等【 用沉淀法提取茶多酚,最后得到纯度为.%以上的茶多酚产品。 树脂法 树脂法是纯化工艺中较常见的方法,利用吸附树脂对多酚类有机物质的选择吸附 性来分离纯化,可对特定结构的化合物进行选择性吸附。此方法所得的产品纯度较高, 并且工艺简单,能耗低,整个过程没有污染,树脂又可再牛,易被反复利用,提取效 率较高,所以树脂法是一种较普遍的纯化方法,根据其操作方法的不同可分为离子交 换柱分离法、吸附柱分离法和凝胶柱分离法三种。 树脂法现在很广泛地应用于茶多酚的分离纯化上,不仅可以分离的茶多酚纯度较 高,而且树脂和洗脱液一般可以回收利用,这样大大降低了成本,有利于工业牛产。 陈海霞等【 】利用树脂法从茶叶中分离出茶多酚、茶多糖和咖啡因种有效成分,其收 率分别为.%、.%、.%,所以树脂法对于茶多酚的分离纯化很有效果,具有很 好的应用前景。引言 .研究目的及意义 我围茶叶种植面积居世界第一,茶资源非常丰富,但长期以来,人们只重视对茶 树芽叶的利用,而忽视了茶树其他部分的价值,特别是作为茶树牛殖器官的茶树花。 研究表明,茶树花含有与茶树鲜叶相似的成分,包括茶多酚、茶皂素、茶多糖、茶皂 素、氨基酸、黄酮类等多种生物活性物质。可见,充分开发利用茶树花资源,不仪能 有效的避免浪费,提高茶资源的利用率,而且可以开拓新的前景并创造更大的经济效 益。 随着科学技术的不断发展,人们对天然活性物质越来越重视,其中茶皂素和茶多 酚不仪在食品、日常用品等方面被很广泛地运用,而且在药品和保健用品上也慢慢被 开发和利用,所以含有这两种活性成分的茶树资源现在越来越被重视,而茶树花作为 一种可增值的茶叶副产物,具有很大的开发前景和利用价值,不仪可以扩展茶产业, 同时对于节约茶资源,提高综合利用率和茶农的经济效益都具有很现实的意义。 目前,对于茶树花中特殊牛物活性物质的综合提取、纯化和利用等方面的研究较 少,特别是综合提取技术还不成熟。虽然茶树花中含有较丰富的茶皂素和茶多酚,却 很少能被开发利用,造成很大的资源浪费。为此木论文对茶树花中茶皂素和茶多酚的 开发利用进行相关研究,旨在为茶树花的研究开发提供参考。 .研究的主要内容及技术路线 ..茶皂素定量测定中去干扰研究 对多酚类物质具有很强的吸附性,应用去除茶皂素测定中的扰因 素,并对的用法进行了相应的研究,使得茶皂素的定量测定更加精确。 ..茶树花中茶皂素和茶多酚的综合提取技术 利用单因素和正交试验设计,分别以乙醇浓度、浸提温度、料液比、超声波功率、 浸提时间为考察对象,根据综合对比茶皂素和茶多酚的得率,确定茶树花中茶皂素和 茶多酚的最佳综合提取工艺。 ..茶皂素和茶多酚分离纯化 首先,通过静态试验选出最佳大孔吸附树脂,然后将浸提粗样利用不同浓度梯度 的乙醇溶液进行洗脱,得到分离纯化的茶皂素和茶多酚样品,最后通过各样品的特性 进行分析鉴定。 ..茶皂素和茶多酚相关抑茵的研究 为了进一步研究茶皂素和茶多酚的实际应用价值和开发应用前景,实验以金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、四联球菌和酵母菌这四种菌为研究对象,对这两种牛物活性成 分的抑菌性做相应的研究。 ..技术路线 冷冻干燥 离纯化 匝巫因 浓缩,真空燥上 茶多酚纯化样品 抑菌试验材料与方法 .材料、试剂及仪器 ..实验材料 茶树花,年月一月采于安徽农业大学大杨店茶园,鲜花摊放后, 微波杀青, 。烘箱足干,粉碎至目以备用,测定含水量为.%。 ..试剂及试材 茶皂素标准品:茶叶楼重点实验室提供; 大孑树脂一、、、、; 无水乙醇、%乙醇、甲醇、浓硫酸、香草醛、硫酸亚铁?、酒石 酸钾钠?、十二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾 、正丁醇、冰醋酸、碘、牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、酵母膏、琼 脂、葡萄糖、、青霉素; 试纸、培养皿、打孔器、涂布棒; 、四联球菌 金黄色葡萄球菌 、枯草杆菌 “ 和酵母菌以上菌种由茶叶楼重点实验室提供 ..实验仪器与设备 一粉碎机,上海嘉定粮油仪器有限公司; 公司; 一电子天平, 一一超纯水机,重庆颐洋企业发展有限公司; 一微波炉,上海松下微波炉有限公司; 一超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司; 可见分光光度计,尤尼柯上海仪器厂; 一型电热恒温鼓风燥箱,上海一恒科技有瞠公司: 一恒温数控水浴锅,国华电器有良公司; 一冷冻干燥机,北京松源华兴科技发展有限公司; 真空燥箱,德围公司; .,科大玻璃厂定制; 层析柱 旋转蒸发仪,上海申牛科技有限公司; 电热恒温培养箱,上海新苗医疗器械制造有艮公司; 一高效液相色谱仪,美国公司; 质谱仪,赛默飞世尔科技公司,美围; 一日本三洋全自动高压蒸汽灭菌器,上海旦鼎围际贸易有限公 司; 恒温培养振荡器,上海智城分析仪器制造有良公司; 单人单面净化工作台,苏州净化设备有限公司; .实验方法 ..茶树花中茶皂素和茶多酚的综合提取 ...材料的预处理 在。烘箱中烘至含 将采摘后的茶树花摊放,再用微波杀青, 水率为.%,粉碎至目备用。 ...定量测定方法及除扰研究 茶皂素含量的测定方法:香草醛一硫酸法 茶皂索标准曲线的制作:取茶皂素标准品用甲醇定容到,配成 /的茶皂素标准品溶液,从中分别吸取.、.、.、.和.标准样品 置于玻璃试管中,用适量的甲醇分别将体积补充到.,后采用香草醛一硫酸 %的香草醛乙醇,冰水浴中加入 法测定茶皂素含量,即向玻璃管中加入. %的浓硫酸,摇匀,密塞,?水浴,后放入冰水浴中静置,以甲醇 为空白对照,茶皂素的浓度为横坐标,处的吸光度值为纵举标制作标准曲线, 如图?。 函? 篓? 餐. . . . . .苎 . 茶皂素浓度/ 图.茶皂素标准曲线 .?. 根据上述标准品实验方法,以茶皂素浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标, 求得回归方程:.一..,/。 对茶皂素测定影响 由于茶树花浸提液中含有大量的多酚类物质会影响香草醛一硫酸法测定含量,所 以试验采用聚乙烯聚吡咯烷酮,简称四,来吸附多酚 类物质,减少对茶皂素定量洲定的扰。易围斌【等人研究表明,可吸附茶汤中的多酚类物质,减少对香草醛一硫酸法测定的的影响。本试验分别设置了的 浓度梯度为:、.、.、.、.、.、.和./及吸附时间梯度为、、、 、、和来研究对茶树花浸提液中茶皂素测定去.扰的影响, 并且通过对茶皂素标准品的处理试验来研究是否对茶皂素木身有吸附作 用。 茶多酚含量的测定:酒石酸亚铁比色法/一, ...茶皂素和茶多酚的综合提取方法 称取一定量的茶树花粉末于的具塞试管中,按照一定的浸提时间、料液比、 浸提温度、乙醇浓度和超声波功率浸提,再过滤,取上清液定容到,再从中取 定容到,所得待测液以备测定。 单因素实验设计 以浸提液中茶皂素和茶多酚的得率为指标,分别研究浸提时间、料液比、浸提温 度、乙醇浓度和超声波功率对茶皂素和茶多酚综合提取工艺的影响,单因素试验设计 如表?。 表单因素浸提试验设计 ? 正交优化试验 在单因素浸提条件试验的基础上,以乙醇浓度、浸提温度、料液比、超 声波功率、浸提时间为考察对象如表?,按进行正交试验设计,以 茶皂素和茶多酚的得率为指标,采用.进行新复极差和正交 统计分析,确定综合提取的最佳工艺条件。 表正交试验设计 素 水平 料液比 超声波功:笨 乙醇浓度% 浸提温度? 浸提时间 ?一: : ::验证试验 根据上述实验得出的最佳浸提工艺做三个平行验证试验,并求出平均值,得 最佳 工艺浸提液中茶皂素和茶多酚的含量。 ..茶皂素和茶多酚的分离纯化 为了提高茶皂素和茶多酚的分离纯化效果,通过静态试验,从五种常用的大 孔 树脂中选出最佳大孔树脂,然后用不同浓度的乙醇进行洗脱分离,得到较纯 的茶皂素 和茶多酚样品。 树脂的预处理 将新的大孔吸附树脂用%的乙醇浸泡,再经%盐酸和%氢氧化钠重复处 理两次,然后用蒸馏水洗至中性备用。 树脂的筛选 实验中选择、、一、、五种常用的大孔树脂进行 比较,根据各种大孔树脂的物理参数表?和静态吸附试验的比较,选出最适合 的大孔树脂来分离纯化茶树花浸提液。 表?各种大子树脂的物理参数将预处理好的不同类型的树脂称取,置于锥形 瓶中,分别向每个锥形 瓶中加入待吸附的浸提液,振荡,然后放室温下静置,使树脂能充分吸附,最 后将吸附后的树脂过滤出来,测定茶皂素和茶多酚的含量,进而得出树脂的吸 附率。 吸附率%./ 、??分别为吸附前后上样液得茶皂素/茶多酚的含量/; 在己吸附饱和的树脂中,分别加入%乙醇洗脱液,振荡,然后过滤出 洗脱液,测定茶皂素和茶多酚的含量,进而测出解吸率。 解吸率%/? ??洗脱液的茶皂素/茶多酚的含量/; 。??上样液体积; ??洗脱液体积 大孔树脂洗脱 首先,将最优超声波浸提工艺提取的浸提液浓缩,然后通过真空冷冻燥,得到 待分离的固体,以备用。 选用静态吸附实验筛选出的大孔树脂进行预处理,然后采用湿法装入 .×的层析柱中层析柱底部小点一下团脱脂棉,防止细小树脂颗粒堵塞 柱子,用纯水冲洗层析柱,使得柱子变得踏实。取一定量样品溶于%乙醇,上样。 由于不同浓度的乙醇洗脱下来的物质不同,所以为了更好地分离茶皂素和茶多酚,分 别用纯水、%、%、%、%、%不同梯度按照./的流速洗脱,每 接一次流出液,每个梯度四份样,然后将每个流份的样品浓缩后,通过薄层检 测和显色反应与标准品比对,来定性检测分离出的茶多酚和茶皂素,再将相同成分的 流份合并浓缩,最后经过真空燥得到相对较纯的茶皂素和茶多酚样品。 ..茶皂素和茶多酚的鉴定分析 ...茶皂素的鉴定分析 化学呈色反应 将茶皂素粉末悬浮于装有无水醋酸的具塞试管中,加入?滴浓硫酸观察颜色变 化:取少量样品溶液,加入质量分数为%香草醛乙醇溶液?滴,加体积分数为% 的硫酸进行显色,溶液若为?色,则该溶液不含茶皂素。如果溶液为黄色,则 溶液中含有茶皂素。 泡沫实验‘ 分别取一定量的茶皂素标准品和提取纯化的茶皂素样品置于小试管中,注入 少量 纯水,振荡一会,观察两种样品的起泡情况和泡沫的持久性,实验中以纯水为 空白对 照。 薄板层析分析‘ 将分离纯化出的茶皂素和标准品用薄层色谱法进行对比,所用展开剂为正丁 醇:冰醋酸:水::,观察样品在薄层板二的展开情况,判断样品是否为茶皂素。 检测 将茶皂素标准品和样品配成/,色谱条件:一泵, 高效液相色谱工作站;色谱柱: .;流动相:相为.%乙酸;相为乙腈;流速为./; 柱温:。;进样量:.;检测波长:;梯度洗脱程序为表?。 表?高效液相色谱梯度洗脱程序 问 兜 呢 弛 钙 知 钙 郇 巧 如 笛 铊 眩 鲫 呓 质谱 汤雯等删人通过质谱、核磁共振等技术,得出茶树花中皂苷种类很多,其中有 余种皂苷是茶树花中所特有的,分子量丰要集中在?左右。所以,可通过 质谱仪检测出样品的分子量,看其样品是否符合茶皂素分子量特征,进而推 测是否为 茶皂素类物质。 ...茶多酚的鉴定分析 显色反应 茶多酚能与溶液发牛显色反应,这种特殊的显色反应可以用来检验酚羟基 的存在,这种显色反应丰要是由于酚与反应牛成了蓝黑色的络合物。 沉淀反应 多酚类化合物易于一些重金属离子如、、、等发牛络合反应, 产牛沉淀,所以实验中采用、、三种金属盐溶液与茶多酚样品反应, 观察是否有沉淀牛成。 质谱 茶多酚中儿茶素占丰体,其中几种特征儿茶素的分子量在?左右,丰要 为小分子物质,通过茶多酚样品的质谱图,观察是否有这段分子量的物质峰, 如果有, 说明所得纯化样品的分子质量满足茶多酚的特性。 ...茶皂素和茶多酚样品的纯度测定 将所得样品溶于甲醇,配成浓度为/的溶液,用分光光度计法分别测定吸 光度值,并计算出样品纯度。 按...的方法测定茶皂素和茶多酚样品的含量 茶皂素纯度%最终样品中皂素的含量/样品的质量× 茶多酚纯度%最终样品中多酚含量/样品的质量× ..茶皂素和茶多酚的抑菌试验 ...培养基的制备 金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、四联球菌的培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基, 其 成分为:.%牛肉膏、%蛋白胨、.%、.%琼脂;酵母菌培养基的配方为: %酵母膏、%蛋白胨、%葡萄糖、%琼脂。 ...样品溶液的制备 称取一定量的茶皂素和茶多酚样品,溶于溶液,配成浓度为/、 /、 /、./、./、./,放在紫外灯下灭菌,以 备用。 ...培养基和实验用具的灭菌 将固体培养基、液体培养基和实验用具放在灭菌锅中灭菌及一部分实验用具 置于 ?高压灭菌锅中灭菌,以备用。 ...供试菌种的准备 将供试菌种从斜面上接入灭菌后的液体培养基中,扩大培养待用。注意酵 母菌的液体培养基与其他三种细菌有所不同 ...抑菌实验 灭完菌后,趁热在培养皿上制作固体培养基,待培养皿凝固后,按一定比例加入 已培养好的菌种试液,然后用涂布器将一定浓度的菌液均匀地涂满整个培养皿,再用 打孔器在固体培养基上均匀地打出四个孔,在培养皿底部分别标上、、、,分 别代表空白溶液、青霉素、茶多酚、茶皂素四种样品每组中一个浓度梯度设置三个 平行实验,分别在每个孑中加入已配好的相应浓度的样品溶液,然后将培养皿放入 恒温培养箱中培养,最后观察培养皿中菌种的长势情况,进而分析样品的抑制作 用。结果与分析 .茶树花中茶皂素和茶多酚的综合提取 .. 对茶皂素测定影响 研究表明,对多酚类有吸附作用,但不吸附茶皂素。用量越多,它 对茶树花浸提液中多酚类物质的吸附能力也越强。图?的实验结果表明,当 用量为. /时,茶皂素得率的测定值趋于稳定,这时达到最大的去杂效果。 而图?的实验结果可知,随着作用时间的延长,茶树花浸提液中的多酚 类物质不断被吸附,比色法测定的茶皂素含量也在不断地接近真实值,当对 浸 提液作用 后,其测定的值基本上趋于稳定。为了尽可能地减少这类物质对茶皂 素测定的影响,试验最终选用的去扰方法为:的用量为./;处理时间为 ,以此除去供试液中多酚类物质对香草醛.硫酸法测定茶皂素的影响。同时, 为 了考察对茶皂素本身是否有影响,实验中采用相同的处理茶皂素标准品, 前后的测定值并没有什么变化,可见,对茶皂素本身没有吸附作用,所以,这 种方法可有效地用于茶皂素测定时去除相应的扰因素。 主引 ?? ??: . .【】 . :,~,,量/’’处理时间 图 的用量对茶树花浸提液中茶皂素测定的影响 图 的处理时间对茶树花中 茶皂素测定的影响 .? .. ‘..单因素浸提效果的分析 ...乙醇浓度对茶皂素和茶多酚得率的影响 由图?的实验结果可知,随着乙 一茶皂素一茶多酚醇浓度的不断增加,茶皂素和茶多酚的 。 得率也在不断地变化。当乙醇的浓度从 糌 %增长到%,两者的得率增长幅度 孵,。最大,%一%之间的变化幅度并不明 显,但以后随着乙醇浓度的增加,茶皂 乙醇浓度二 素和茶多酚的得率呈现逐渐减少的趋 图乙醇浓度对茶多酚和茶皂素得率的影响.? 势。由于多酚类具有较强的水溶性,因此乙醇浓度太高不