【doc】感染IBDV雏鸡血液ANAE^＋——淋巴细胞比例和IL—2水平的动态变化研究

【doc】感染IBDV雏鸡血液ANAE^＋——淋巴细胞比例和IL—2水平的动态变化研究 感染IBDV雏鸡血液ANAE^，——淋巴细 胞比例和IL—2水平的动态变化研究 安徽农业大学,1999,26(2):183—187 JournalofAnhuiAgriculturalUniversity\1fg3—U 感染IBDV雏鸡血液ANAE十一淋巴细胞 比例和IL一2水平的动态变化研究 f陈龙殷定忠 ,/庞训胜邹叔和 霹罚翰霜E技禾而话丐动科系,风阳233100) '8\ 摘要研究了经IBD弱毒苗免疫和未免疫的30~59日龄AA鸡在感染传染性法氏囊 病藕毒(IBDV)后血液ANAE一淋巴细胞比例和白细胞介素一2(IL--2)水平动态变化. 结果表明,血液ANAE一淋巴细胞()在攻毒后的头5d内未免疫攻毒鸡(A组)和免 疫攻毒鸡(B纽)明显下降t且A纽比B纽下降的更快,第5天A组明显低于未免疫未攻毒 鸡(c组)tB纽也较C组低,C组没有明显的变化,咀后A和B组均回升,但B组比A组 回升的快一王28d时A和B组均达到或接近攻毒前水平,井接近或高于c组.血泉IL一2 水平A和B组在IBDV攻毒后的头7d内呈连浙下降趋势t但A组下降的曼剧烈,c组无明 显差异性变化,三组相比,B和C纽均高于或明显高于A组,以后A和B组避渐回升. 关键词雏鸡感染IBDVANAE一淋巴细胞IL--2变化七 分类号一$858. 一——,l 淋巴细胞是体内最重要的免疫活性细胞t其中T淋巴细胞在细胞免疫中起重要作 用,T淋巴细胞质中存在酸性非特异性酯酶(Acid一一naphthy[一acetateesterase, ANAE)t用组织化学染色法可对酯酶部位显色,从而判定T淋巴细胞(即ANAE一淋 巴细胞)所占比例,了解其活性状况口].白细胞介素一2(IL一2)是由活化的T淋巴细 胞产生并促进T淋巴细胞生长的因子,它是保障机体正常免疫功能的关键环节.可以通 过促使某一特定的T细胞群体的克隆性扩增,通过T细胞数目及功能的提高来增强整 体的免疫功能.因此,研究组织器官,细胞或血液中ANAE一淋巴细胞活性和IL一2 水平的变化具有重要意义. 传染性法氏囊病是一种以淋巴组织坏死为主要特征的急性,接触性传染病,以往对 其病原学,流行病学,免疫学,特异诊断和疫苗制备等已进行了广泛研究0],但比较免 疫和未免疫IBD的雏鸡在感染IBD强毒后细胞免疫反应的研究尚少见.郏世民和张登荣 等分别研究过雏鸡感染IBDV前后免疫器官组织中和外周血液中的ANAE阳性淋巴细 胞变化',石放雄等研究过肉鸡神经内分泌免疫网络在IBDV弱毒免疫和强毒感染时发 生的调节机制],本文比较研究了在免疫和未免疫状态下,用IBD强毒感染肉鸡后血液 ANAE阳性淋巴细胞比例和IL一2水平动态变化,旨在揭示IBDV对雏鸡血液某些细胞 ? 安徽省自然科学基金资助课题 胨龙.男.1964年生,博士,副教授.收稿日期:1998—05—25 安徽农业大学 免疫反应产生的影响,探讨其在免疫和未免疫状态下鸡IBD发生发展中的变化. 1材料与方法 1.1疫苗IBD弱毒疫苗由南京药械厂提供,批号950537. ,微量琼扩IBD为阴性的AA父母代种鸡所产的蛋孵化.1.2试验鸡取无IBD病史 取 320羽健雏随机分成3组:未免疫攻毒组(A组),免疫攻毒组(B组)和未免疫未攻毒 组(c组),每组40羽,隔离饲养.待鸡15日龄时,B组鸡群接种IBD弱毒苗.27日龄 时,每组随机选取1O羽安装颈静脉插管. 1.3强毒和攻毒试验强毒由本院传染病教研室提供,经确诊为患IBD的当地鸡囊毒, 再经接种健康鸡发病死亡后,采集法氏囊5,10个,按1:3加生理盐水制成匀浆,1500 rpm离心15min,取上清液,按1000U/ml各加青,链霉素混合,一2OC保存备用.在 鸡33日龄时,A,B组鸡用IBD强毒0.5mI滴鼻点跟,C组对照. 1.4血样采集与处理在IBDV感染前1d和感染后1,3,5,7,14,21,28d,每组 由安装颈静脉插管的鸡血样15mI,肝素钠(1:500)抗凝,作血涂片,然后以3000rpm 30min分离血浆,置一2O?冰箱保存待测. 1.5测定指标和方法ANAE一淋巴细胞比例一酸性非特异性酯酶组织化学染色 法j.计数其占淋巴细胞百分率;血浆IL一2放射免疫方法,试剂盒由中国科学院上海原 子核研究所提供.严格按药盒说明书进行. 1.6数据处理以平均值和 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 误(Mean4-SEM)表示,用SAS软件对数据作 Studentst检验,方差分析和相关性分析,确定差异显着. 2结果与分析 2.1鸡群表现攻毒后,未免疫攻毒鸡(A组)在第1d未见明显异常,1d后部分鸡表 现轻度临床症状,3d后均出现精神抑郁,战栗,减食,粪便浅白色水样,剖检可见法氏 囊浆膜有谈黄色胶样渗出物,皱壁肥厚增大等与文献报道相一致的IBD临床症状和剖检 变化,整个试验期A组鸡死亡率7.免疫攻毒鸡(B组)和未免疫未攻毒鸡(c组)无 异常表现,剖检未见组织器官有明显变化 2.2感染IBDV雏鸡血液ANAE一淋巴细胞比例动态变化由表1可见,在攻毒后的 头5d内,A组和B组呈逐渐下降,其中A组在攻毒后的第3d就明显降为2o.38? 1.7O,明显低于C组,B组在攻毒后第5d虽有明显下降到2452+1.89,但高于A 组,与C组无明显差异,C组保持在33.06?34.12范围内变动,至第5d为34.56~ 2.13,在攻毒后的第7dA组ANAE一淋巴细胞仍明显低于攻毒前和C组水平,以后 A组和B组均回升,但B比A组回升得更快,在攻毒后第28d时A和B组均达到或接 近攻毒前水平,并接近或高于c组. 2.3感染IBDV雏鸡血浆IL一2水平动态变化表2显示,在攻毒后的头7d内,A组 和B组呈逐渐下降趋势,A组至第5d明显降为2.76~0.24t~g/L,显着低于B组和C 组,B组在攻毒后第7d虽明显下降到3.83士0.14pg/[,但仍显着高于A组,C组保持 在3.88,4.88范围内变化,至第7d为3.88+0.19g/L,明显高于A组,以后A组和 B组均回升,但B比A组回升得更快,在攻毒后第28d时A和B组均达到或接近攻毒前 26卷2期陈龙等感染IBDV雏鸡血液ANAE一淋巴细胞比例和IL--2水平的动态变化研究185 水平,并接近或高于C组. 表1感染IBDV雏鸡血液ANAE,淋巴细胞比例()动态变化 Tabte1Changeofb]oodANAE--lymphocytesratio()inchickeninfectedwithIBDV (n一10,Mean?SEM) 注:表中同一到以A,B,C标记者差异极显着(P<O.01),a,b.c标记者差异显着(P<O.05),相同字 母标记者差异不显着(>0.05).下同;*<C0.05*<0.01,与攻毒前1d(30日龄)比 较= 表2感染IBDV雏鸡血浆IL--2(g/L)水平动态变化 Table2Chan~eofplasmaIL--2(/L)levelinchickeninfectedwithIBDV(n=l0,Mean~SEM) 注:*表示P<o.05,**表示P<001,***表示P<0.001,与攻毒前1d{30日龄)比较 24ANAE一淋巴细胞比例与IL--2水平闻的相关性分析发现只有A组的ANAEt 一 淋巴细胞()与IL一2呈显着正相关,相关系数r为0.7322(P<0.05). 3讨论 大量的研究已证实,IBDV经口感染后可经血液和粘膜上皮侵害鸡的淋巴系统,特别 是体液免疫的中枢器官法氏囊,引起其内的淋巴组织坏死和枯竭,导致体液免疫抑制;还 可危害鸡胸腺和脾脏,引起细胞免疫抑制'.龙塔等实验研究发现.21日龄雏鸡接 种IBDV强毒后3,7d,法氏囊,胸腺,脾脏,盲肠扁桃体等淋巴细胞组织中IBDV中荧 安徽农业大学 光细胞的出现达到高峰,此时这些淋巴细胞的坏死亦达到最严重的程度,胸腺淋巴细胞 坏死可持续到攻毒后10d_6.本研究发现,在攻毒1d后A组外周血ANAE一淋巴细胞 ()就明显下降,B组也呈下降趋势,c组投有类似的变化,到攻毒后第5d时,A和 B组均降到最低值,A组与c组相比差异显着,说明IBDV严重侵害T淋巴细胞活性,并 从另一个角度论证了龙塔等人的研究结果. 本研究显示,在攻毒后的头7d内A和B组血浆IL一2活性呈下降趋势,A比B组 下降的更剧烈,在5,7d降到最低值,而B与c组的水平无明显差异;相关性分析表明, 只有A组ANAE一淋巴细胞()与IL一2呈显着的正相关提示IBDV侵人体内后, IL一2话性水平的显着下降与活性的T淋巴细胞大量减少有直接的关系. 研究结果还表明,整个实验期,A组ANAE一淋巴细胞()与IL--2水平比B组 和c组下降的更剧烈tB组始终高于或明显高于A组且回升的更快,提示疫苗免疫具有 保护作用.免疫鸡因自身体内抗体的保护作用,淋巴细胞的损害可能较轻,所以很快 ANAE一淋巴细胞()与IL一2水平即恢复 比较研究充分证明:接种弱毒疫苗以提高机体免疫力,可以减轻IBDV对鸡免疫系统 特别是淋巴组织细胞造成的严重危害,从而维持ANAE一淋巴细胞()与IL--2水平 在高阈值上因此,重视预防免疫,制定最佳,有效的免疫 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 ,将是防制恶性传染病 的最为积极的措施之一 参考文献 1王承诰,唐玉新,王亚鸣.T淋巴细胞的酸性非特异酯酶标记及其定位.江西农业大学,i984, (1):I,10 2杨廷彬,尹学念主编一实用免疫学.长春:长春出版社,1994,31,45 3王君伟.鸡法氏囊病病毒在人工感染雏鸡体内的分布和带毒期.中国畜禽传染病,1989,(1):5, 7 4唐渣泽,陈桂华.鸡传染性法氏囊病的电镜诊断.中国兽医科技.1992,22(4);24~25 5李劲松,薛建平,郑明球等.鸡传染性法氏囊病组织灭活苗的免疫效力试验.中国畜禽传染病, I99i,l:I3,i5 6龙塔,程相朝,赵淑娟等一鸡传染性法氏囊病的病理学动态观察.中国兽压科技,1996,26(6):22 , 23 7郑世民,刘兴国一雏鸡感染传染法氏囊病病毒后免疫器官组织的免疫学变化.中 国家禽,1994, (5):27,29 8张登荣,王世英,张建荣等一中药对雏鸡感染传染法氏囊病病毒前后外周血白细 胞及ANAE阳性琳 巴细胞值的影响.中国兽医科技,1994,24(3):z5,27 9石放雄,宿勇,阮晖等?肉鸡神经内分泌免疫网络抗传染性法氏囊病病毒感染的机 制.中国兽医学 报,1996,16"):333,337 lOPanigraphyB.HumoralandCell--medicatedimmuneresponseinchickenswithinfectiousbursaldis— ease.VetMicrobio[.1982,7:383,387 26卷2期胨龙等感染IBDV雏鸡血液ANAE一淋巴细胞比例和IL--2水平的动态 变化研究187 StudyonChangesofBloodANAE,LymphocyteRatio andIL一2LevelinChickenInfectedwithInfectious BursalDiseaseVirus(IBDV) ChenLongYinDingzhongPangXunshengZbouShuhe (DepartmentofAnima[Science,AnhuiAgrotechnicatTeachersCollege,Fengyang233100) AbstractChangesofbloodANAE一lymphocyte()andIL一2levelsinbothimmu nizedandnon—immunizedArborAcres(AA)chickenswithattenuatedLBDVwerestudied aftertheywereinfectedwithvirulentIBDV.TheresultsshowedthatBloodANAE+一lym— phocyte()decreasedsignificantlyinbothnon—immunizedchickens(groupA)andimmu nizedchickens(groupB)duringthefirst5daysofinfection,andgroupA'Sreducedmore quicklythangroupB'S,whilenon— immunizeduninfectedchickens(groupC)keptaconstant level,whichwerehigherthanthatingroupAandB.ThengroupAandBbothbeganto rise,butgroupBrosemuchmorerapidlythangroupA,andtheirlevelhadrecoveredtonor mal28dlater.PlasmaIL一2levelingroupAandBtendedtodeereasegradually.while therewasnoobviouschangeingroupC. KwordsChiekenInfectionInfectiousbursaIdiseasevirus(1BDV)ANAE lymphocyteIL——2 本刊1999年第1期第64~65页表1和表2有几处错误,特作更正,并向读者致歉. 表1和表2中"太阳灯"应改为"太阳光","32h光猝灭效率"应改为"32h光敏 化效率". 表1中一级动力学方程由上至下依次改为 C一1.6792e一0L C一20104e一00at C一1.9135e一00 C.一1.9724e一00'' C一1.6136e一00 C.一1.6228e一001 C—l7781e…. C.一1.8030e C一1.8122e一5 C=1.9116e' C一1.911】e一0B C=1.9l57e C=0.9480e..! C一08890e一.0 表2中一级动力学方程由上至下依次为 C.一1.6793e一0L 一1.8576etl?6t C. 0—1.9080e C一2.1183e圳0 C=1.9789e C一1.8618e…" C一1.889"…L0 C一1.8030e0 C一1.89l一.'" C.一1.8667e一.. C一1.8303e一00n C.一l8905e一..'. C.一0.948le-0o07?I C一09433e..'