下载
加入VIP
  • 专属下载特权
  • 现金文档折扣购买
  • VIP免费专区
  • 千万文档免费下载

上传资料

关闭

关闭

关闭

封号提示

内容

首页 脂肪变肝细胞中解偶联蛋白2表达的变化

脂肪变肝细胞中解偶联蛋白2表达的变化.doc

脂肪变肝细胞中解偶联蛋白2表达的变化

Alfred俊豪
2018-04-04 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《脂肪变肝细胞中解偶联蛋白2表达的变化doc》,可适用于综合领域

脂肪变肝细胞中解偶联蛋白表达的变化发表时间:::来源:创新医学网推荐作者:朱亚男冯堃王炳芳何敖林作者单位:江苏大学临床医学院,江苏镇江江苏大学附属昆山医院消化科,江苏昆山【摘要】目的:探讨解偶联蛋白(UCP)在正常肝细胞及不同程度脂肪变肝细胞中的表达情况。方法:用不同浓度的脂肪乳剂培养肝细胞使其发生不同程度的脂肪变作为脂肪变的肝细胞模型。正常细胞作为对照组另设三组为模型组其培养液内脂肪乳剂的浓度分别,μlml。应用RT技术检测细胞内UCPmRNA表达水平蛋白质印迹检测UCP的表达情况。结果:正常肝细胞内可以检测到UCPmRNA表达且随着脂肪乳剂浓度的不断增加脂肪变肝细胞内UCPmRNA相对表达量也增加。模型组与正常对照组表达量差异有统计学意义(P<)模型组之间的表达量差异也具有统计学意义(P<)。正常组内未检测到UCP蛋白模型组中随着肝细胞脂肪变程度的加重UCP蛋白表达也增加(P<)。结论:脂肪变性的肝细胞中UCP表达较正常肝细胞增加且表达随脂肪变程度的加重而增加。【关键词】肝细胞表达解偶联蛋白脂肪变ExpressionofuncouplingproteinandsteatosislivercellsZHUYaFENKun,WANGBing(SchoolofClinicalMedicine,JiangsuUniversity,ZhenjiangJiangsuDepartmentofGastroenterology,theAffiliatedKunshanHospitalofJiangsuUniversity,KunshanJiangsu,China),Abstract,Objective:ToresearchtheexpressionofuncouplingproteininnormalhepatocytesandfattylivercellsMethods:Culturedhepatocyteswithfattyemulsion,thecellsgotsteatosistovaryingdegreeandmadethemasthemodeloffattylivercellsNormalcellsusedascontrol,culturedthemodelcellswithmediumcontainingdifferentconcentrationoffattyeJ,HosodaK,ItohH,etalFEBSLett,,:,AubertJ,ChampignyO,Saint,MareP,etalBiochimBiophysResCommun,,:,BarbeP,MilletL,LarrouyD,etalJClinEndocrinolMetab,,():,LarrouyD,LaharragueP,CarreraG,etalBiochimBiophysResCommun,,():,,RichardD,RivestR,HuangQ,etalJCompNeutrol,,:,SurwitRS,WangS,PetroAE,etalProcNatlAdcadSciUSA,,():,BaoS,KennedyA,WojciechowskiB,etalDiabetes,,():,SamecS,SeydouxJ,DullooAGDiabetes,,():,,WilsonTM,CobbJE,CowanDJ,etalJMedChem,,:,y,,():,MatsudaJ,HosodaK,ItohH,etalDiabetes,,():,ScarpacePJ,NicoisonM,MathenyMJEndocrinol,,:,CusinI,ZakrzewskaKE,BossO,etalDiabetes,,:,GongDW,HeY,ReitmanMLBiochimBiophysResCommun,,:,LanniA,DeFeliceM,LombardiA,etalFEBSLett,,(,):,MasakiT,YoshimatsuH,KakumaT,etalFEBSLett,,:,GongDW,HeY,KarasM,,EmilssonV,SummersRJ,HamiltonS,etalBiochimBiophysResCommun,,():,BossO,SamecS,DesplanchesD,etalFASEBK,,:,CoyleEF,MartinWH,SinacoreDR,etalPhysiol,,,,CortrightN,ZhengD,JonesJP,etal,MilletL,,,Cortez,PintoH,QiYangS,LinHZ,etalBiochemBiophysResCommun,,():,GimenoRE,DembskiM,WengX,etalDiabestes,,:,OberkoflerH,LiuYM,EsterbauerH,etalDiabetologia,,:,SimoneauJA,KelleyDE,NeverovaM,etalFASEB,,():,ButtgereitF,BrandMDBiochemJ,,:,,KubotaT,MoriH,TamoriY,etalJClinEndocrinolMetab,,:,WalderK,NormanRA,HansonRL,etalHumMolGenet,,():,SimnyanRA,SkulachevVPFEBSLett,,():,BoyerBB,BarnesBM,LowellBB,etalAmJPhysiol,,(pt):R,EnerbackS,JacobssonA,SimpsonEM,etalNature,,():,SamecS,SeydouxJ,DullooAGFASEBJ,,():,,第一部分、大鼠UCP基因表达的转录调控研究解偶联蛋白(UncouplingproteinUCP)是位于线粒体内膜上的一种载体蛋白具有介导质子渗漏减少活性氧生成和ATP合成的功能。UCP基因广泛表达于许多组织特别是在白色脂肪组织和免疫相关组织含量尤为丰富。但是正常肝细胞UCP表达很低甚至不表达肥胖和内毒素等刺激可诱导大鼠肝细胞表达UCP此时UCP表达的转录调控机制尚不清楚。为了探讨大鼠UCP(rUCP)基因的转录调控机制我们利用'快速扩增cDNA末端('RACE)技术和生物信息学分析方法确定rUCP基因可能的转录起始点和重要的调控区域利用启动子删除和荧光素酶活性明确启动子功能利用电泳迁移率变动分析(EMSA)和抗体超迁移实验(supershift)及染色质免疫沉淀方法(CHIP)确定转录因子与rUCP启动子潜在的顺式作用元件在体内外的结合。结果:rUCP基因转录起始点距翻译其始密码子ATGbp起始碱基为C其上游kb序列的分析结果显示该启动子缺乏TATA盒和CAAT盒而富含GCbp。rUCP基因转录起始点上游,存在一段包含Spl序列在内的较强的正调控顺式作用元件区域。共转染Spl表达载体有助于增强rUCP该段启动子活性。EMSA和supershift实验表明rUCP基因转录起始点上游,片段在体外能与转录因子Spl特异性结合。CHIP实验证实转录因子Spl与rUCP基因转录起始点上游,片段特异性结合促进HIIE细胞rUCP基因的表达。结论:rUCP基因转录起始点距翻译其始密码子ATGbp。转录因子Spl激活rUCP基本启动子活性。转录因子Spl在HIIE细胞UCP基因表达转录调控中发挥重要的正调控作用。第二部分、NASH大鼠肝脏UCP的表达及转录调控非酒精性脂肪性肝炎(NonalcoholicsteatohepatitisNASH)因近年来发病率明显增加和进展为肝纤维化、肝硬化甚至肝癌的风险日益引起人们重视。氧化应激和脂质过氧化是其NASH发病的中心环节。而UCP具有调节活性氧生成的作用可能与NASH发病机制有关。为了明确UCP在NASH大鼠肝脏的表达水平我们采用高脂饲料(,普通饲料加,猪油和,胆固醇)喂养大鼠周和周建立NASH大鼠模型。采用HE染色和油红O染色及透射电镜的方法观察NASH大鼠形态学改变利用生物化学方法检测肝功能、血糖、血脂和肝组织SOD、GSHPX及CAT活性采用荧光素酶荧光素法测定NASH大鼠肝线粒体ATP水平采用Western方法、免疫组织化学方法和实时定量逆转录多聚酶扩增反应(RealtimeRTPCR)方法检测NASH大鼠肝脏rUCP蛋白和mRNA水平利用EMSA方法确定rUCP基因转录起始点上游,片段在NASH大鼠肝脏转录调控的特异性。结果:与对照组比较NASH模型周和周组大鼠肝指数明显增加。肝脏体积增大重量增加颜色灰黄包膜紧张边缘变钝质地较脆切面油腻颗粒粗糙有少量局灶性黄白色不规则病灶以模型周组大鼠尤为显著。与对照组比较NASH模型周和周组大鼠肝脏呈中重度肝细胞大小泡混合性脂肪变伴有肝细胞气球样变小叶内炎细胞浸润和局灶性坏死。油红O染色结果证实NASH模型周和周组大鼠肝细胞内充满红色粗大颗粒样脂滴。与对照组比较NASH模型周和周组大鼠肝脏超微结构损伤以线粒体更为显著。线粒体肿大、基质疏松、嵴排列紊乱。并可见窦周隙胶原纤维沉积。与对照组比较NASH模型周和周组大鼠血清ALT、AST、GLU和LDL均显著升高NASH模型周组大鼠血清TC显著升高(P,)。与对照组比较NASH模型周和周组大鼠肝线粒体ATP水平明显下降大约是对照组的,(P,)。与对照组比较NASH模型周和周组大鼠肝组织GSHPX、SOD和CAT的水平明显下降(P,)。与对照组比较NASH模型周和周组大鼠肝脏rUCP蛋白水平和rUCPmRNA水平明显升高大约是对照组的倍(P,)。rUCP基因转录起始点上游,片段与NASH模型周组大鼠肝脏核蛋白之间特异性结合明显增强初步证实转录因子Spl介导NASH大鼠rUCP基因的转录调控。结论:NASH大鼠肝脏rUCP蛋白及mRNA水平增高转录因子Spl介导NASH大鼠UCP基因的转录调控。NASH大鼠肝脏GSHPX、SOD和CAT活性下降NASH大鼠肝脏线粒体受损ATP水平明显降低。解偶联蛋白基因多态性与肥胖、型糖尿病关系的研究目的:解偶联蛋白(UCP)是存在于线粒体内膜上天然的解偶联剂。胰岛β细胞中UCP过度表达抑制葡萄糖刺激的胰岛素分泌。UCP基因定位于人类染色体q染色体区该区域与胰岛β细胞功能和肥胖相关联。本研究通过检测中国北方天津地区汉族型糖尿病患者和糖耐量正常人群中UCP启动子GA基因型分布情况拟探讨UCP启动子GA基因多态性与肥胖、型糖尿病的关系。方法:例无亲缘关系的中国人(据年WHO标准分为:糖耐量正常者例型糖尿病例)收集其空腹血液标本从外周血白细胞中获得基因组DNA利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法检测UCP启动子GA基因变异。结论:在中国天津地区汉族人群中UCP启动子GA基因多态性与肥胖、型糖尿病发病无明显相关性。UCP启动子GA基因多态性与葡萄糖兴奋后胰岛素分泌功能(GSIS)相关提示该基因多态性可能参与了中国人型糖尿病胰岛素分泌不足的病理生理过程。UCP启动子AA基因型增加UCP基因表达抑制胰岛β细胞功能减少胰岛素的分泌增加型糖尿病控制的难度。未发现UCP启动子GG基因型与肥胖具有明显相关性。在中国北方天津地区汉族人群中无论型DM组或是NGT组UCP基因启动子A等位基因频率均较西方高加索人群UCP启动子A等位基因频率高但与日本人群UCP启动子A等位基因频率相似。参考文献傅祖植糖尿病GreenAChristianHirschNPrammingSKThechangingworlddemographyoftypediabetes()卫生部疾病控制司中国糖尿病防治指南(试行本)KahnSETherelativecontributionsofinsulinresistanceandbetacelldysfunctiontothepathophysiologyofTypediabetes()MarxJUnravelingthecausesofdiabetes外文期刊()KlingenbergMHuangSGStructureandfunctionoftheuncouplingproteinfrombrownadiposetissue()BossOSamecSPaoliniGiacobinoANUncouplingprotein:anewmemberofthemitochordrialcarriwefamilywithtissuespecificexpressionFleuryCNeverovaMCollinsSUncouplingprotein:anovelgenelinkedtoobesityandhyperinsulinemia()LentesKUTuNChenHGenomicorganizationandmutationalanalysisofthehumanUCPgene,aprimecandidategeneforhumanobesity()RicqierCBouillaudFTheuncouplingproteinhomologues:UCP,UCP,UCP,StUCPandAtUCPJezekPUrbankovaESpecificsequenceofmotifsofmitochondrialuncouplingproteinsOtabeSClementKRichNMutationscreeningofthehumanUCPgeneinnormoglycemicandNIDDMmorbidlyobesepatients:lackofassociationbetweennewUCPpolymorphismsandobesityinFrenchCaucasians()UrhammerSADalagaardLTSorensenTIAMutationalanalysisofthecodingregionoftheuncouplingproteingeneinobeseNIDDMpatients:impactofacommonaminoacidpolymorphismonjuvenileandmaturityonsetformsofobesityandinsulinresistance()WalderKNormanRAHansonRLAssociationbetweenuncouplingprotein(UCPUCP)andenergymetabolicobesityinPimaIndians()郑以漫项坤三贾伟平UCP基因AG()变异与中国人型糖尿病脂代谢、体脂含量及分布的关系期刊论文中华内分泌代谢杂志()CassellPGNeverovaMJanmohamedSAnuncouplingproteingenevariantisassociatedwitharaisedbodymassindexbutnottypediabetes()DalgaardLTSrensenTIAAndersenTAnuntranslatedinsertionvariantintheuncouplingproteingeneisnotrelatedtobodymassindexandchangesinbodyweightduringayearfollowupinDanishCaucasianmen()冯绮文董艳苏青邢惠莉左静南解偶联蛋白基因多态性与中国人型糖尿病的关系期刊论文上海第二医科大学学报()SestiGCardelliniMMariniMAAcommonpolymorphisminthepromoterofUCPcontributestothevariationininsulinsecretioninglucosetolerantsubjectsRoussetSAlvesGuerraMCMozoJThebiologyofmitochondrialuncouplingproteins外文期刊(z)SalehMCWheelerMBChanCBUncouplingprotein:evidenceforitsfunctionasametabolicregulator()StockMJMolecularandgeneticaspectsoftheUCPs:viewfromthechair(z)ChanCBMacDonaldPESalehMCOverexpressionofuncouplingproteininhibitsglucosestimulatedinsulinsecretionfromratislets()ChanCBDeLeoDJosephJWIncreaseduncouplingproteinlevelsinbetacellsareassociatedwithimpairedglucosestimulatedinsulinsecretion:mechanismofaction()ZhangCYBaffyGPerretPUncouplingproteinnegativelyregulatesinsulinsecretionandisamajorlinkbetweenobesity,betacelldysfunction,andtypediabetes()JosephJWKoshkinVZhangCYUncouplingproteinknockoutmicehaveenhancedinsulinsecretorycapacityafterahighfatdiet()ErecinskaMBrylaJMichalikMEnergymetabolisminisletsofLangerhans()ChanCBSalehMCKoshkinVUncouplingproteinandisletfunction外文期刊(z)O'RahillySUncouplingprotein:Adiposityangelanddiabetesdevil()ZhangCYBaffyGPerretPUncouplingproteinnegativelyregulatesinsulinsecretionandisamajorlinkbetweenobesity,βcelldysfunction,andtypediabetesBrownJEThomasSDigbyJEGlucoseinducesandleptindecreasesexpressionofuncouplingproteinmRNAinhumanislets外文期刊()LameloiseNMuzzinPPrentkiMUncouplingprotein:apossiblelinkbetweenfattyacidexcessandimpairedglucoseinducedinsulinsecretion()NagaseIYoshidaTSaitoMUpregulationofuncouplingproteinsbybetaadrenergicstimulationinLmyotubes()WangXLiHDeLeoDGeneandproteinkinaseexpressionprofilingofreactiveoxygenspeciesassociatedlipotoxicityinthepancreaticβcelllineMIN()DrogeWFreeradicalsinthephysiologicalcontrolofcellfunction()MedvedevAVRobidouxJBaiXRegulationoftheuncouplingproteingeneinINSβcellsbyoleicacid()GongDWHeyYKarasMUncouplingproteinisamediatorofthermogenesisregulatedbythyroidhormone,βadrenergicagonistic,andliptinOberkoflerHLiuYMEsterbauerHUncouplingproteingenereducedmRNAexpressionintraperitonesladiposetissueofobesehumanEsterbauerHSchneitlerCOberkoflerHAcommonpolymorphisminthepromoterofUCPisassociatedwithdecreasedriskofobesityinmiddleagedhumans外文期刊()VaulontSVasseurCognetMKahnAGlucoseregulationofgenetranscriptionManciniFPSabatinoLColantuoniVVariantsofuncouplingproteingeneandobesity:interactionwithperoxisomeproliferatoractivatedreceptorgamma()KremplerFEsterbauerHWeitgasserRAfunctionalpolymorphisminthepromoterofUCPenhancesobesityriskbutreducestypediabetesriskinobesemiddleagedhumansD'AdamoMPeregoLCardelliniMTheAAgenotypeinthepromoterofthehumanuncouplingproteingeneisassociatedwithinsulinresistanceandincreasedriskoftypediabetes()SasaharaMNishiMKawashimaHUncouplingproteinpromoterpolymorphismGAaffectsitsexpressioninβcellsandmodulatesclinicalprofilesofJapanesetypediabeticpatients()BulottaALudovicoOCocoAThecommonGApolymorphisminthepromoterregionoftheUCPgeneisassociatedwithreducedriskoftypediabetesinCaucasiansfromItaly()MatthewsDRHoskerJPRuderskiASHomeostasismodelassessment:insulinresistanceandβcellfunctionfromfastingplasmaglucoseandinsulinconcentrationsinman李光伟胡英华杨文英胰岛素抵抗、胰岛素分泌功能对型糖尿病发生的影响期刊论文中华内科杂志()KatzANambiSSMatherKQuantitativeinsulinsensitivitycheckindex:asimple,accuratemethodforassessinginsulinsensitivityinhumansBergmanGMPragerRVolundAEquivalenceoftheinsulinsensitivityindexinmanderivedbytheminimalmodelmethodandeuglycaemicglucoseclamp李光伟潘孝仁空腹血胰岛素、葡萄糖比值作为β细胞功能指数的可能性期刊论文中华内分泌代谢杂志()BrownleeMBiochemistryandmolecularcellbiologyofdiabeticcomplicationsChanCBMacDonaldPESalehMCOverexpressionofuncouplingproteininhibitsglucosestimulatedinsulinsecretionfromratislets()FleuryCNeverovaMCollinsSUncouplingprotein:anovelgenelinkedtoobesityandhyperinsulinemia()ChanCBDeLeoDJosephJWIncreaseduncouplingproteinlevelsinbetacellsareassociatedwithimpairedglucosestimulatedinsulinsecretion:mechanismofaction()ZhangCYBaffyGPerretPUncouplingproteinnegativelyregulatesinsulinsecretionandisamajorlinkbetweenobesity,betacelldysfunction,andtypediabetes()JosephJWKoshkinVZhangCYUncouplingproteinknockoutmicehaveenhancedinsulinsecretorycapacityafterahighfatdiet()SnyderEEWaltsBPerusseLThehumanobesitygenemap:the,update()LiLXSkorpenFEgebergKInductionofuncouplingproteinmRNAinbetacellsisstimulatedbyoxidationoffattyacidsbutnotbynutrientoversupply()BrownJEThomasSDigbyJEGlucoseinducesandleptindecreasesexpressionofuncouplingproteinmRNAinhumanislets外文期刊()RoduitRMorinJMasseFGlucosedownregulatestheexpressionoftheperoxisomeproliferatoractivatedreceptoralphageneinthepancreaticbetacell()LameloiseNMuzzinPPrentkiMUncouplingprotein:apossiblelinkbetweenfattyacidexcessandimpairedglucoseinducedinsulinsecretion()WangXLiHDeLeoDGeneandproteinkinaseexpressionprofilingofreactiveoxygenspeciesassociatedlipotoxicityinthepancreaticβcelllineMIN()EsterbauerHSchneitlerCOberkoflerHAcommonpolymorphisminthepromoterofUCPisassociatedwithdecreasedriskofobesityinmiddleagedhumans外文期刊()D'AdamoMPeregoLCardelliniMTheAAGenotypeinthePromoteroftheHumanUncouplingProteinGeneIsAssociatedWithInsulinResistanceandIncreasedRiskofTypeDiabetes()SestiGCardelliniMMariniMAACommonPolymorphisminthePromoterofUCPContributestotheVariationinInsulinSecretioninGlucoseTolerantSubjects()SasaharaMNishiMKawashimaHUncouplingProteinPromoterPolymorphismGAAffectsItsExpressioninβCellsandModulatesClinicalProfilesofJapaneseTypeDiabeticPatients()MarxJUnravelingthecausesofdiabetes外文期刊()解偶联蛋白基因和β肾上腺素能受体基因联合变异与型糖尿病及肥胖症的关系摘要:目的研究解偶联蛋白(UCP)基因AlaVal变异和β肾上腺素能受体(βAR)基因TrpArg变异对型糖尿病和肥胖症的影响以及两基因变异是否起协同的作用。方法用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性方法对名正常对照、例型糖尿病病人和例肥胖症病人进行UCP基因AlaVal变异和βAR基因TrpArg变异的检测。比较分析在不同组间基因型频率、基因型组合、临床变量等的分布差异。联合分析UCP基因变异和βAR基因变异在型糖尿病和肥胖症的发病中有无协同效应。结果型糖尿病和肥胖症组中UCP基因AlaVal纯合子变异的基因频率明显高于正常对照组(分别为(,、(,、(,OR=(P=(OR=(P=()正常人携带AlaVal基因变异者体重指数(kg,m^)((()高于非携带者((()。型糖尿病组βAR基因TrpArg纯合子变异的基因频率(,)明显高于正常组(,)正常人携带TrpArg基因变异者有较高的空腹和口服葡萄糖耐量试验后h血糖水平。当单一的UCP或βAR基因变异时在型糖尿病组βAR两基及肥胖组均与正常人的分布差别无显著意义(P>()当UCP和因同时发生变异时型糖尿病组和肥胖组的变异基因频率分布则明显高于正常组(OR=(P=(OR=(P=()。携带Val,ValTrp,Arg基因型组合者与型糖尿病(OR=(P=()和肥胖者(OR=(P=()的关系最密切。结论UCP基因AlaVal纯合子变异明显增加了型糖尿病和肥胖症发生的危险性βAR基因TrpArg纯合子变异与型糖尿病的发病有明显的相关性证实了种微效基因累加起来可以形成明显的表型效应。【摘要】目的研究β肾上腺素能受体基因的TrpArg变异与UCP基因AlaVal变异对儿童单纯性肥胖的影响是否存在交互作用儿童单纯性肥胖的防治提供理论依据方法用聚合酶链反应限制性片段长度态性方法(PCRRFLP)检测UCP基因AlaVal及βAR基因TrpArg的多态性比较病例组与对照组各基因型的发生频率以及不同基因型之间BMI、血液生化指标的差异。结果βAR的变异频率在单纯性肥胖组和对照组差异有统计学意义(P=)UCP基因的变异频率在组之间差异也有统计学意义(P=)。当只有单的UCP或βAR变异基因型时病例组与对照组的频率分布差异无统计学意义但当UCP和βAR基因同时发生变异时病例组的变异基因频率明显高于正常组(OR=可信区间为,)。结论UCP基因AlaVal变异与βAR基因TrpArg变异同时发生时会明显增加儿童单纯性肥胖症发生的危险性。【关键词】受体肾上腺素能β多态性单核苷酸肥胖症儿童EffectsofVariationoftheβadrenergicreceptorandUncouplingProteinGenePolymorphismonChildrenSimpleObesityLIQinXUJidaZHANGYunetalNanjingMedicalUniversityNanjing()China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinteractioneffectofuncouplingprotein(UCP)geneAlaValvariationandβadrenergicreceptor(βAR)geneTrpArgvariationonchildren'ssimpleobesityandtoprovidetheoreticalevidenceforthepreventionMethodsPCRRFLPwasusedtodetecttheUCPgeneAlaValvariationandβARgeneTrpArgvariationTheallelefrequencydistributionsamongcasegroupandcontrolgroupandthedifferenceofBMIandbiochemicalindexbetweengenotypeswereanalyzedResultsThefrequencyofβARgeneTrpArgvariationinsimpleobesitychildrenwassignificantlydifferentfromthatincontrolgroup(P=)ThefrequencyofUCPgeneAlaValvariationinsimpleobesitychildrenwassignificantlydifferentfromthatincontrolsubjects(P=)WhentherewasonlyUCPgeneorβARgenemutationthefrequencyofgenemutationinsimpleobesitychildrenwasnotsignificantlydifferentfromthatincontrolgroupButwhenthereweresimultaneouslytwogenemutationsthefrequencyofgenemutationswashigherinsimpleobesitychildrenthanincontrolgroup(OR=CIranged)ConclusionTheaccumulatedeffectofthetwomicrogenesincreasetheriskoftheoccurrenceofchildren'ssimpleobesity【Keywords】ReceptorsadrenergicbetaPolymorphismsinglenucleotideObesityChild根据国际肥胖专家工作组(InternationalObesityTaskForceIOTF)提供的据以及世界卫生组织(WHO)的疾病负担报告目全球儿童超重率接近肥胖率为,,,。儿童肥胖与肥胖易感环境(膳食能量过多、体力活动不足、生活方式由“动”趋“静”、群众营养健康知识缺乏、各不良社会因素等)有一定关联,,但有的儿童运动并不少饮食并不多却也发生了肥胖。种现象不能完全以环境因素来解释可能与遗传有一定联系,,。人类βAR的受体基因位于第号染色体上(p)包括外显子个内含子βAR在棕色脂肪组织的生热作用和白色脂肪的脂解作用中起重要的作用,,。UCP定位于人类号染色体(q)包含个外显子位于线粒体内膜的UCP具有“质子漏”即驱散H梯度的功能能够驱散在线粒体呼吸时形成的H梯度使氧化过程与磷酸化过程“解偶联”ATP生成减少,,主要参与脂肪和能量代谢的组织中表达。笔者用PCRRFLP检测UCP基因AlaVal及βAR基因TrpArg的多态性从而探讨UCP基因AlaVal变异及βAR基因TrpArg变异与儿童单纯性肥胖的关系。对象与方法对象筛查标准,岁儿童参照WHO儿童肥胖诊断标准以体重超过同年龄、同性别身高标准体重的为超重超过为肥胖。肥胖分度:以超过同年龄、同性别身高标准体重的,为轻度,为中度为重度肥胖,,。,岁儿童利用身高、体重测量值计算BMI指数后按照国际生命科学学会中国肥胖工作组(WGOC)年月颁布的“中国儿童青少年超重、肥胖体重指数筛查分类标准”进行判断,,。病例组与对照组的选择排除病理性及药物性肥胖按上述标准从名,岁儿童中筛查出单纯性肥胖例从中随机选择例作为病例组(男例女例)并按照与病例同年龄(个月)、同性别、同身高(cm)、体重正常的标准选择例健康儿童作为对照以求与肥胖儿童生长发育水平一致。方法目的基因的检测采用常规酚氯仿抽提外周血基因组DNA用聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法(PCRRFLP)检测UCP基因AlaVal及βAR基因TrpArg的多态性。()βAR基因TrpArg的多态性检测:引物设计参照相关报道,,的序列。上游引物:CGCCCAATACCGCCAACAC下游引物:CCACCAGGAGTCCCATCACC。反应体系:以μLDNA为模板在总反应体积μL内行PCR扩增扩增产物为bp用琼脂糖凝胶V电泳min。PCR反应条件为:预变性min变性s退火s延伸min共个循环最后进一步延伸min。在μL酶切体系中限制性内切酶BstNI(MvaI),酶切位点CC(AT)GG,μL酶解PCR产物μL在水浴过夜。用琼脂糖凝胶电泳Vmin分离酶解产物片断。TrpTrp基因型的电泳带型为bpbpbpbpbpArgArg基因型的电泳带型为bpbpbpbpTrpArg基因型的电泳带型bpbpbpbpbpbp。()UCP基因AlaVal多态性的检测:引物序列自行设计。上游引物为:CCCCTCAAGGGCCAGTGTTTGGAGCA下游引物为:CACCGCGGTACTGGGCGCCG。反应体系:以μLDNA为模板在总反应体积μL内行PCR扩增扩增产物为bp用琼脂糖凝胶V电泳min。PCR反应条件为:预变性min变性s退火s延伸min共个循环最后进一步延伸min。在μL酶切体系中限制性内切酶HPAII(酶切位点CCGG)μL酶解PCR产物μL在水浴过夜。用琼脂糖凝胶电泳Vmin分离酶解产物片断。AlaAla基因型的电泳带型为bpbpValVal基因型的电泳带型为bpAlaVal基因型的电泳带型bpbpbp。一般体检和血液生化指标由专人对受检者的身高、体重进行测量计算BMI指数血液生化指标(三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白)由专人采用全自动生化分析仪检测。统计分析研究样本的群体代表性予以HardyWeiberg平衡检验确认。用SPSS统计软件进行数据分析多组计量资料用单因素方差分析计数资料用χ检验。结果βAR基因TrpArg的变异对正常儿童及单纯性肥胖儿童的影响由表可见βAR的变异频率在组之间差异有统计学意义(P=)。各变异基因型之间只有三酰甘油(P=)和高密度脂蛋白(P=)差异有统计学意义(表)其他血液指标及BMI差异均无统计学意义。进一步分析发现携带ArgArg基因型的变异者三酰甘油显著高于携带TrpTrp基因型(P=)及TrpArg基因型(P=)携带ArgArg基因型的变异者高密度脂蛋白显著低于携带TrpTrp基因型变异者(P=)及TrpArg基因型变异者(P=)携带TrpTrp基因型与携带TrpArg基因型变异者之间差异无统计学意义(P>)。表病例组与对照组βAR基因TrpArg变异频率略表BMI及血液生化指标βAR基因TrpArg变异比较(略)UCP基因AlaVal的变异对正常儿童及单纯性肥胖儿童的影响表表明UCP基因的变异频率在组之间差异有统计学意义(P=)。进一步分析发现AlaVal基因型的发生频率与AlaAla基因型的发生频率差异有统计学意义(P=)ValVal基因型的发生频率与AlaAla基因型及AlaVal基因型的发生频率差异均无统计学意义。各变异基因组之间只有BMI差异有统计学意义(P=)(表)与各血液生化指标差异均无统计学意义。进一步分析发现AlaVal基因型的BMI显著高于AlaAla基因型(P=)ValVal基因型与AlaAla基因型及AlaVal基因型差异均无统计学意义。表病例组与对照组UCP基因AlaVal变异频率略表BMI及血液生化指标UCP基因TrpArg变异比较(略)βAR基因TrpArg的变异及UCP基因AlaVal的变异对儿童单纯性肥胖的交互作用表显示按携带的基因型不同分为组(βAR和UCP均无变异仅有UCP变异仅有βAR变异βAR和UCP均变异)。当只有单一的UCP或βAR基因变异时病例组与对照组的频率分布差异无统计学意义但当UCP和βAR基因同时发生变异时病例组的变异基因频率则明显高于对照组(OR=CI为,)基因同时变异与仅有单一的UCP基因变异而无βAR变异相比(OR=CI为,)或基因同时变异与仅有单一的βAR基因变异而无UCP基因变异相比(OR=CI为,)病例组的频率都明显高于对照组。表显示组之间BMI和高密度脂蛋白差异有统计学意义(P=和P=)其他血液生化指标差异无统计学意义。进一步分析发现两者都变异者BMI显著高于两者均无变异者(P=)及仅有UCP变异者(P=)且基因均变异者高密度脂蛋白显著低于均无变异者(P=)、仅有UCP变异(P=)及仅有βAR变异者(P=)。表病例组与对照组携带不同基因型频率的比较略表BMI及血液生化指标不同的基因型比较(略)讨论βAR在棕色脂肪组织的生热和白色脂肪的脂解中起重要的作用。有研究发现βAR的TrpArg变异与中心性肥胖密切相关TrpArg杂合子个体却有较低的血清三酰甘油水平这可能与中心脂肪的脂解作用的降低有关,,。βAR基因变异是体重、BMI、腰围、臀围增的因素,,携带TrpArg基因者在经过严格饮食控制和运动治疗后与对照组比较减重困难,,而Kurokawa等,,却发现βAR基因TrpArg变异与日本中学生脂肪堆积作用的关系并不十分密切。笔者研究发现ArgArg纯合子变异者有较低的高密度脂蛋白及较高的三酰甘油表明βAR的变异可能与儿童单纯性肥胖有关。但由于本研究中纯合子变异个体比较少仍需要进一步证实。UCP为线粒体内膜的质子载体可以将内膜外侧的H运回内侧降低了物质氧化过程中H形成的膜侧的电化学剃度使氧化过程与ADP的磷酸化过程脱偶连ATP生成减少能量消耗和产热增多体重下降。George等,,对Caucasian和美籍黑人UCP基因编码序列的分析发现外显子AlaVal突变该氨基酸替换发生在第和第跨膜区之间的基质向膜外环处是常见的UCP基因变异。有研究发现UCP基因的变异在能量代谢中起重要作用但并不是Pima印第安人型糖尿病及肥胖的发生原因,,。Walder等,,研究发现UCP的AlaVal突变与Pima印第安青年人睡眠时代谢率相关。UCP基因AlaVal变异与中国女性股部皮下脂肪面积和体重指数相关,,。笔者研究也发现UCP基因AlaVal变异与单纯性肥胖儿童的体重指数相关的是AlaVal突变表明UCP变异可能对正常儿童有脂肪沉积作用。另外在肥胖的日本人,,减肥抵抗及减肥后难以维持体重方面UCP与βAR基因有协同作用。Hsueh等,,在肥胖症病人中亦证实了携带βAR和PPARγ基因变异者具有较高的胰岛素、瘦素水平和腰围、BMIOchoa等,,通过对儿童青少年的病例对照研究发现βAR和PPARγ基因的变异对增加肥胖的危险性有协同作用。本研究也发现基因均变异者具有较高的BMI及较低的高密度脂蛋白另外当只有单一的UCP或βAR基因变异时病例组与对照组的基因变异频率分布差异无统计学意义。但当UCP和βAR基因同时发生变异时病例组的基因变异频率则明显高于正常组(OR=可信区间为,)基因同时变异与单一的UCP基因变异(OR=可信区间为,)或单一的βAR基因变异(OR=可信区间为,)相比病例组的频率都明显高于对照组提示UCP基因AlaVal与βAR基因TrpArg同时变异明显增加了儿童单纯性肥胖症发生的危险性。大量的研究资料提示人类肥胖通常涉及较为复杂的遗传背景多种相关蛋白因子不同程度的遗传缺陷可能是人类肥胖的易患原因。参考文献,,单晓益米杰王友发等儿童肥胖的流行趋势及其危险因素中国实用儿科杂志():,,季成叶儿童肥胖流行和肥胖易感环境中国学校卫生():,,CLEMENTAKARINEFGeneticsandthepathophysiologyofobesityPedRes():,,MORIYKimMOTOYAMAHITOYetalTheGlnGlubetaadrenergicreceptorvariantisassociatedwithobesityduetosubcutaneousfataccumulationinJapanesemenBiochemBiophysResCommun():,,YOSHIDATTAKAKURAYSAKANENetalTherelationshipbetweenbetaadrenoceptorandregulationofbodyfatmassandfoodintakeNipponRinsho():,,SALEHMCWHEELERMBCHANCBUncouplingprotein:evidenceforitsfunctionasametabolicregulatorDiabetologia:,,王晓莺学龄前儿童单纯性肥胖影响因素分析中国学校卫生():,,刘湘云林传家薛沁冰等儿童保健学版南京:江苏科学技术出版社:,,中国肥胖问题工作组中国学龄儿童青少年超重、肥胖筛查体重指数值分类标准中华流行病学杂志():,,McFARLANEANBENNETTFWILKSRetalTheTrpArgmutationoftheβadrenergicreceptorisassociatedwithhyperglycemiaandcurrentbodymassindexinJamaicanwomenMetabolism:,,莫宝庆郭锡熔陈荣华等LPL和βAR基因变异对机体脂质代谢的作用中国学校卫生():,,SHIWAKUKNOGIAANUURADEetalDifficultyinlosingweightbybehavioralinterventionforwomenwithTrpargpolymorphismofthebetaadrenergicreceptorgeneIntJObesRelatMetabDisord():,,KUROKAWANNAKAIKKAMEOSetalRelationshipbetweenthebetaadrenoceptorgenevariantandbodyfatinJapanesechildrenTohokuJExpMed():,,GEORGEAANGELAMBRICHARDPetalStructureandorganizationofthehumanuncouplingproteingeneandidentificationofacommonbiallelicvariantinCaucasianandAfricanAmericansubjectsDiabetes:,,KOVACSPMALHANSONRLetalGeneticvariationinUCP(uncouplingprotein)isassociatedwithenergymetabolisminPimaIndiansDiabetologia():,,WALDERKNORMANRAHANSONRLAssociationbetweenuncouplingproteinpolymorphisms(UCPUCP)andenergyMetabolismobesityinpimaIndiansHumMolGenet:,,郑以漫项坤三贾伟平等UCP基因AlaVal变异与中国人脂代谢、体脂含量及分布的关系国际华夏内分泌大会论文摘要汇编:,,HAYAKAWATNAGAIYTANIGUCHIMetalPhenotypiccharacterizationofthebetaadrenergicreceptormutationandtheuncouplingproteinpolymorphisminJapanesemenMetabolism():,,HSUEHWCBLABGERIJCOLESAetalInteractionsbetweenvariantsintheβadrenergicreceptorandperoxisomeproliferatorsactivatedreceptorγgenesandobesityDiabetesCare:,,OCHOAMCMARTIAAZCONACetalGenegeneinteractionbetweenPPARgammaandADRbetaincreasesobesityriskinchildrenandadolescentsIntJObesRelatMetabDisord(Suppl):S

用户评价(0)

关闭

新课改视野下建构高中语文教学实验成果报告(32KB)

抱歉,积分不足下载失败,请稍后再试!

提示

试读已结束,如需要继续阅读或者下载,敬请购买!

文档小程序码

使用微信“扫一扫”扫码寻找文档

1

打开微信

2

扫描小程序码

3

发布寻找信息

4

等待寻找结果

我知道了
评分:

/50

脂肪变肝细胞中解偶联蛋白2表达的变化

VIP

在线
客服

免费
邮箱

爱问共享资料服务号

扫描关注领取更多福利