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第二章 糖和苷-生物工程

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第二章 糖和苷-生物工程nullnull第二章 糖和苷 Glycosidesnull糖类又称碳水化合物(carbohydrates),是植物光合作用的初生产物,通过它们进一步合成了植物中的绝大部分成分。 糖类在天然药物治疗疾病中,可以看作是药效学物质基础的运载体。 研究十分活跃,尤其是由糖与非糖物质结合成的苷类(glycosides)化合物不少都是天然药物的生物活性成分。null第一节 单糖的立体结构 Stereo-structures of Monosaccharides单糖(monosaccharides)是多羟基醛和酮, 是组...

第二章 糖和苷-生物工程
nullnull第二章 糖和苷 Glycosidesnull糖类又称碳水化合物(carbohydrates),是植物光合作用的初生产物,通过它们进一步合成了植物中的绝大部分成分。 糖类在天然药物治疗疾病中,可以看作是药效学物质基础的运载体。 研究十分活跃,尤其是由糖与非糖物质结合成的苷类(glycosides)化合物不少都是天然药物的生物活性成分。null第一节 单糖的立体结构 Stereo-structures of Monosaccharides单糖(monosaccharides)是多羟基醛和酮, 是组成糖类及其衍生物的基本单元。null单糖的结构可以Fischer投影式和 Haworth投影式 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示,多以Haworth投影式表示。β-D-glucose(Fischer式) Haworth式null一、单糖的绝对构型 Fischer投影式→将距羰基最远的那个不对称碳的构型定为整个糖分子的绝对构型。 羟基向右———D型; 羟基向左———L型。 Haworth投影式→看那个不对称碳原子上的取代基的朝向 取代基向上———D型; 取代基向下———L型。null二、单糖的差向异构体 单糖成环后形成的一个不对称碳原子称为端基碳(anomericcarbon),生成的一对差向异构体(anomers)有α、β两种构型。nullFischer式:C1-OH与原C5(六碳糖)或C4(五碳糖)-OH 顺式———α型;反式———β型。 Haworth式:看C1-OH与C5(或C4)上取代基(C6或C5)之间的关系 异侧———α型;同侧———β型。同側为β-D- 异側为α-D-null单糖的氧环 天然界存在的单糖多为五元或六元氧环的形式,是因为它们的张力最小所致。null三、单糖的构象 尽管Haworth式更接近糖结构的真实情况 实验证明天然界吡喃糖均以椅式构象存在 通常D-系吡喃糖的椅式构象中又以C1-OH在e键上即β构型为其优势构象。null 吡喃糖(pyranose,六员环)/呋喃糖(furanose,五员环),吡喃糖的优势构象--椅式。 单糖的构象:二、单糖的立体化学null单糖的构象null第二节 糖和苷的分类 Classify of Glycosides糖及其衍生物苷类在植物性天然药物中存在十分广泛,是研究生命过程十分重要的领域尤其是苷类化合物广泛而明显的生物活性,又是从天然界创制新药研究十分活跃的领域。null一、天然界常见的单糖 1.五碳醛糖(aldopentoses):L-arabinose(阿拉伯糖) D-xylose(木糖)2.六碳醛糖(aldohexoses):D-glucose(葡萄糖) D-glactose(半乳糖)null3.六碳酮糖(ketohexose):D-fructose(果糖)4.甲基五碳醛糖:L-rhamonose(鼠李糖)null5.支碳链糖:D-apiose(芹糖)6.氨基糖(amino-sugar): 庆大霉素、新霉素 卡那霉素、链霉素 (氨基糖苷类抗生素)2-amino-2-deoxy-D-glucosenull7.去氧糖(deoxy-sugars): 常见的有6-去氧糖、甲基五碳糖、2,6-二去氧糖及其衍生物,多见于强心苷、微生物代谢产物中,具有一些特殊性质oleandrose(夹竹桃糖) cymarose(磁麻糖)null8.糖醛酸:glucquronic acid(D-葡萄糖醛酸)9.糖醇:D-sorbitol(D-山梨醇)null10.环醇类(cyclitols)cis-inositols(肌醇)cyclitols(牛奶菜醇) cyclitolsene(牛奶菜醇烯)null11.糖的磷酸酯: phosphoglucoside(葡萄糖磷酸酯 ) 是生命过程中糖类的重要衍生物。在亲核取代中磷酸酯离子比氢氧离子更易离去,在目前寻找anticancer and anti-HIV新药开发中备受关注。糖的分类糖的分类二、低聚糖 三、多糖自学null四、苷类(Glycosides) 苷类又叫配糖体或糖杂体等,是一类极为复杂、涉及面极广、数目庞大的天然药物化学成分,其生物活性及药物效用涉及医学的各个领域,是极为重要的一类化学成分。英文命名常以-in or -oside作后缀,如葛根黄素(puerarin)、葛根黄素木糖甙(puerarin xyloside)。null苷的定义: 苷是糖的衍生物,是糖在植物体内的一种储存形式,因为苷经水解后能释放出糖。如:凡水解后能生成糖和非糖物质的一类化合物,通称为苷类。null由上面逆反应可见,苷类可定义为是糖或糖的衍生物(氨基糖、糖醛酸等)与另一非糖物质(苷元或配基,aglycone 或genin)通过糖的端基碳原子连接而成的化合物,故有α-苷和β-苷之分,天然界常见的多为β-构型。null一)苷的分类: 苷类由结构看主要由三部分组成,可变因素较多,尤其是非糖物质,即苷元部分,种类繁多,十分复杂。因此,苷的分类也有多种方法:null1. 按苷键原子不同分: 1)O-苷(O键苷):苷键原子为O,因苷元不同分: (一)醇苷:由苷元的醇羟基与糖端系质子脱水而成的苷。Rhodioloside(红景天苷) Ranunculin(毛茛苷)null二)硫苷(S键苷):苷键原子为硫,是糖上端基羟基与苷元上的巯基缩合而成的苷。如:glucoraphenin(萝卜苷)null三)氮苷(N键苷):苷键原子为N,是苷元上胺基与糖缩合而成的一类苷。如核苷是核酸的重要组成部分,N苷是生化领域的重要物质。如:Adenosine(腺苷) crotonside(巴豆苷)null四)碳苷(C键苷):是糖基直接接在碳原子上的苷类。天然药物中常见的碳苷以黄酮类为多。如:Vitexin(牡荆素)null按苷元结构类型不同分:黄酮苷类、香豆素苷类、蒽醌苷类、生物碱苷类、C21甾苷类、三萜皂苷类等。 突出特殊性质和生物活性分:皂苷类、强心苷类等。 按糖的数目多少分:单糖苷类、低聚糖苷类等。其它分类方法null按糖的种类分:去氧糖苷类、非去氧糖苷类。 按成苷数目分:单糖链苷、二糖链苷、三糖链苷等。 按苷的存在状态分:原生苷、次生苷。 目前的天然药物化学苷类成分类型的分类多交叉应用。null第三节 糖的化学性质 Properties of Saccharides糖+ 苷键+ 苷 苷元糖的化学性质糖的化学性质氧化反应 糠醛形成反应 羟基反应 苷键的裂解反应-第四节酸催化水解 碱催化水解 酶解 过碘酸裂解硼酸络合反应过碘酸氧化反应null一、化学性质-氧化反应: 单糖分子中有醛(酮)、醇羟基和邻二醇等结构,均可以与一定的氧化剂发生氧化反应,一般都无选择性。但过碘酸和四醋酸铅的选择性较高,一般只作用于邻二羟基上。以过碘酸氧化反应为例: 过碘酸反应的基本方式: 作用缓和,选择性高,限于同邻二醇、α-氨基醇、 α-羟基醛(酮)、邻二酮和某些活性次甲基上,基本反应如下:null1.过碘酸氧化反应 是缓和而选择性极高的糖的邻二羟基氧化反应,尤其是开裂1,2-二元醇反应几乎是定量进行的。2).用途2).用途①推测糖中邻二-OH多少;(试剂与反应物基本是1:1); ②对同一分子式的糖来说,推测吡喃糖还是呋喃糖; ③推测低聚糖和多聚糖的聚合度; ④推测1,3连接还是1,4连接(糖与糖连接位置) (糖与糖连接都是半缩醛-OH连接,即端基碳连接)null二、化学性质-糠醛(酚醛缩合)反应,Molish反应 反应机理: 反应的应用 紫红色null二、化学性质-羟基反应: 主要反应包括醚化、酯化、甚至缩醛缩酮化。其中又以酰化反应较为重要。 反应活性次序, 活性最高的是半缩醛羟基, 其次是伯醇基; 仲醇基更次,仲醇基中又以C2-OH较活泼,这是因为C2-OH受C1的诱导效应致其酸性较强所致。null1.醚化反应 苷类的分离及结构鉴定中糖的醚化反应常用的为甲醚化, 所用试剂多为(CH3)2SO4/con.NaOH;CH3I,AgO等。 2.酰化反应 酰化反应也是制备衍生物中常用的方法之一。其中以乙酰化衍生物较为常见。制备成衍生物,降低水溶性null 3.硼酸络合反应(应用) 苷类化合物中糖上的邻二羟基可与硼酸生成硼酸络合物,用以糖的分离、鉴定乃至构型推定。一般说来,呋喃糖苷的络合能力最强,吡喃糖苷络合能力最弱。产物呈酸性,可酸碱滴定、离子交换、电泳。null4.缩酮和缩醛化反应 保护羟基 酮类试剂易与顺式邻二羟基生成五元环状物; 醛类试剂则易与1,3-或4,6-双羟基生成六元环状物。 常用的试剂有丙酮/硫酸,其产物称异丙叉衍生物或丙酮加成物;苯甲醛/硫酸等。 4.羰基反应(糖的鉴定、分离和纯化)null4.羰基的反应-保护羟基null第四节 糖链的裂解 Split of Glycosidic Linkage天然药物化学研究中,根据分子中糖的数目,切断苷键的程度有原生苷、次生苷等称谓。 原生苷:是指天然药物中原始存在状态的 苷; 次生苷:是指原始苷被部分切去糖后生成的 苷。 彻底切去糖的非糖部分称为苷元。null机理 由上述机理可以看出,影响水解难易程度的关键因素在于苷键原子的质子化是否容易进行,有利于苷原子质子化的因素,就可使水解容易进行。主要包括两个方面的因素: (1) 苷原子上的电子云密度 (2) 苷原子的空间环境一、酸催化水解null具体到化合物的结构,则有以下规律: 按苷键原子的不同,酸水解难易程度为:N- 苷 >O-苷>S-苷>C-苷 原因:N最易接受质子,而C上无未共享电子对,不能质子化。 (2) 呋喃糖苷较吡喃糖苷易水解,水解速率大50~ 100倍。 原因:呋喃环平面性,各键重叠,张力大。 图 (3) 酮糖较醛糖易水解。 原因:酮糖多呋喃环结构,且端基上接大基团-CH2OH 。图苷键的裂解规律null苷键的裂解规律(4) 吡喃糖苷中,吡喃环C5上的取代基越大越难水解, 故有:五碳糖>甲基五碳糖>六碳糖>七碳糖>5 位接-COOH的糖 原因:吡喃环C5上的取代基对质子进攻有立体阻 碍。图 (5) 2-去氧糖>2-羟基糖>2-氨基糖 原因:2位羟基对苷原子的吸电子效应及2位氨基 对质子的竞争性吸引null(6) 芳香属苷(如酚苷)因苷元部分有供电子结构,水解比脂肪属苷(如萜苷、甾苷等)容易得多。某些酚苷,如蒽醌苷、香豆素苷不用酸,只加热也可能水解。即芳香苷>脂肪苷 原因:苷元的供电子效应使苷原子的电子云密度增大。 苷键的裂解规律null(7) 苷元为小基团者,苷键横键的比苷键竖键的易于水解,因 为横键上原子易于质子化;苷元为大基团者,苷键竖键的 比 苷键横键的易于水解,这是由于苷的不稳定性促使水解。 原因:小苷元在竖键时,环对质子进攻有立体阻碍。苷键的裂解规律null(8) N-苷易接受质子,但当N处于酰胺或嘧啶位置时,N-苷也难于用矿酸水解。 原因:吸电子共轭效应,减小了N上的电子云 密度。 例:P79 朱砂莲苷 酰胺 注意:对酸不稳定的苷元,为了防止水解引起皂元结构的改变,可用两相水解反应。苷键的裂解规律null酸催化水解反应注意事项!!!酸水解时,当苷元对酸不稳定时将导致苷元的结构变化,遇此种情况时可采用二相水解反应,即在反应混合物中加入与水不相混溶的有机溶剂(如苯/氯仿),使水解后的苷元及时转溶于有机溶剂相,以避免苷元与酸的长时间接触。null二、乙酰解反应(Acetolysis) 乙酰解法可以开裂部分苷键而保存另一部分苷键,从而在水解产物中得到乙酰化的低聚糖,由此经TLC、GC分析获得糖种类及其连接方式的部分信息。 ж影响乙酰解反应难易的因素 苷键邻位有OH可被乙酰化时,酰化难度加大; 苷键邻位有环氧基时,酰化速度变慢; 糖间连接位置不同,酰化速度不同。 如β-葡萄糖间, 1→6(易)>>1→4>1→3>1→2(难)乙酰解反应的应用乙酰解反应的应用下列为一种五糖苷的乙酰解过程,其分子组成中含有D-木糖、D-葡萄糖、D-鸡纳糖和D-葡萄糖-3-甲醚。当用醋酐-ZnCl2乙酰解后,TLC检出了单糖、四糖和三糖的乙酰化物,并与标准品对照进行鉴定,由此可推出苷分子中糖的连接方式。nullnull乙酰化反应的操作较为简单,条件较温和。一般可将苷类溶于醋酐或醋酐与冰醋酸的混合液中,加入3%一5%量的浓硫酸,在室温下放置1—10天,将反应液倒入冰水中.并以碳酸氢钠中和至pH3—4,再用氯仿萃取其中的乙酰化糖,然后通过柱色谱分离,就可获得单一的成分,这些单一成分再用TLC或GC进行鉴定。 乙酰解反应的操作null三、碱催化水解和β消除反应 苷键为缩醛型醚键,理当对碱稳定,但若苷元中成苷羟基的β位有负电性取代基时,苷键便具有一定的酯的性质,能被碱催化水解。如:null碱催化水解可用以此类特殊苷的苷键构型确定,因为C2-OH与C1-苷键反式时较顺式易水解,且反式水解产物为1,6-糖酐,而顺式为正常的糖。 所谓的β-消除反应是苷键的β-位有吸电子基团时,α-位氢活化,在碱液中与苷键起消除反应而开裂称之,常用于多糖的结构研究。碱水解的应用null四、酶催化水解 酶是活性高,专属性强的生物催化剂,其割裂苷键的条件比较温和,不苷元发生结构变化,且又能获得有关苷键构型情况 转化糖酶(invertase)→解β-果糖苷键; 麦芽糖酶(maltase)→解α-葡萄糖苷键 苦杏仁酶(emulsin)→解β-葡萄糖和β-半乳糖苷键应用null五、过碘酸裂解反应 是过碘酸氧化反应经改进,用于割裂具有1,2-二元醇糖苷键的温和反应,(该方法又称SMITH裂解法)。这种方法对苷元结构容易改变的苷以及C-甙的水解特别适宜。而不适宜苷元上也具有1,2-二元醇结构的苷类;该反应在水解产物中得不到完整的糖分子。应用过碘酸裂解反应过碘酸裂解反应 称为Smith裂解,是一种温和的水解方法. 适用的情况:苷元结构不稳定, C-苷 不适用的情况: 苷元上也有1,2-二元醇 反应的基本方法: null应用于碳苷的情况:五、过碘酸裂解反应Smith裂解反应的应用:Smith裂解反应的应用: 1.苷元不稳定的苷,以及碳苷的水解 可得到完整的苷元,这对苷元的研究具有重要的意义. 2.确定苷中糖的类型null 第五节 糖的NMR特征 NMR Character of Saccharidenull引言 苷类化合物的结构鉴定是一项极其复杂而艰巨的工作, 1.不易获得完好结晶; 2.成苷的糖种类繁多,造成糖的种类识别困 难; 3.苷键构型确定困难。null连接位置必须弄清 糖→糖间的连接顺序必须弄清; 苷元种类和化学结构需要进行完整的鉴定。 核磁共振技术为糖及其苷的结构研究提供了强有力的信息,是目前糖和苷类化合物结构鉴定的重要手段。确定苷结构的三个方面一 、糖的1HNMR特征一 、糖的1HNMR特征 化学位移规律: 端基质子: 4.3~6.0ppm 特点:比较容易辨认 用途:1 确定糖基的个数 2 确定糖基的种类 3 2D-NMR谱上糖信号的归属 4 连接位置的判断 六、糖的NMR特征null六、糖的NMR特征null六、糖的NMR特征null甲基质子: ~1.0ppm 特点:比较容易辨认 用途: 1 确定甲基五碳糖的个数 2 确定甲基五碳糖的种类 3 确定甲基五碳糖的位置 4 2D-NMR谱上甲基五碳糖 信号的归属 六、糖的NMR特征null 其余质子信号: 3.2~4.2ppm 特点: 信号集中,难以解析 归属: 往往需借助2D-NMR技术.六、糖的NMR特征null2. 偶合常数:与两面角有关 两面角90度 J=0Hz;两面角0或180度 J~8Hz;两面角60度 J~4Hz 对于糖质子 当2-H为直立键时,1位苷键的取向不同,1-H与2-H的两面角不同,偶合常数亦不同: β-D-和α-L-型糖的1-H和2-H键 为双直立键,φ=180,J=6~8Hz α -D-和-L-型糖的1-H为平伏键, 2-H双直立键,φ=60,J=2~4Hz 六、糖的NMR特征null 因此,六碳醛糖的优势构象为C1型,其中C2构型与D-葡萄糖相同的D-半乳糖、D-阿洛糖的优势构象中2-H均为直立键,其成α苷键时,端基质子与2-H的偶合常数均为4Hz左右;而当其成β苷时,端基质子与2-H的偶合常数均为8Hz左右。六、糖的NMR特征β- D-葡萄糖苷 α-D-半乳糖苷 β-D-阿洛糖苷null●苷键构型的确定: ▲经典方法: 酶水解法、 分子旋光法*(即Klyne法)见课本45页 红外光谱法 NMR法二、 糖的13CNMR特征二、 糖的13CNMR特征 糖上碳信号可分为几类,大致范围为: 1. CH3 ~18ppm 甲基五碳糖的C6 2. CH2OH ~62ppm C5或C6 3. CHOH 70~85ppm 糖氧环上的C2~C4 4. -O-CH-O- 98~100ppm 端基C1或C2第五节、糖的NMR特征null 一般来说,碳原子上有α-OH的较带β-OH的,信号较在高场处。如具有C1构象的D-葡萄糖苷的端基碳信号,α-型的为97~101,而β-型的为103~106ppm,便此可区别α-和β-异构体。第五节、糖的NMR特征三、苷化位移三、苷化位移 概念:(见教材) 1. 苷化位移值和苷元的结构有关,与糖的种类无关。 例如: C1 位移 C2 位移 β- D-葡萄糖 96.7 75.1 甲基-β- D-葡萄糖苷 104.0 +7.3 74.1 -1.0 β- D-半乳糖 97.3 72.9 甲基-β- D-半乳糖 104.5 +7.3 71.7 -0.8 α-L-鼠李吡喃糖 95.1 71.9 甲基- α-L-鼠李糖苷 102.6 +7.5 72.1 -0.2 第五节、糖的NMR特征null 苷元 端基碳 苷元α碳 苷元β碳 -CH3 +5.0~+7.5 +6.0~+7.5 -CH2CH2R +5.0~+6.5 +5.0~+6.5 -3.5~-5.0 -CH(CH2R)2 +3.4~+4.5 +5.0~+8.0 -3.0~-3.5 -C(CH2R)3 -0.5~+0.5 +6.5~+7.5 -2.5~-3.0 第五节、糖的NMR特征 2. 苷元若为链状结构,端基碳的苷化位移随着苷元为伯、仲、叔基而递减,但对苷元的α碳和β碳的苷化位移影响不大,例如:同为葡萄糖的苷,苷元不同,其苷化位移范围(ppm)为null3.苷元为环醇时的苷化位移规律 若羟基的β位无烷基取代,则α碳与端基碳的苷化位移值与开链的仲醇相似。如果羟基的β位有烷基取代,那么α碳和端基碳的苷化位移与苷元的α碳的手性及糖的端基手性都有关系。具体可分为两种情况: 1) 苷元的α碳的手性及糖的端基手性R或S,即二者相同,则α碳与端基碳的苷化位移值与β位无烷基取代的环醇时相同,即与开链的仲醇相似,即5ppm左右。第五节、糖的NMR特征null第五节、糖的NMR特征2) 苷元的α碳的手性及糖的端基手性不相同,则α碳与端基碳的苷化位移值比β位无烷基取代的环醇相应的碳的苷化位移大3.5ppm左右,即大约10ppm。 3) 同五异十其余七: 4) 同小异大:指β碳 5) 酯苷和酚苷:特殊,α-C向高场位移。 第六节 糖链的结构测定 Structural Elucidation of Saccharide Chain第六节 糖链的结构测定 Structural Elucidation of Saccharide Chainnull一、研究糖链结构的一般程序 ●1.纯度鉴定 ▲多糖的纯度鉴定:多用比旋度法(恒定不改变);高压电泳法(硼酸盐缓冲液PH9-12,醋酸薄膜支持,显色剂多为P-茴香胺硫酸试剂,即anisidine/H2SO4);凝胶柱色谱法。 ▲糖的衍生物苷的纯度鉴定:TLC、HPLC。 第六节 糖链的结构测定null一、研究糖链结构的一般程序 ●2.分子量测定 ▲单糖、低聚糖及其苷的分子量测定:目前主要用MS法,多采用FD-MS、FAB-MS等。 ▲多糖的分子量测定:目前仍沿用经典高分子化合物分子量的测定方法,如粘度法、沉降法等,甚至仅仅测定标示其平均分子量。null●3.单糖的鉴定 单糖种类及其比例,通常是将其苷键全部水解(乙酰解),然后经TLC、PC、GC或HPLC检出。 一、研究糖链结构的一般程序null●4.单糖间、糖与苷元间连接位置的确定 确定苷键的连接位置,目前主要是应用13C-NMR中的苷化位移法,其方法是: 将苷化合物或低聚糖先行甲醚化或乙酰化,测得其13C-NMR谱,然后将其水解,再测其水解产物的13C-NMR谱,归属比较其变化,以推断苷键的连接位置。 如: 一、研究糖链结构的一般程序null●5.糖链连接顺序的确定 ▲经典方法:缓和水解;酶解;乙酰解等 这些方法都是将苷部分裂解成次级苷或低聚糖,再分析鉴定糖的碎片。 虽然经典方法至今尚有一定的实际应用价值,但日新月异的波谱技术已正在取代其角色。 一、研究糖链结构的一般程序null▲ MS法测定糖链连接顺序 ◆技术→FDMS、FABMS等。 ◆优点→不必制备衍生物,用量小,准确,简便。null▲NMR法测定糖链连接顺序 将糖及其苷类衍生物全乙酰化后,测定观察两糖之间质子的远程偶合或NOE效应,以期确定糖的连接顺序。null●6.苷键构型的确定: ▲经典方法:酶水解法、分子旋光差法*(即Klyne法) 目前多被NMR法所代替。 一、研究糖链结构的一般程序第七节 糖和苷的提取与分离 Extraction and Isolation of Saccharides and Glycosides第七节 糖和苷的提取与分离 Extraction and Isolation of Saccharides and Glycosidesnull●1. 酶对糖及其苷类提取的影响 通常含糖及其苷类化合物的天然药材组织中往往同时含有酶,共存酶能促使苷键裂解,故药材粉碎后,受潮、冷水浸泡都能促使它们的相互接触致使苷键裂解,生成次生苷乃至苷元,影响原有成分及其作用,因此: ▲欲提取原始苷时,需杀酶,60%以上乙醇、甲醇或80℃以上水处理; ▲欲提取次生苷或苷元,需利用酶,如发酵等。 第七节 糖和苷的提取与分离一、提取分离糖及苷时须考虑的问题null▲糖苷类具多羟基,极性较大,易溶于水,难溶于低极性有机溶剂,但苷类化合物的溶解度则因苷元性质不同而有较大差异。 ▲一般说来,糖苷类成分大多在甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯中溶解度较大,提取效率较好,又能抑制酶,故为优选溶剂;然而,水也为常用溶剂,尤其是糖的提取,可选用热水提取,但杂质较多,同时应注意共存有机酸的影响,必要时可用缓冲液。二、提取糖及苷类溶剂的选择null 三、杂质的除去 由于糖及其苷类分子中多羟基的存在,难以结晶析出,若混有少量杂质,纯化结晶更难,故需采取多种方法方能达到分离目的。 null●分级沉淀法 利用多数糖可溶于水,三糖以下尚可溶于乙醇,随着聚合度的增大,在乙醇中溶解度逐步降低的性质,在糖的水溶液中分次加入乙醇,使醇浓度渐增,从而达到对糖进行粗略分离目的的方法。四、分离null●活性碳柱层析 活性碳为非极性吸附剂,吸附量大、分离率高、不受糖溶液浓度改变和无机盐存在的影响。方法是以活性碳+硅藻土等量混合(或40-60目颗粒活性碳)装柱→上样→水洗脱(单糖)→递增醇洗脱(二糖、三糖、低聚糖、直至总苷被依次洗脱)。四、分离null ●凝胶层析法 对于不同聚合度的糖类及其水溶性成分的分离特别有效,方法快速、简单、条件温和。 洗脱顺序:随分子量由大及小,渐次流出。 四、分离null●离子交换纤维素层析法 DEAE纤维素(二甲胺基乙基纤维素)和ECTEOLA(3-氯-1,2-环氧丙烷三乙醇胺纤维素):分离酸性、中性多糖和粘多糖;ECTEOLA还常用于肝素、硫酸软骨素和透明质等酸性粘多糖的分离。 四、分离null●蛋白质去除法 ◆酚、三氯醋酸、鞣酸:与蛋白质生成沉淀而不使多糖沉淀。 ◆注意:处理时间应尽可能的短,并在低温下进行,以免多糖降解。四、分离
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