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荧光光度法测定食品品中维生素C的总量.pdf

荧光光度法测定食品品中维生素C的总量

chemidoctor
2012-10-19 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《荧光光度法测定食品品中维生素C的总量pdf》,可适用于领域

一//《食品与发酵工业》FoodandFermentationIndustriesf/No.l、簿食.j荧光光度法测定食品中维生素兰塞童(广西壮旗自治区轻工业研究所)食品中维生素c(vc)的测定方法很多常用的有滴定法、比色法、荧光法、气相色谱法、高效液相色谱法、电化学法等但因荧光法具有灵敏度高线性关系好精密度高以及不受其它荧光杂质的干扰等优点故以荧光法测定食品中的vc已越来越为广大分析工作者所采用。但以偏磷酸醋酸溶液作Vc提取液的经典Vc总量的荧光测定法口(下称经典法)操作过程过于繁琐且偏磷酸醋酸溶液在配制时因偏磷酸难溶解而不易配制以及存放时间不宜过久(贮存在"C下棕色瓶中可保存~天)口从而影响了分析速度。基于此本文对传统的荧光法测定Vc作了些改进即以草酸代替偏磷酸一醋酸溶液作vc提取液将加硼酸一醋酸钠及醋酸钠的步骤与加邻苯二胺的步骤台并在一个试管中进行。改进后的方法不仅克服了经典法中提取液难配制以及存放时间不宜过长的缺点而且简化了操作手续提高了分析速度。实验部分一、仪器日本岛津RF一荧光分光光度计。二、试剂.酸洗活性碳取lOOg活性碳以l的HCIml加热煮沸rain以水洗涤次(每次rn)然后置"C下烘干备用。、%草酸水溶液生i芡毫c的总量.醋酸钠溶液称取醋酸钠HaCooNa·Hg溶解于水中并定容至ml.硼酸一醋酸钠溶液称取g硼酸加入醋酸钠溶液m使之溶解.然后以水定容至mr。使用前新鲜配制。.邻苯二胺溶液称取rag邻苯二胺溶于lml水中使用前新鲜配制(避光保存).Ve标准液称取ragVc以l草酸定容至Oral。此溶液含vc为Og/ml。本试验所用水均为去离子水所用试剂均为分析纯。三、操作步骤.标准液取oopg/mlVe标准液ml于ml烧杯中加入g活性碳.以玻棒剧烈搅拌~rain稍静置过滤。取滤液.Oral于ml容量瓶中加水定容至刻度摇匀此溶液含Vcpg/ml。作标准工作液。.样品液取ml具塞比色管①、②于①、②中各加入标准工作液On',J再于①中加入.Oml硼酸一醋酸钠溶液(此为标准空白液”)摇匀放置rain后于②中加入醋酸钠溶液.ml(此为“标准液”)摇匀立即于①、②两管中各加入邻苯二胺溶液lore|于维普资讯http:wwwcqvipcom暗处放置rain后测定其荧光强度结果与讨论一、荧光化合物的激发及发射光谱启动RF一荧光分光光度计选择激发及发射狭缝均为nm.对维生素C与邻苯二胺所形成的荧光化台物的激发及发射光谱进行扫描。所得激发及发射光谱如图所示。本文选择激发及发射波长分别为nm和nm.L雠璺.糕霉....BOO.(nm)图vc与邻苯二胺所形成的荧光化合物的激发及发射光谱a.激发光谱b.发射光谱二、影响荧光强度的因素.活性碳的影响活性碳是一个很好的吸附剂.文献E表明当活性碳用量过大时也会对维生素C产生吸附作用.降低相对荧光强度使测定结果偏低。本文活性碳用量为g。.醋酸钠的影响本文试验了当vc加入量为g时.醋酸钠溶液加入后加入邻苯二胺溶液的不同时间对相对荧光强度的影响。从表l可知醋酸钠在邻苯二胺加入后存在于溶液中的时间越长相对荧光强度越低从而降低了方法灵敏度。因此当“标准液或“样品液中加入醋酸钠后摇匀立即加入邻苯二胺溶液可提高方法灵敏度表.邻苯二胺溶液加人时间对荧光曼座的髟响部苯二溶I直加l凡时问(min)AF....B..草酸浓度的影响试验表明草酸浓度对荧光强度会产生影响从表可知当vc加入量为Ug时草酸浓度越高相对荧光强度AF越低AF的变化率越大当以AF的变化率不大于作为影响荧光强度的允许限时本文选择样品工作液的草酸浓度不大于.。表.草酸浓度对荧光强度的髟响N.草酸浓度()..O...OO.{F^......l】F^变化率()O.......硼酸一醋酸钠的影响试验表明作为掩蔽剂的硼酸一醋酸钠溶液在加入空白管后必须放置rain后荧光强度才完全降到最低值否则空白值会偏高。三、工作曲线试验表明Vc含量在~~g/ml范围内有良好的线性关系其工作曲线的回归·方程为:F一...相关系数r=.式中:F一相对荧光强度一/ml由于本法中vc在~~g/ml范围内有良好的线性关系故本文采用直接定点比较法:来计算样品的Vc总量。维普资讯http:wwwcqvipcomVcfi'~(mg/m)一c×K丽式中:’样品液的相对荧光强度Fo样品空白液的相对荧光强度F一标准液的相对荧光强度F标准空白液的相对荧光强度一标准溶液的浓度(~g/m)样品稀释倍数丽一单位换算常数四、变异系数的测定样品测量的重现性由变异系数V来表示。本文对刺梨原汁进行了次测定(见表)从表可知其变异系数为.可见本法的精密度很高。表.剌梨原汁中Vc的含量Xi(Vc古量mg/m)试样XSVl刺梨原汁........l.p.l.五、本法与经典法比较本文分别以草酸(本法)和偏磷酸一醋酸(经典法)作vc提取液对同一食品进行了Vc总量测定结果基本相同(见表)。表.奉法与经典法测定几种食品中vc含量的对比Vc古量(mg/m)试样本法经典法番茄lll.菜般.自萝卜l.l.莲藕l.al.五、样品分析.饮料类()取样:取均匀样品ml于ml容量瓶中加入%草酸溶液ml以水定容至刻度。()氧化:将定容液倒入ml烧杯中(若溶液中有悬浮物或沉淀可通过棉花过滤于烧杯中)加入B活性碳以玻棒剧烈搅拌~rain后稍静置将其倾入滤纸中过滤。取此滤液.wJ于ml容量瓶中以水定容至刻度。此为样品工作液。()反应:取ml具塞比色管①、②于①、②中各加入样品工作液.ml再于①中加入硼酸醋酸钠溶液.ml(此为样品空白液”)摇匀放置Imin后于②中加入醋酸钠溶液.ml(此为样品液”)摇匀立即于①、②两管中各加入邻苯二胺溶液ml于暗处放置min后在k一nm、k一nm处用lcm液池测定荧光强度。.蔬菜、于鲜果品等取g切碎均匀的样品加入的草酸溶液g于组织捣碎机中匀浆。取匀浆og以水定容至wJ取此定容液ml从棉花过滤至lml烧杯中加入g活性碳剃烈搅拌~min稍静置后倾入滤纸中过滤。取滤液ml于ml容量瓶中加水定容至刻度。此为样品工作液。以下操作按“.饮料类”中(j进行。测定结果见表表.几种食品中Ve的测定结果Vc古量回收率平均回收率试样(mg/m)()()刺梨原汁...刺梨浓缩汁...西番莲罐头..】.菠萝罐头...参考文献聂洪勇等《维生紊及其分析方法》上海科学技术文献出版社P.胡正芝等译《食品中营养素分析》轻工业出版社P.Es张旦民等食品与发酵工业~维普资讯http:wwwcqvipcom

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