紫外光度法测定食品中的还原型维生素C

／乙一f7 』 《食品与发酵工业》 Industries 1994' No．5 fs 7．3 紫外光度法测定食品中的还原型维生素 c 杜 伟 (淮海工学院 食品化工系) 摘 要 本文以F 将在 265nm有最大紫外吸收的还原型维生索c选择性地氧化为在 265nm无暇收的 氧化型维生素C，实现对食品样品中多种紫外干扰成分的本底校正，建立了一种测定食品中还原型维生索 C 的新 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 。还原型维生素C含量在 O~300ug／25ml范围内符合比耳定律 r=Q．99995 运用本法实际测定了马 铃薯、番茄等食品中的还原型维生素C的含量，回收率在 97．5～101 2 之间，相对 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 偏差在 0．75～l 26 之间，测定结果与 2，6一二氯靛酚法基本一致。 关键词：紫外光度法，抗坏血酸，铁 维生衷c， 栏 还原型维生素 C在紫外区 265nm有最 大吸收峰，因此，可以用紫外光度法测定纯净 的维生素 C样品中的还原型维生素 C的含 量[1-。由于食品样品中所含有的其它成分在 紫外区有很高的本底吸收，因此t还原型维生 素 C紫外光谱法很少用于食品 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 。对食品 样品紫外区本底吸收的校正有一些可供考虑 的方法，如酶法和碱处理法 维生素 C氧化 酶虽然能将样品中的还原型维生素 C专一 氧化，但酶反应条件苛刻，反应时问长，而且 维生素C氧化酶作为一种蛋白质，本身有一 定的紫外吸收，因此，实际应用时有一定的困 难。碱处理能使样品中的还原型维生素C迅 速氧化，但碱处理对食品样品中其它成分的 影响较大 ，我们 曾对桔子等多种样品进行过 碱处理试验，结果发现，碱处理后的样品吸光 度值反而比处理前大，因此，碱处理法无实际 应用意 义。 )ssa[ 和 Oi—wah LauE。 曾对 cu 与还原型维生素 C的氧化还原反应特 性进行了详细地研究，发现 Cu 可将还原型 本文承蒙廖永明高级 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 师审阅，特此致谢 ·l2 · 维生素 C选择性氧化。谭廷华 等在此基础 上提出了一种以Cu 作为氧化剂，对样 品中 紫外干扰物质进行本底校正的方法，并用于 药物中还原型维生素 C的测定 ，但由于使用 了在 265nm有紫外吸收 的 EDTA对体系中 剩余的 cll 及反应生成的 cu 进行掩蔽． 影响了测定结果的准确性。 由于食品中的紫外干扰成分多 ，因此，目 前尚未见到利用紫外光度法准确测定食品中 还原型维生素 C的报道。本文研究 发现，过 量的 F 在室温下 3～5min内即可将还原 型维生素 C完全氧化为在265nm无吸收的 脱氢抗坏血酸等物质；葡萄糖、柠檬酸等食品 中的常见成分对反应无影响；使用适量的氟 化铵可有效地掩蔽溶液中剩余的 ”及反 应生成的Fe ，而掩蔽剂氟化铵及其与 Fe 和 Fe 的络合物在 265~xn均无吸收。以上 发现使利用紫外光度法准确测定食品中的还 原型维生素 C成为可能。运用本法测定 了马 铃薯、番茄等食品中的还原型维生素 C含 -蚕 ～ -量 维普资讯 http://www.cqvip.com 量，取得了满意的结果。 材 料 与 方 法 一 、主要仪器及试剂 l_751一GW 紫外可见分光光度计：上海 分析仪器厂。 2．标准维生素 c液：准确称取 0．2500g 维生素C，以适量 pH3．0缓冲液溶解，并定 容至 250ml，摇匀 即得 1mg／ml的维 生素 c 贮备液。用时按需要稀释(现用现配)， 3．Fe(Ⅲ)溶液 (100gg／m1)：取 0．864g硫 酸 铁 铵 [(NH~Fe(sq) ·l2H )]于 30ml 2mol／L的 HCI中，溶解后以水稀释至 100ml。 4．10 N F：取 10．00gNI-I~F，溶解并定 容至 100ml。 二 样品处理及测定方法 l_标准曲线绘制 分别吸取 0、0．2、0．5、1．0、1．5、2．0、 2．5、3．0ml标准维生素 c(100Mg／ra1)于 25ml 比色管中，并分别加入 pH3．0的缓冲液 5．0ml，以水定容至刻度 ，以未加标准样的空 白管为参比，lcm比色皿在 265nm处比色测 定各管的吸光度值，以维生素c含量为横座 标，对应的吸光值为纵座标绘制工作曲线。 2．样品中还原型维生素c含量的测定 (1)水果、蔬菜等样品 取 50．0000g样品，加少量缓冲液，于研 钵 中研细 ，定容至 100ml，过滤，弃去最初几 毫升滤液。吸取等量的滤液于标记为“I”及 “Ⅱ 的 2支 25ml比色管中，并分别加入 5．Oral缓冲液，以蒸馏水将管 I定容至刻度， 并在 265nm’处测其吸光值(At)。向管 Ⅱ中 加入 2．0ml Fe(Ⅱ)液，置室温下 5min后加入 2．0ml 10 NH4F，并定容 至刻度，在 265nm 测其吸光值(A-)。由(A 一At)所得差值从 标准曲线中查出对应的维生素 C含量 (2)桔子晶等样品 取 5．0000g样品，以少量的缓 冲液溶解 并定容至 100ml，过滤，弃 去摄初几毫升滤 液。吸取等量滤液于’2支 25m 比色管中，以 下操作同前述(1)。 3．结果计算 还原型维生素 C(mg／100g)= 、，L×W X1000 式中：c—— 根据 A r—A一所得差值从标准 曲 线上查得的还原型维生素C含量( )； V 一 一测定用样品体积(ra1)； v2一 一样品定容总体积(m1)； w 样品重(g)。 结 果 与 讨 论 一 、还原型维生素C的吸收光谱 取 400Mg标准维生素 C于 25ml比色管 中，用蒸馏水定容至刻度并以水为参比，在 210~310nm波长范围内每隔5nm测其吸光 值，并绘制成吸收曲线(图1)。 图 1． 吸收光谱 L_氧化型 Vc； 2．还原型 Ⅶ： 由图 1可见，还原型维生素 c在紫外 265nm处有一最大吸收峰 二、pH值选择 维普资讯 http://www.cqvip.com 溶液 pH对还原型维生素 C稳定性的影 响是 通过 测定在 不 同 pH条 件 下，试 液经 还原型维生素 C的损失百分率来考查的。试 验的结果见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1。结果表明，当pH值小于5 30rrdn后吸光度 的变化情况及经放置 1h后 时，还原型维生素 C相对比较稳定。 表 1． VC在不同pH条件下放置 1h后的损失辜 三、Fe(Ⅲ)对还原型维生素C的氯化作 用 1．还原型维生素 C氧化产物的吸收光 谱 取 200~g标准维生素 C于 25rrd比色管 中，加入 2．0nd Fe(■)溶液，5rrdn后加入 2．0rrd 10 N F，加水至刻度。以水为参比， 在 210～310nrn波长范围内，每隔 5nrn测其 吸光值，并绘制吸收曲线如图1。由图1可 见，过量的Fe(Ⅱ)能将还原型维生素C完全 氧化为在 265nm无 吸收的氧化产物，这是本 方法的基础。 2．Fe(Ⅱj与还原型维生素 c的氧化反应 速度 取 200~g标准维生素 c于数支 25nd比 色管 中，分别加入 1．5rrdFe(Ⅲ)液，在各管分 别进行了不同的反应时间后，迅速加入 2．0nd 10 NHJ：，定容至刻度后，在 265nm 分别以水为参比测定各管的吸光值，并绘制 成反应速度图(图 2)。由图 2可见，对 200~g 还原型维生素 C来说 ，加人 150~gFe(1)，室 温下 4rrdn即可使之完全氧化。 图 2． 反应逮度试验 3．Fe(Ⅱ)用量试验 取200pg标准维生素C于数支 25 比 色管中，并分别加人不同数量的Fe(1)，反 应 5ndn后 迅 速 向各 管 加 入 2．0ndl0 NHF，加水至刻度，在 265nm下分别测其吸 光值 ，结果见表 2。 表 2． Fe(I)用量试验 管 号 L 2 3 4 6 7 8 9 10 1 L 12 标准 Vc( ) 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 Fe(I)( ) 0 5 LO 30 60 100 1 L0 120 130 140 160 180 LO N~F(zrd) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 吸光值(A) 0．441 0．385 0．360 0．310 0．L72 0．038 0．026 0．002 0 0 0 0 按理论计算，将 200~g还原型维生素C 完 全 氧化 需 1el~gFe(Ⅲ)，试验结果表明， 130w．Fe(Ⅲ)室温下 5nfin内即可将 200~g还 原型维生素 C完全氧化，与理论值基本相 符。 四、溶液中Fe(I)及Fe(I)的掩蔽 1 ■ 维普资讯 http://www.cqvip.com 1．NH 与 I~)TA掩蔽效果比较 还原 型维生紊 c的氧化产物—— 脱氢 抗 坏血酸 及 二酮 古洛糖 酸在 265nm 无吸 收 ]，但与Fe(111)或 Fe(I)的络合物都有较 高的吸收，因此，必需对溶液中剩余的 Fe (I)及反应所生成的Fe(I)进行掩蔽 。我们 分别考察了 NH,F与 Ⅱ吼 的掩蔽效果，结 果见表 3。由于Ⅱ髓 本身及其与 Fe(I)、 Fe(Ⅱ)的配合物都有较高的紫外吸收，因而 不能选用。由表 3可见，NH,F溶液本身及其 与Fe(Ⅲ)、Fe(I)的络台物在 265nm处均无 吸收，而且适量的氟离子可以有效地掩蔽 Fe (I)、Fe(I)与维生素C氧化产物的络合作 用。 裹3． EI)TA与NH,F掩蔽效果比较 管 号 Fe(1)( 标准、贮( 2MⅡ)TA(m1) lO NH~F(m1) 吸光值A 1 200 150 O 0 0．203 2 0 0 L O 0 O．099 3 200 150 1．0 0 0．285 4 200 150 2．0 0 0．337 5 O O 0 1．O O 6 200 l50 O 1．O O 2．NH,F用量试验 使用过量的Fe(Ⅱ)将还原型维生紊 C NH,F，以考察其掩蔽效果，结果见表 4。由表 4可见，1o NH,F用量大于 1．Oral时，可获 完全氧化，并 向体系中加入不 同数量的 得满意的效果。 裹4． N F用量试验 昔 号 Fe(1)( ) VC(mg) lO NH (m1) 暇光度 A 1 200 200 O 0．2~6 2 200 2OO 0．5 0．103 3 200 2OO 1．0 0．002 290 2OO 1．5 O．OO4 5 200 200 2．0 0．002 6 200 2O0 3．0 0．002 五、干扰试验 分别考察了葡萄糖、柠檬酸等食品中常 在本 文试验条件下，500倍 的葡萄糖、蔗糖} 350倍的柠檬酸、酒石酸、苹果酸 草酸对测 见成分对测定结果的干扰情况，结果见表 5。 定无干扰。 裹5． 共存物质干扰试验 干扰物 干扰物加人量 标准 VC含量 BC实测量 回收率 种 类 (rag／25m1) ( 25nl1) (~g／25m1) ( ) 蔗 糖 100 2O0．0 201．0 100．5 葡萄糖 1OO 200．O 203．4 101．7 酒石酸 70 200．0 l98．8 99．4 柠檬酸 70 200．0 200．6 100．3 草 酸 7o 200．0 196 98．2 苹果酸 70 200．0 197．9 99．o 维普资讯 http://www.cqvip.com ^ 0．6 仉 4 六、工作曲线及线性范围 圈 3． 工作曲线 按“材料与方法 部分所提供的方法绘制 标准曲线(图 3)。还原型维生素 c含量在 0 ～ 300~．／25ral范围内呈较好的线性关系，线 性回归方程为：Y=0．00243x一0／0015， r一 0．99995 七、回收试验 ‘ 用标准维生素C加入法分别对不同样 品进行了回收试验，结果见表 6。回收范围在 98．4～101．2 ，平均回收率为99．7 。 八、测定方法的精密度试验 按“材料与方法 所提供的方法，分别测 定了马铃薯、番茄、桔子晶等样品中的还原型 维生素C含量，结果见表 7。五次平行测定值 的变异系数在 0．47～1．26 之间。 裹 6． 回 收 试 验 样品5,12含量 标准 Vc加人量 实铡值 回收率 样品号 (} 25m1) (t~／25m1) (~ ／25m1) ( ) l 127．5 200 325．8 99．2 2 201．6 2O0 403．7 1O1．2 3 146．7 200 344．3 98．4 4 182，9 200 380．4 98．8 5 98．4 100 l95．9 97．5 6 87．2 1O0 185．8 98．6 表 7． 精 密 度 试 验 五 次 平 行 测 定 值 平均值 标准差 变异系数 样 品 (rag／lOOg) (mg／lOOg) (rag／1OOg) ( ) 马铃薯 17．21 17．43 17．28 17．36 17．33 1 7．32 0．08 0．47 番 茄 8．94 9．O1 8．98 9．13 9．20 9．05 0．11 1．2O 青 椒 86．73 85．O2 86．33 87．13 86．18 86．28 0．79 0．92 桔子晶 l2．91 12．87 12．89 13．01 13．10 12．96 0．10 0．75 萝 h 1O．55 10．38 10．47 10．39 110．56 10．47 0．09 O．82 包心菜 8．62 8．48 8．78 8．64 8．58 8．62 0．11 1．26 维普资讯 http://www.cqvip.com 九、样品测定结果与 2，6-氯靛酚法的比 较 按本文方法分别测定了马铃薯、番茄等 样品的还原型维生素 C含量，同时参照文 献[ 以2，6-氯靛酚法测定了相同样品中的还 原型维生素 C含量。经 比较 ，两种方法的测 定结果基本～致(表 8)。 衰 8． 两种方法测定结果比较 测定值(rag／100g) 相对偏差 样 品 本文方法 2，6-二氯靛酚法 ( ) 马铃薯 17．32 16．92 2．33 番 茄 9．05 9．12 0．77 青 椒 86．28 87．16 0．97 桔子晶 12．96 13．14 1．37 萝 h 10．37 10．78 2．92 包心菜 8．62 8．68 0．69 参 考 文 献 [1]南京药学院主编 ；《药物分析》，人 民卫生 出 版社，1980 [2]M∞as AFAIFharmazie，1977，32：784 _3]0一wah Lau et a1．；Analyst，1986，111：665 [4] 碹华等}药物分析杂志，1991，11(I)，28 。 ～ J IS]刺福岭等f《食品物理与化学分析方法》，轻 工业 出版社 ，1987 Determination ofAscorbicAcidinFoodUsing Ultraviolet Spectrophotometry Xu Maojun Yu Peien Du Wei (Depar'flne~t of Food and Chemical Engineering，Huaihai Institute of Technology，L~anyungang) Al TRACT A new background correction method for uluaviolet spectmphotorm~ determinatic~0f ascorbic acidinfood hasbeen reportedinthis paper．m procedureis basedontheFe(I)oxida6on 0f reduc— tion VC wi出 maximum ab∞r ∞ at 265nm to oxidize VC without absorption at 265nm．Beer2 s laW is obeyed wi thin the range of O～300 per 2sml for ascorblc acid，regre 0n coefficient r一0，99995． s method has been applied ∞ analysis of ascorbic acid in foods such as potst~o and tomato ~ m reI coveries is 97．S~ 101．2 ，relative standard deviation is 0 75～ 1．26 ．m analytical results agree wi ththose by 2，6一d~chlorophenolindopheno[． Key words：Ultraviolet spectrop~ Uy，Ascorbic acid，Fe(Ⅱ) ·17· 维普资讯 http://www.cqvip.com