全自动琼脂糖电泳系统在孕妇Hb病检查中的应用

全自动琼脂糖电泳系统在孕妇Hb病检查中的应用 全自动琼脂糖电泳系统在孕妇Hb病检查中 的应用 现代科学仪器 ModernScientificInstruments2008年12月 全自动琼脂糖电泳系统在孕妇Hb病检查中的应用? 农建宏钟润梁莉黄惊鸿 (百色市妇幼保健院检验科广西533000;右江民族医学院附属医院广西533000) 摘要探讨全自动琼脂糖电泳系统用于孕妇产前血红蛋白(Hb)病检查的意义,并对4108例检测结果进行分 析.使用北京金桑特医用仪器有限公司生产的SH一2020全自动琼脂糖电泳系统进行Hb电泳测定.检出0【地中海 贫血(HbH病)7例(0.17%),B一地中海贫血136例(3.3%),HbE病3例(0.07%),HbG病4例(0.09%),HbD病l 例.结果表明,全自动琼脂糖电泳系统用于孕妇产前Hb病的检查,特别是产前检查B一地中海贫血,降低新生儿出生 缺陷率有很好的效果. 关键词琼脂糖电泳系统;血红蛋白电泳;地中海贫血;产前检查, 中图分类号R714. ApllicationofAutomaticAgaroseGelElectro—phoresisSysteminHb DiseaseMeasurementofPrenatalWomen NongJianhong,ZhongRun,LiangLi,HuangJinghong (LaboratoryofmaternalandchildhealthcarehospitalinBaiseCity,Guangxi,533000,China; ) (YoujiangNationalMedicalCollegeHospitalinBaiseGuangxi,533000,China) AbstractObjective:Toinvestigatetheautomaticagarosegelelectrophoresissystemforpreg nantwomenhe— moglobin(Hb)disease,.and4108casesoftestresultsforanalysis.Method:theuseofSH一2020fullyautomatic agarosegelelectrophoresissystemoftheBeijingJinSangteMedicalInstrumentCompanyto Hbelectrophoresis.Re- suhs:detectionc~一thalassemia(HbHdisease)sevencases(0.17%),HbE3cases(0.07%),HbG4cases (0.09%),HbD1cases,p—thalassemia136cases(3.3%).Conclusion:Automaticagarosegelelectrophoresis systemforpregnantwomenprenatalHboftheinspection,particularlyprenatalcareB—thalassemia,reducing birthdefectrateisverygoodresults. KeywordsAgarosegelelectrophoresissystem;Hemoglobinelectrophoresis;Thalassemia; Prenatalcare 全自动琼脂糖电泳系统是北京金桑特医用仪器 有限公司通过引进技术开发的电泳系统,其仪器SH 一 2020是以琼脂糖凝胶板作为电泳载体进行电泳分 离技术的精密仪器,其从标本点样后到打印出检验报 告单,都采用计算机控制程序代替手工操作,可用于 多种蛋白电泳测定,血红蛋白电泳分析就是其中项目 之一,而血红蛋白电泳则是诊断Hb病的主要手段. 血红蛋白病主要分为地中海贫血(简称仅一地贫) 和p一地中海贫血(简称p一地贫),是由于血红蛋白 链合成部分受抑制或完全抑制而引起的一组遗传性 溶血性贫血,最早发现于地中海沿岸居民而得名.我 国南方也是地中海贫血的高发区,故Hb电泳检查更 显重要.我院将全自动琼脂糖电泳系统用于孕妇产 前Hb病检查,降低新生儿出生缺陷率,取得了良好效 果.现将2005年4月至2007年12月来我院产前检 查Hb电泳的4108例孕妇结果分析如下. 1资料与方法 1.1资料 研究对象4108例都是2005年4月至2007年12 月来我院产前检查的孕妇,绝大部分为百色市及周边 群众,年龄18岁,41岁,平均年龄为28.5岁. 使用北京金桑特医用仪器有限公司生产的SH一 2020电泳仪,F8288扫描仪由北京方正电子有限公司 提供.Hb琼脂糖凝胶电泳试剂由北京金桑特医用仪 器有限公司提供(包括琼脂凝胶板,缓冲条,染色试 剂,电极等). 1.2方法 1.2.1血红蛋白液的制备 取2mLEDTA—K抗凝新鲜静脉血,离心5min (3000r/min)去掉血浆,用4—5mL生理盐水反复洗 涤3次,最后一次应尽量移去盐水部分,再加相当于红 收稿日期:2008—07—21 作者简介:农建宏(1973一),男,广西省靖西县人,壮族,主管技师,在职研究生学历,主 要从事医学实验诊断. 2008年第6期农建宏等:全自动琼脂糖电泳系统在孕妇Hb病检查中的应用?55? 细胞压积1,2倍的蒸馏水,振荡10s,加1体积四氯 化碳,用混匀器振荡10s,静置片刻,3000r/min离心 5min,即可. 1.2.2点样与电泳 吸出上层清亮的血红蛋白液28mL放人样本槽 让电泳仪自动点样与电泳,20rain后取出琼脂凝胶 板,按照固定,烘干,染色,脱色,清洗,吹干程序完成. 1.2.3扫描与分析 把已经吹干的琼脂凝胶板放人扫描仪进行扫描, 在电脑上进行结果分析. 2诊断 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 地贫诊断的Hb电泳标准按《血液病诊断及疗效 标准》中所列标准….HbA,<2.5%,电泳发现Barts, HbH区带和J等快速区带可诊断为Ot地中海贫血; HbA2>3.5%,电泳发现HbE,HbD,HbG和HbF等慢 速区带可诊断为B一地中海贫血. 在电泳图谱上标有英文小写字母a,b,c,d,e表 示主要电泳区带.a代表HbA(仅B.)区带,HbA占血 红蛋白总量的95%一98%;b代表HbA:(仪:82)区带, HbA2占血红蛋白总量的1.0%,3.5%;HbF(仪) 含量较少占总量的2%以下,由于含量少,电泳时一 般与HbA区带不易分开,需要一定的经验才能判读, 但HbF是胎儿血红蛋白的主要成分,占80%左右,所 以新生儿血红蛋白电泳HbA和HbF容易区分.c代 表快速HbH区带(为异常区带);d代表Bans区带(为 异常区带),e代表HbE区带也是异常区带.从图中不 难看出,图1(A)第7号标本有快速异常区带HbH,第8 号标本有Barts区带,再结合临床症状这两个患者诊断 为仅地中海贫血;图1(A)第9号标本HbA区带有浓 染现象,扫描结果HbA含量增高,结合血细胞分析结 果和临床症状可诊断为B一地中海贫血;图1(B)第5 号标本电泳出现HbE区带,根据患者血细胞分析结果 和临床症状可诊断为HbE病.详见图1. |薯镶A目氇lt鬟| 函 赫..囊一l一|警一磷 3结果 图1电泳图谱 在4108例孕妇中共检出有异常Hb的151例(3. 7%),其中:地中海贫血(I-IbH病)7例(O.17%),HbE3 例(0.07%),HbG4例(0.09%),HbD1例,B一地中海贫 血136例(3.3%).血红蛋白电泳发现异常区带的151 患者用全自动琼脂糖电泳系统扫描结果见表1. 表1异常Hb扫描结果(?s) 注:电泳中HbE和HbA2处于同一位置,不能分开,但HbA?0.08. 4讨论 地中海贫血是由于珠蛋白基因缺失或突变,导致 珠蛋白肽链合成障碍,使链p链合成失去平衡而导 致的溶血性贫血J.可根据缺乏的珠蛋白链的种类 及缺乏程度分为Ot珠蛋白生成障碍性贫血和B珠蛋 白生成障碍性贫血,也称地中海贫血和p地中海贫 血.仅地贫是由仅链合成减少造成非仪链的相对过 剩而形成四聚体,如HbBarts(^y)和HbH(B),p地 中海贫血是由于13链合成减少造成HbA(仅6)增 高,有时HbF(Ot:)增高,HbF增高超过常量时,电泳 出现HbF区带,可扫描定量,因此,电泳分析是分离 和诊断异常血红蛋白的有效方法. 仅珠蛋白生成障碍性贫血可分为重型Ot珠蛋白 生成障碍性贫血(血红蛋白Barts胎儿水肿综合征), 血红蛋白H病,Of.轻型珠蛋白生成障碍性贫血和静止 型仅珠蛋白生成障碍性贫血.血红蛋白Barts胎儿水 肿综合征胎儿在宫中死亡或早产后数小时内死亡,所 以本次检测没有发现重型珠蛋白生成障碍性贫血, 与文献报道相符合.血红蛋白H病在这次(下接58页) ? 58? 现代科学仪器 ModemScientificInstruments2008年12月 也轻度阳性,属常染色体不完全显性遗传.HbD不是一 种单一的异常血红蛋白,其特点是在碱性pH电泳时位 置与HbS相同,纯合子I-IbD—Punjab无症状,或仅轻度 贫血,无脾肿大,血片中有较多靶形红细胞.杂合子多无 症状.血红蛋白病是由于遗传缺陷(常染色体显性遗 传)致珠蛋白肽链结构异常或合成障碍,一种或一种以 上结构异常的血红蛋白,部分或完全替代了正常的血红 蛋白而引起的一组疾病.至今已发现400多种结构异常 性血红蛋白病和100多种珠蛋白生成障碍性贫血,但仅 有少数出现明显病态表现. 本文的筛查结果显示,在肇庆市地中海贫血具有较 高的发病率.本文的基因诊断结果也显示,地贫筛查 符合率82,0%,13地贫筛查符合率达到90.3%.说明 SH2020型全自动琼脂糖凝胶电泳仪分辨率极高,能够分 辨出极微量的异常血红蛋白,符合率高,我们将琼脂糖凝 胶版拓展成双倍人份使用后,虽然改变了部分参数设置, 并没有影响结果的准确性,说明此仪器仍有进一步的拓 展空间,并且用于筛查地中海贫血是可行的,能广泛应用 于各级医院特别是基层医院.由于本文统计的结果包含 门诊病人,故阳性率高,不能与流行病学调查相比较,血 红蛋白电泳在地中海贫血的筛查中起到非常重要的作 (上接55页)检测中也有较高的检出率,说明全自动琼脂 糖电泳仪对血红蛋白H病诊断的运用效果较好,与周 艳洁等报道的全自动琼脂糖电泳仪对13地贫,HbH 病,HbCS和其它异常Hb病的诊断效果与基因诊断相 当基本相符.但全自动琼脂糖电泳仪对于仅轻型 珠蛋白生成障碍性贫血和静止型珠蛋白生成障碍 性贫血诊断效果不理想.这两型仪地贫有轻度贫血 症状或无贫血,肝脾无肿大.但检测血常规会发现红 细胞有轻度形态改变,MCV<79fl,MCV<27pg;红细 胞脆性降低等现象,所以检测血常规发现无贫血, MCV<79fl,MCV<27pg,而电泳未发现异常的患者应 建议其做基因分析以免漏珍. 13珠蛋白生成障碍性贫血可分为重型13珠蛋白 生成障碍性贫血,中间型13珠蛋白生成障碍性贫血, 轻型13珠蛋白生成障碍性贫血和静止B珠蛋白生成 障碍性贫血;一般都有HbF或HbA增高现象,电泳时 会发现HbA和HbF区带浓染,结果一目了然.所以 全自动琼脂糖电泳仪对13地贫有较好的诊断效果. 本次检测共发现136例13地贫,占3.3%,比率最高, 与赵应斌等报道的3.7%相符,说明广西是地贫的 高发区.另外这次电泳我们发现HbE,HbD和HbG 区带,这些基因携带者不造成贫血,生长发育也不受 用.通过血红蛋白电泳能够定量检测HbA,HbF,HbA2, cA含量,可将地中海贫血进行初步分类为Ot地贫或p 地贫,可以有效地筛查出高危夫妇(夫妇是同型地贫 者),同时还可筛查出各种异常血红蛋白,如HbH,HbE, HbG,HbD,I-IbK等,有助于临床确诊,为进一步进行基因 诊断和遗传咨询提供基础.由于对地中海贫血目前尚无 有效的治疗方法,因此,建立有效的检测方法,在育龄人 群中开展地贫筛查,预防重型地贫儿的出生,是行之有效 的预防 措施 《全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观软件质量保证措施下载工地伤害及预防措施下载关于贯彻落实的具体措施 . 参考文献 [1]陈萍.地中海贫血分子基础与临床研究现状[J].广西医学, 2004,26(5):619,621 [2]陈忠领,魏新燕,范美珍,郑志贤,谷双清,刘苏.911例血红蛋白电 泳结果分析[J]实用医技杂志2006.8(5)16 [3]SH2020型琼脂糖凝胶血红蛋白电泳仪使用 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 [4]张之南.血液病诊断与疗效标准:第二版.北京:科学出版社.1998: 49—52 [5]SaikiR.K,We1ahP.S,LevensonC.H,eta1.Geneticanalysisofafn— plifiedDNAwithimmobilizedsequence—specificoligonucleotide probe.ProcNatlAcadSciUSA:1989,86:6230—6234 影响,但其与其他13地贫患者婚配,便有可能生下中 间型和重型的地贫患儿,蔡利群报道的25例HbE复 合13地贫中就有9例为重型,16例为中间型,所以 应引起高度重视. 地中海贫血是我国南方最常见,危害最严重的遗传 性疾病之一,严重影响当地人口素质和生活质量,所以应 大力提倡产前检查,降低新生儿出生缺陷,提高人口素 质.而用全自动琼脂糖电泳系统操作简单,结果稳定,准 确,快速,对血红蛋白病的产前检查有很好的应用价值. 参考文献 [1]张之南.血液病诊断及疗效标准:第2版[M].北京:科学技术出版 社,1998:49—52 [2]黄钰君,伍绍国,区小冰,等.儿童地中海贫血的发生率及发病基因 分析[J].中国优生与遗传杂志,2007,15(6):28—31 [3]周艳洁,阮丽明,何桂琼,等.全自动琼脂糖凝胶电泳检测地中海贫 血7500例结果分析[J].中国计划生育学杂志,2007,140(6):355 — 357? 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