流式细胞仪的使用程序
一.开机程序
1. 检查稳压器电源,打开电源,稳定 5分钟。
2. 打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。打开
压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至 4/5 满(一般可用三蒸水,做分
选必须用 PBS 或 FACSFlow),合上压力阀。确实盖紧桶盖,检查所
有管路是否妥善安置。
3. 将 FACSCalibur 开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是
STANDBY,预热 5-10分钟。排出过滤器内的气泡。
4. 如果需要打印,打开打印机电源。
5. 打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6. 执行仪器 PRIME功能一次,以排除 Flow cell中的气泡。
7. 分析样品时,先用 FACAFlow 或 PBS进行 HIGH RUN约 2分钟。
注:做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个 50ml离心管,
不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装
置,同上法冲洗一次。
二.预设获取模式文件(Acquisition Template Files)
1. 从苹果标志中选择 CELLQuest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个
获取模式文件。
2. 选取屏幕左列绘图工具中的 Dot plot,绘出一个或多个 Dot Plots(点
图)。从 Dot Plot 对话框中选取 Acquisition 作为图形资料来源,并确
定适当的 x轴和 y轴
参数
转速和进给参数表a氧化沟运行参数高温蒸汽处理医疗废物pid参数自整定算法口腔医院集中消毒供应
。
3. 选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram,同上法可绘出 Histogram(直
方图)。
4. 将此视窗命名后储存于 FACStation G3\BD Applications \CELLQuest
Folder \EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。
注:本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和 EXP,储存于 FACStation G3\BD
Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞 DNA检测,EXP
用于细胞
表
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面标志分析。
三.用 CELLQuest进行仪器的设定和调整
1. 从苹果画面中选取 CELLQuest,进入 CELLQuest后在 File指令栏中
打开合适的获取模式文件。
2. 从屏幕上方 Acquire指令栏中,选取 Connect to Cytometer(快捷键:
+B)进行电脑和仪器的连机。将出现的 Acquisiton Control对话框
移至合适位置。
3. 从 Cytometer 指令栏中,开启 Detectors/Amps、 Threshold、
Compensation、Status等四个对话框,并将它们移至屏幕右方,以便
获取数据时随时调整获取条件。也可以用 +1,2,3,4获得此四个
对话框。
4. 在 Detectors/Amps 对话框中,先为每个参数选择适当的倍增模式
(amplifier mode):线性模式 Lin 或对数模式 Log。一般进行细胞表面
抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时,FSC和 SSC多以线性模式
Lin测量,且 DDM Param选择 FL2,而 FL1, FL2与 FL3则以对数模
式 Log 测量;分析细胞 DNA 含量时,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3
皆以 Lin 进行测量,且 DDM Param 选择 FL2;分析血小板表型时,
FSC,SSC,FL1,FL2,FL3等均以 Log进行测量。
5. 放上待检测的样品,将流式细胞仪设定于 RUN,流速可在 HIGH 或
LOW上。
6. 在 Acquisiton Control对话框中,选取 Acquire,开始获取细胞。在以
下的仪器调整过程中随时选取 Pause,Restart以观察调整效果。未完
全调整好之前不要去掉 SETUP前的“✓”。
7. 在 Detectors/Amps对话框中,调整 FSC和 SSC探测器中的信号倍增
度:PMT voltages(粗调)与 Amp Gains(细调),使样品信号出现在
FSC-SSC点图内,且三群细胞合理分布。
8. 在 Threshold 对话框中选择适当的参数设定 Threshold,并调整
Threshold 的高低,以减少噪音信号(细胞碎片)。一般做细胞表型时
用 FSC-H而做 DNA时用 FL2-H。Threshold并不影响检测器对信
号的获取,但可改善画面质量。
9. 从屏幕左列绘图工具中选取 Region(区域),并在靶细胞周围设定区
域线,即通常所说的门。圈定合适的细胞群可使仪器调整更为容易。
10.在 Detectors/Amps对话框中,调整荧光检测器(FL1, FL2, FL3, FL4
等)的倍增程度。根据所用的荧光阴性对照样品调整细胞群,使之分
布在正确的区域内。
11.在 Compensation 对话框中,根据所用的调补偿用标准荧光样品调整
双色(或多色)荧光染色所需的荧光补偿。比如应该为 FL1+ FL2- 的
细胞群却分布在 FL1+ FL2+区域内,则需调大 FL2-?%FL1中的
“?”,并从 FL1-FL2点图中观察新的调整是否恰当
12.在 Status 对话框中可见:Laser Power:正常值—Run/Ready 为
14.7mW,Standby为 5mW;Laser current:正常值为 6Amps左右。
13.调整好的仪器设定可在 Instrument Settings对话框中储存,下次进行
相同实验时可调出使用,届时只需微调即可
注:本计算机中已有三个名叫储存于 FACStation G3 \BD Applications
\CELLQuest Folder \IMM-InstrSettings 及 FACStation G3 \BD Files
\Instrument Settings Files \CalibFile和 Mast-Cell-Set的参数文件,前二者
可用于分析人白细胞,后者用于分析小鼠肥大细胞。
四.通过预设的获取模式文件进行样品分析
1. 从苹果标志中选择 CELLQUEST,新视窗出现后从 File指令栏中选择
Open,打开预设的获取模式文件。
2. 从屏幕上方 Acquire指令栏中,选取 Connect to Cytometer进行电脑
和仪器的连机。将出现的 Acquisiton Control对话框移至合适位置。
3. 从 Cytometer 指令栏中选取 Instrument Settings,在其对话框中选择
Open以调出以前存储的相同实验的仪器设定,按 Set 确定。
4. 在 Acquire指令栏中,选择 Acquisition&Storage决定储存的细胞数,
参数,信号道数。其中 Resolution 在做细胞表面标志时选择 256,做
DNA时选择 1024。Parameter Saved…则根据不同的检测对象选择不
同的参数。
5. 在 Acquire指令栏中,选择 Parameter Description,以决定文件存储
位置(folder),文件名称(file),样品代号以及各种参数的标记(panel),
即安排 tube1,2,3…的检测参数。一般本仪器获取的数据按照检测
对象的不同分别储存于 FACStation G3\BD Applications \CELLQuest
\IMM 和 DNA 文件夹中。文件根据日期命名。
6. 在 Cytometer指令栏中,选择 Counters,将此对话框移至合适位置,
以便于随时观察 events计数。
7. 将样品试管放至检测区,在 Acquire Control对话框中选取 Acquire以
启动样品分析测定。
8. 微调仪器设定,待细胞群分布合适后选择 Acquire Control 对话框中
Pause, Abort, 去除 Setup前的“✓”,开始正式获取信号,存储数据。
9. 当一定数目的细胞被测定后,获取会自动停止,并会自动存储数据。
重复步骤 7,继续分析下一个样品,直到所有的样品数据分析完毕。
注:当所有样品分析分析完毕,即换上三蒸水,并将流式细胞仪置于“STANDBY”
状态,以保护激光管。
五.关机程序:
1. 从 File中选择 Quit, 退出软件,选择 Don’t Save至苹果屏幕。
2. 用 4ml 1:10稀释的漂白水作样品,将样品置于旁位(vacuum is on),
以外管吸去约 2ml,在将样品架置于中位(vacuum is off),再 HIGH
RUN 5分钟(内管吸去 2ml)。
3. 改用三蒸水 4ml作样品,同上处理。
4. 按 Prime三次。
5. 此时仪器自动转为 STANDBY状态,换 2ml三蒸水。必须在仪器处于
“STANDBY”状态 10分钟后再依次关掉计算机、打印机、主机、稳
压电源,以延长激光管寿命,并确保应用软件的正常运行。
6. 填写使用登记表。