Folin-Ciocalteu比色法测定蜂蜜中总酚酸的含量

食品与发酵工业 Food and Fermentation Industries Vo1．29 No．12 Folin．Ciocalteu比色法测定蜂蜜中总酚酸的含量 曹 炜 索志荣 1(西北大学食品科学与工程系，西安，710069) 2(西北大学分析科学研究所，西安，710069) 摘 要 采嗣 Folin—Ciocaheu比色法，： 定了 17砷 不司种类 自々 中国蜂蜜总勤酸 目々含量．结昊 表 明，总 酚酸 浓 衰在 0．002～0．012 mg／mL 习 匈-9吸 囊 值 有 良好 j々线 性 关 系．樟 品王 均 回收率 (n=3)分 别 勺 98．6％，98．4％ 和 101．8％，RSD 分 别为 0．64％，0．81％和 0．58％： 定 结果 显 示 ：中国蜂 蜜总 酚酸含 量 勺(133．0±8．3)～(1 484．6±67．0)“g／g，其 中莱 麦 蜜 总勤 酸 含量 最 高。 关键词 蜂蜜，总酚酸，含量，： 定 蜂蜜是 蜜蜂 采集 植物 的花 蜜或 分 泌物， 经过 蜜蜂 充分 酿 造 而贮 存 在 巢 睥 里 的甜 物 质。蜂蜜 既是 一种保健食 品又是一 味传统 中 药，在我国历代 医书中均有记载。药理研究 表明，蜂蜜在调节肠胃功能紊乱、促进烧伤和 烫伤组织愈合、抵抗病源微生物、促进 胃肠溃 疡愈合 、缓解 呼吸 系统疾 病等 方 面均 有 良好 的效果 ¨ J。 近年来 ，国外对 蜂蜜 中功 能 成分 的研 究 较 多，主要集 中在黄酮类 化合物 、功能性低聚 糖、有机酸 以及酚酸类 化合物方面 的研 究，其 中对蜂 蜜 中酚 酸类 化 合 物 的 研 究 最 引 人关 注，目前 已从 蜂 蜜 中检 测 出了 咖 啡 酸、氯 原 酸、香豆酸 、香草 酸 、对羟 基 苯 甲酸 、阿 魏 酸 、 槲皮素 、高 良姜素、柯 因以及柑橘黄素等 多种 酚性 化合 物L2 J。这 些 化 合 物 具 有 抗 病 原 微 生物、抗炎症 、抗 变 态反 应、抗 心血管 疾病 和 抗氧 化等 作 用。Mohamed等 测 定 了 也 门和 美国的部分 蜂 蜜中总 酚酸 的含 量，发现 不 同 种类蜂蜜 中总 酚 酸含 量 差 异 较 大 L3j。 中 国 是世 界蜂蜜 生产大 国，但 目前 尚未 见 中 国蜂 蜜中总酚酸 含量 的文 献报道 ，本文 对 中 国部 分种类蜂 蜜中 的酚酸 类 化合物进 行 了 测定 ， 为揭示蜂蜜的保健功能和评价蜂蜜的内在质 量提供科学 依据 。 80 1 材料与方 法 1．1 样 品的采 集 所有蜂蜜均由陕西老蜂农蜂业有限公司 协助采集，蜂蜜种类为：槐花蜜(产于陕西北 部地区和甘肃省西部)，黄芪蜜(产于甘肃)， 苹果蜜(产于陕西省)，油菜蜜(产于陕西省汉 中市和青 海省 )，枸杞 蜜 (产于宁 夏 )，山楂 蜜 (产于河南 )，荞麦 蜜(产于陕西省北部地 区)， 五味子蜜(产于陕西汉中市)，山花蜜(产于青 海 )，菊 花蜜(产于浙 江)，枣花蜜(陕西 省大荔 县)，椴 树 蜜 (产 于 辽 宁 )，西 西 果 蜜 (产 于 云 南 )，荔枝 蜜 (产 于 广 东 省 )，柑 橘 蜜 (产 于 四 川)，枇杷 蜜 (产 于 云 南 )，紫 云 英 蜜 (产于 浙 江)。所有样品用蒸馏水稀释 10倍 (v／w)， 用于测定总酚酸含量 。 1．2 化学试剂与仪器 原儿茶酸 (AR)为 Sigma公司产 品，钨酸 钠、钼酸钠、硫酸锂、碳酸钠、磷酸、溴均为分 析纯 。751一GD 紫外 可 见光 分光 光度 计 为上 海分析仪器 厂生产。 1．3测定方法 1．3．1 Folin—Ciocalteu显 色剂的配制 按参考文献[4]方法配置。在 1 000 mL 的磨 口回流装 置 内加 入 50 g钨 酸钠 ，12．5 g 第一作者：博士．副教授。 *陕西省教育厅专项研究基金项 目(No．03JK111)和西北大学重点科技攻关项 目 收 稿 时间 ：2003—10—20 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 29卷 第 12期 曹 炜等：Folin—Ciocalteu比色法测定蜂蜜中总酚酸的含量 钼酸钠，350mL蒸馏水，25 mL浓磷酸及 50 mL浓盐酸 ，充分混 匀，以小火 回流 10h．再 加 入 75 g硫酸锂，25mL蒸馏水 ，数滴溴水 。然 后开 口继续 沸 腾 15 rain，使 得 溴水 完全 挥 发 为止，冷却后定容至 500 mL，过滤，滤液呈绿 色，置于棕色试剂瓶中保存，使用时加入 1倍 体积的蒸馏水，使酸的浓度为 1 mol／L，此液 为应用液，置于冰箱中可以长期保存。 1．3．2 测 定 方 法 准确移取 1 mL稀释 后的蜂蜜溶液 ，加入 1 mL的 Folin—Ciocalteu显色剂，混 匀，然后加 入 5mI 1mol／L的碳 酸钠 溶液 ，用蒸 馏 水定 容至 10mL，混合均匀，在室温、避光条件下 放置 1 h，用 751一GD分光光 度计测 定 760 nm 处的吸光度值。 2 结 果 2．1 线性关 系考察 准确称取 10mg的原 儿茶 酸 ，用 脱氧 的 去离 子水溶解，配制成 0．1 mg／mL的对 照品 溶液 。取 7支 25 mL的具 塞刻度试 管 ，分 别 移取 0．0、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、1．2 mL的 原 儿茶酸对照 品溶液 于试管 中，加入 1 mL的 Folin-Ciocalteu显 色 剂，然 后 备 管 中 加 入 5 mL 1mol／L的碳酸钠水溶液，用蒸馏水定容 至 10 mL，混合均 匀后 ，在室 温下 避光 放置 1 h，用 1 cm 的 比色管 在 760 nm 处测 定吸光度 值。以对照品溶液的吸光度值和对照品的浓 度(mg／L)进行线性回归，求得 回归方程和相 关 系数分 别为 ： Y = 0．0716C 一 0．0097 r = 0．997 结果表 明，原 儿茶 酸 浓 度 在 0．002～ 0．012mg／mL范 围 内 与 吸光 度 值有 良好 的 线性 关 系。 2．2 加标 回收率试验 将 已知含量样 品适量共 15份分成 3组， 备组 精密加入 对照 品约 0．1，0．2，0．3 mg，依 上法测定 ，并计算 回收率 ，结果平均 回收率分 别为 98．6％，98．4％，101．8％，RSD分别为 0．64％．0．81％和 0．58％，n=5。 2．3 精密度试验 精密 移取 同一批 样 品 (槐花 蜜 )共 5份 ， 按样品测 定方 法进 行 测 定，总酚酸 吸光 度 值 的 RSD为 0．84％。 2．4 稳 定性试验 对 同一样 品 在 8 h之 内每 隔 1h进 行 考 察，结果总酚酸吸光度值的 RSD为 0．74％． 稳 定性 良好。 2．5 重复性试验 精 密量 取 同一种蜂 蜜 5份，按 1．3．2进 行检 测，总酚酸 含量的 RSD为 0．96％。 2．6 蜂蜜总酚酸含量的测定 将蜂蜜用蒸馏水稀释 10倍(v／w)，然后 按照总酚酸 的测 定方法 测定各样品 中总酚酸 的含量，结果见表 1。 表 1 蜂蜜中酚酸的含量测定结果 g／g蜂 蜜 n=3) 样品 名称 含量 养麦蜜 枣花 蜜 柑桔 蜜 荔枝 蜜 紫云 英 蜜 山楂 蜜 枇杷 蜜 山花 蜜 五 味子 蜜 菊花 蜜 西西 果 蜜 枸杞蜜 苹果蜜 油菜蜜 黄芪蜜 椴树 蜜 槐花 蜜 1484．6±67．O 668．2±26．O 483．7± 12．6 421．5±9．4 376．9± 16，8 373．2± 13．9 365、2± 16．1 305．3± 17．5 203．4± 16．3 301．5± 16．8 295．4± 5．7 283．2± 16．2 258．0 22．1 231．O± 9．7 177．7± 10．3 153．7± 8．4 133．O ±8．3 3 讨 论 采 用 Folin—Ciocalteu比色 法测 定蜂 蜜种 总酚酸含量 时，用原 儿茶酸 作为对照品，其浓 度在 0．002～0．012mg／mL范 围 内与吸光 度 值有良好的线性关系，3个剂量组的样品平 均回收率 (n=3)分别为 98．6％，98．4％和 101．8％，RSD 分 别 为 0．64％，0．81％ 和 0．58％，该法具 有精密度高 、稳 定性 和重现性 81 维普资讯 http://www.cqvip.com 蔫睡 靖 { ■ 0 食 品与发酵工业 F0od and Fernaentation lndustries Vo1．29 No．12 好等优点。 通过对 中国 17种 不 同种类 蜂 蜜 中总 酚 酸含量的测 定可 知，不 同种类 蜂 蜜中 酚酸 含 量各不相同，其中荞麦蜜总酚酸含量最高，达 (1 484．6±67．0) g／g，其 次 是 枣 花 蜜、柑 橘 蜜 、荔 枝 蜜 ，含 量 分 别 为 (668．2±26．0)、 (483．7±12．6)、(421．5±9．4) g／g蜂 蜜。 黄芪蜜、椴树蜜、槐花蜜总酚酸含量较低，分 另0为 (177．7±10．3)、(153．7±8．4)、(133．0 ±8．3)“g／g。由于不 同种 类的蜂蜜来源 于不 同蜜源植 物 的花 蜜，因此蜂 蜜 总酚酸 含 量可 能与蜜源植物花蜜的总酚酸含量有关。本文 仅对 中国蜂 蜜 中总酚 酸含 量进 行 了测 定。其 中的酚酸的种类和单体含量有待进一步深入 研究 。 参 考 文 献 1 曹 炜，尉亚辉编著 ．蜂产品保健原理与加工技 术 ．北京：化学工业出版社，2002．198～204 2 Roderick J W ，Lise K B，Lu Y R．Food Chem． istry。 70：427～ 435 3 Mohamed A1．Mamary，A1i A1一Meeri，Molham A1 一 Habori．Nutrition Research，2002；22， 1 041～ 1 047 4 Singleton V L，Rossi J A．Am J Enol Vitic，1965， 16：144～ 56 Determination of Total Phenolic Acid in Honey by Folin-Ciocaileu Colorimetry Cao W ei Suo Zhirong2 1(Department of Food Science and Technology，Northwest University，Xi’an，710069) 2([nstitute of Analytical Chemistry，Northwest University，Xi’an，710069) ABSTRACT Total phenolic acid contents of seventeen different types of Chinese honey were analysed by Folin— Ciocaileu colorimetry．The results showed that the linear range of standard curve was 0．002～0．012 mg／mL，the average recoveries of catechin were 98．6％，98．4％ and 101．8％ with corresponding RSD of 0．64％ ．0．81％ and 0．58％ respectively Total phenolic acid contents of ten types of diluted Chinese honey samples varied from (133．0±8．3)to(1 484．6± 67．0)~tg／g as Catechin equivalent．Buckwheat honey(North of Shaanxi province)contained sig— nificantly higher total phenolic acid content compared with other Chinese honey samples． Key words honey，total phenolics acid，content，analysis 竹叶开发前景看好 ． 在崇尚自然的今天，天然功能物质 的用途为人们所 关注。竹 子是禾本科多年生常绿植物，是 当今世 界 最具有 使 用价值 的植 物之 一。 然 而就 竹 子 的整 体 利用 而言 ，对 竹 叶 的开 发 明显 滞后 。 如今 ，竹 叶提 取物作为一种新的黄酮类保健营养素正引起食品营养专家们的注意。 竹 叶的医疗保健作用早 已为我国人民所认识。竹叶在我国具有悠久的食用和药用历史，据医书记载有凉 心 缓脾 、清爽 止渴 等作 用，这 说 明竹 叶是 中医一 味 传 统 的清 热 解 毒 药。 1998年，(淡 )竹 叶 又 被 卫 生部 批 准 列 入 了“药、食两 用 的天 然植 物 名单”。 竹叶中的有效成分 究竟是什么呢?研究表明，竹叶中含有大量的黄酮类化合物和生物活性多糖及其他有 效成分，如酚酸类化合物、葸醌类化合物、萜类内酯、特种氨基酸和活性肽、锰、锌、硒等物质。竹叶中所含的功 能因子主要是黄酮糖苷和香豆素类内酯。其有效成分的含量和生物活性均与银杏叶具有可 比性。竹叶提取 物具有优 良的抗 自由基 、抗氧化、抗衰老 、降血脂和血胆固醇 的作用。竹叶提取物 以其 丰富的资源、优 良的品 质、显著的保健功效、清新 的风味和极大的安全性，在功能性食品和医药保健 品领域有着十分广阔 的应用前 景 。 82 维普资讯 http://www.cqvip.com