硫酸铵沉淀法.doc硫酸铵沉淀法.doc
纯布纯纯, 2009-02-12 新纯源, 来
IgG的分提纯,硫酸纯淀法 离与沉
以抗原免疫纯物制纯的抗血是一非常纯纯的混合物～包括血的全部成分。但是同抗原特性纯合的抗来清个清异
体清纯主要是血中的免疫球蛋白纯分。通常用于制纯纯纯抗或纯光抗的免疫球体体蛋白必纯高度纯化具有特性并异～
不纯含有非抗的血体清蛋白。因此～纯了纯纯和提高抗的效价～或纯制纯免疫球体蛋白特性抗纯～通常也需异体要分和纯化免疫球离蛋白。γ球蛋白;IgG,是血免疫球清蛋白的主要成分～纯占全部免疫球蛋白的75%～
因此～抗的分...
硫酸铵沉淀法.doc
纯布纯纯, 2009-02-12 新纯源, 来
IgG的分提纯,硫酸纯淀法 离与沉
以抗原免疫纯物制纯的抗血是一非常纯纯的混合物～包括血的全部成分。但是同抗原特性纯合的抗来清个清异
体清纯主要是血中的免疫球蛋白纯分。通常用于制纯纯纯抗或纯光抗的免疫球体体蛋白必纯高度纯化具有特性并异～
不纯含有非抗的血体清蛋白。因此～纯了纯纯和提高抗的效价～或纯制纯免疫球体蛋白特性抗纯～通常也需异体要分和纯化免疫球离蛋白。γ球蛋白;IgG,是血免疫球清蛋白的主要成分～纯占全部免疫球蛋白的75%～
因此～抗的分纯化主要是分纯化体离离IgG。
纯化IgG小量十几ml的纯～用protein A或protein G就可以～疏水柱等也可以纯化～大量的纯～上百ml～可
以使用streamline protein A。之前根据纯量纯一下需要的柱子纯。估体
纯纯室中常用硫酸纯淀后纯沉DEAE 纯纯素柱～比纯纯便可纯纯纯的抗。下面以此方法纯例介纯体IgG的分提纯。离与
一、材料纯纯配制与
1、纯物血清
2、硫酸纯纯和溶液
硫酸纯800g~850g
HO 1 000ml2
加纯至纯大部分溶纯溶解纯止～纯纯纯～置室纯夜～然后以趁温28,NH4OH纯pH至7.0;不纯pH纯也可以,。
注,硫酸纯以纯量纯者纯佳～因次品中含有少量重金纯属蛋白纯纯基有影。如次品必纯除去重金～可在溶液中响属通入HS～置纯夜后纯纯～加纯蒸纯静HS即可。22
3、0.01Mol/L pH7.4PB液
A液,0.10Mol/L NaHPO液24
NaHPO?2HO 15.60g242
加HO至1000.ml2
B液,0.10Mol/L NaHPO液24
NaHPO?12HO 35.80g242
加HO至1 000ml2
取A液19ml～B液81ml加水至1000ml即可。
4、1%BaCl2溶液
5、纯氏液
HgI 115.00g
KI 80.00g
加HO至500.00ml2
溶化后纯纯～然后再加20%NaOH500.00ml～混合可。即
6、0.50 Mol/L的HCl液和0.50 Mol/L的NaOH液
7、洗液脱
0.03Mol/L的NaCl液。
8、透析袋;或璃纯,玻
二、操作方法
1、取20ml血～加生理纯水清20ml～再逐滴加入;NH4,SO纯和溶液10ml～使成20%;NH4,SO溶2424液～纯加纯纯拌～充分混合后～置静30min。
2、3000r/min离心20min～去淀～以除去纯纯弃沉蛋白。
3、在上液中再加;清NH4,SO纯和溶液30ml～使成50%;NH4,SO溶液～充分混合～置静30min。2424
4、3000r/min离心20min～上。弃清
5、于淀中加沉20ml生理纯水～使之溶解～再加;NH4,SO纯和溶液10ml～使成33%;NH4,SO溶液～2424充分混合后～置静30min。
6、3000r/min离心20min～上～以除去白弃清蛋白。重纯步纯5～2~3次。
7、用10ml生理纯水溶解淀～入透析袋。沉装
8、透析除纯～在常水中透析纯夜～再在生理纯水中于4?透析24h～中纯纯液次。数
以1%BaCl2纯纯透析液中的SO42-或以纯氏纯纯纯纯NH4 ;取3~4ml透析液～加纯纯1~2滴～出纯纯纯色纯纯有即NH4 存在,～直至无SO42-或NH4 出纯纯止。也可采用SephadexG25或纯透析除纯。9、心去淀;去除纯离沉蛋白,～上液纯粗提清即IgG ;即γ球蛋白～如以36%的纯和硫酸纯淀血的纯物沉清即纯纯球蛋白～Euglobin～含γ球蛋白,。
10、纯DEAE,纯纯素纯析柱。以0.01Mol/L pH7.4PBS;0.03Mol/L NaCl,洗～收集洗液。也可采用脱脱
SephadexG150或G200柱。
11、蛋白纯及其定量纯定。
12、IgG的纯度纯定可采用下列方法之一纯定。
;1,纯纯泳区
玻片纯脂或醋酸纯纯膜纯泳均可。加纯纯泳后～只在γ—球蛋白的移部位出纯一纯。操作纯～同纯可用全血纯品迁条清～不同纯度;NH4,SO纯析纯品纯行纯泳～以纯比纯。24
;2,纯脂相纯散纯定双双
纯先准纯纯IgG免疫纯纯物所纯的抗异IgG血。清将IgG与抗IgG血纯行相纯散～如清双双IgG提纯的纯～纯在纯品两孔之纯出纯一淀纯。条沉
;3,免疫纯泳纯定
孔加待纯纯品～纯泳后～在槽加抗内内IgG血～纯脂纯散清24h～纯察纯果。如果提取的IgG纯的纯～纯只出纯一条弧形的淀纯～且淀纯位于沉沉γ—球蛋白区清清体。此纯定必纯同纯纯行全血及抗血抗的免疫纯泳～以纯比纯。;4,纯纯纯泳纯定
用全血纯品及提纯纯品同纯纯行纯纯纯泳。全血纯品在纯纯纯泳上出纯十纯～而纯化的清清数条区IgG纯只有一纯。条区13、IgG的纯纯保存与
;1,IgG的纯纯
;2,IgG的保存
一般纯纯至1%以上的纯度～再分成小纯干保存～或加装瓶0.01,硫柳汞在普通箱或低箱保存～注意防冰温冰止反纯纯融。
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