微流体数字化技术制备基因芯片微阵列
微流体数字化技术制备基因芯片微阵列 第19卷第6期
2O11年6月
光学精密工程
OpticsandPrecisionEngineering VoI.19No.6
JLln.20U
文章编号1004—924X(2011)06,1344—09
微流体数字化技术制备基因芯片微阵列
耿鑫,侯丽雅,杨眉
(南京理工大学机械工程学院
,王洪成,章维一
,江苏南京210094)
摘要:采用以脉冲为微流动基本形态,脉冲当地惯性力为主动力的微流体数字化技术进行了基因芯片微阵列制备实验.
在搭建的基于微流体数字化技术的基因芯片微阵列制备系统上,实验验证了脉冲点样系统参量(收敛角2,微喷嘴内径
d,电压幅值u和驱动频率,)对样点直径和脉冲点样稳定性的影响规律.以实验规律为依据,提出了制备样点直径约为
100j上m的中等密度微阵列的实验路线,制备出了样点平均直径为102.2t,m,微阵列密度约为4000spot/cm的基因
片微阵列(点样溶液为3×SSC柠檬酸盐缓冲液).得到的研究结果可为建立高密度基因芯片脉冲点样技术提供实验研
究基础.
关键词:微流体数字化;脉冲点样;基因芯片微阵列
中图分类号:Q819;TP273文献标识码:Adoi:10.3788/OPE.20111906.1344
Preparationofgenechip
microfluiddigi
mlcroarraysusing
talization
GENGXin,HOULi—ya,YANGMei,WANGHong—cheng,ZHANGWei—yi
(SchoolofMechanicalEngneering,NanjingUniversityof
ScienceandTechnology,
*Correspondingauthor,E-
Nanjing210094,China)
mail:hou-liya@hotmail.corn
Abstract:Apreparationexperimentofgenechipmicroarrayswascarriedoutbythemicrofluiddigitali—
zation,inwhichthepulseisbasisformsofthemicrofluidicflowsandthemicrofluidicflowsaredriven
bythepulsedlocalinertiaforceinmicrochannels.Basedonthetechnology,anexperimenta1system
topreparegenechipmicroarrayswasbuilttostudytheeffectthenozzleinsidefalloffangle20,nozzle
innerdiameterd,voltageamplitudeU,andthedrivingfrequencyfonthedropletdiameterandDulse
pottingstability.Theexperimentalschemeforpreparingthemieroarrayswasproposedandthenthe
moderatemieroarraywiththedropletaveragediameterof102.2肚
mandthedensityofmicroarrayof
4000spot/cmweremanufacturedbyusing3×
SSCcitratebufferasspottingsolution.TheresuItsin
thispapercanprovideaexperimentalbasisforestablishingahigh—
throughputmicroarraypulsespot—
tingtechnology.
Keywords:microfluiddigitalization;pulsespotting;genechipmicroarray
收稿日期:20]0-12—27;修订日期:2011-03—07. 基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.50975152);南京理工大学自主科研专
项计划资助项目(No
2010GJPY006);教育部博士学科点专项科研基金资助项目(No.20060288005)
第6期耿鑫,等:微流体数字化技术制备基因芯片微阵列 1引言
基因芯片技术发展于2O世纪9O年代,是一 种能够对大量遗传信息进行快速,高通量,并行检 测的多学科交叉融合技术..,在生物检测,医学 检验和药物筛选等众多领域得到了广泛应用. 根据制备方式,基因芯片可分为高密度的原 位合成芯片和中,低密度的DNA微阵列两大类. 在实际临床诊断及军事,司法应用中,大多情况下 只需要简单灵活,速度快,成本低,易于操作,质量 可靠的中,低密度DNA微阵列制备技术].中, 低密度微阵列点样技术分为接触式和非接触式两 种,由于非接触式点样具有样品点定量准确,重现 性好等优势,被作为主要点样技术采用.现有的 非接触式点样技术按照驱动方式可分为气压驱 动,热空气驱动,静电驱动,容积式压电驱动和压 力驱动等].
气压驱动以JensDucree等人提出的Top— SpotTM技术,以及PeterKoltay等人提出的一 种基于Si的DWPTM(DispensingWellPlate)系 列样品分配装置为代
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
_8].气压驱动具有操作 和制备工艺简单等优点,但存在着外接驱动设备 庞大,无法与微喷阵列芯片集成的问题;同时由于 气压大小无法精确控制和喷射过程中会产生负压 等原因,微喷头内部易产生气泡影响喷射质量.
热空气驱动_】.虽然已成功应用到打印机技术中, 但其制作工艺过于复杂,同时长期发热会影响生 物样品活性,因而大大限制了其在生物领域中的 应用前景.静电驱动是通过静电力使液体腔 膜片发生形变,驱动液滴微喷射.静电驱动的制 造及装配工艺都比较复杂.容积式压电驱动口3l 的关键组成部分是液体腔,液体腔的一侧或两侧 由压电陶瓷片组成.工作时,压电陶瓷片在外加 电场的作用下,做厚度切变振动,从而改变液体腔 的体积,同时产生一个足够大的沿喷孔方向的正 压力波,该压力波足以克服喷孔内壁黏附以及表 面张力,使液体从喷孑L喷出.已成为产品的容积 式压电驱动点样仪的微喷嘴由金属材料经精密机 械加工而成,成本较高.同时,该方法对喷射液体 的物理性质要求较高,难以喷射黏稠度较大的液 体.通常的解决办法是对微喷嘴腔体进行加热, 但会造成点样液变性,所以对热敏感的样品无法 进行点样.机械压力驱动】们机理与容积式压电 驱动相似.
微流体数字化技术(也称微流体脉冲驱动一控 制技术)以脉冲流动为微流动基本形态,以脉冲当 地惯性力为主动力,适用于各种液体和粉体,液体 喷射量分辨率可达飞升级..脉冲惯性力可通 过不同方式产生,压电器件具有电压一位移动态响 应好,响应频率高等特点,可作为整体驱动器置于 微流道外部产生脉冲惯性力,而压电器件驱动电 压的输入波形,幅值,频率等可作为微流体脉冲 (数字化)流动的驱动一控制参量】.近年来,南 京理工大学微系统研究室对微流体数字化技术在
细胞一基因工程的应用及相应微流体器件制备上 展开了研究ll,在文献[2o]中,利用压电陶瓷器 件作为脉冲惯性力的动力源,制备了中等密度的 液滴微阵列,液滴圆整,均一性良好,为用微流体 数字化技术制备基因芯片微阵列打下了实验基 础.
本文在文献[2O]的研究基础上,将微流体数 字化技术应用于基因芯片制备技术中.通过对基 因芯片脉冲点样的实验研究,探索微流体驱动一控 制参量,点样微喷嘴的几何尺寸等对样点直径和 脉冲点样稳定性的影响规律,并根据建立的影响 规律制备中等密度的基因芯片微阵列.由于微流 体数字化技术具有液体喷射量分辨率高的优 势[.],本文的研究方法可为微流体数字化技术 制备高密度基因芯片探索新途径.
2基因芯片微阵列制备实验系统
如图1所示,基因芯片微阵列制备系统主要 由计算机,压电驱动一控制系统,压电陶瓷作动器, 三维调节架,二维工作台及其运动控制器,频闪观 测仪,微喷嘴和玻璃基片等组成.
微流体数字化技术中使用的压电器件为堆栈 式压电陶瓷作动器(不同于容积式压电驱动中的 压电陶瓷片),压电陶瓷作动器安装在流路本体外 部,压电驱动,控制系统输出的电压波形信号加载 在压电陶瓷作动器两端,使微喷嘴内的液体获得 足够大的惯性力,克服黏性力从微喷嘴中喷出. 基因芯片微阵列制备过程中,计算机(上位 机)通过RS232串口通信同时给压电驱动一控制 系统(下位机)和二维工作台运动控制器(下位机)
光学精密工程第19卷
图1基因芯片微阵列制备实验系统
Fig.1Experimentsystemforpreparinggenechipmi
croarray
发送指令,使压电陶瓷作动器和二维工作台协调 工作.
本文使用的压电陶瓷作动器为德国PI公司 生产的P一844.10型压电陶瓷,电压为0,100V, 位移为0,15ffm;微流体驱动一控制参量是指压 电驱动一控制系统提供给压电器件的驱动电压波 形(驱动波形),驱动电压幅值(电压幅值【,)和驱 动电压频率(驱动频率厂).
微喷嘴是基因芯片微阵列制备的核心器件, 材料为硼硅酸盐玻璃毛细管(规格:内径0.6 mm,外径1.0ram),由南京理工大学微系统研究 室自制锻制仪锻制而成.图2为锻制成型内 径d为50m的玻璃微喷嘴显微照片.图2中 2为微喷嘴的收敛角,可由下式估算:
一arctanf1,(1),厶』,
式中,D为玻璃毛细管锻制前的内径;d为锻制后 图2微喷嘴显微照片
Fig.2Microphotographofmicro—nozzle 的微喷嘴的内径;L为玻璃毛细管的变形长度. 由于制备基因芯片微阵列所用的生物样品大 多比较昂贵,本文在实验阶段采用的样品溶液为 用来溶解高黏度PCR产物和基因组DNA的标 准柠檬酸盐缓冲液(3×SSC).实际生物样品溶 液的黏度一般都由其缓冲液的黏度决定,因此,可 以用缓冲液代替实际生物样品溶液进行基因芯片
微阵列制备的实验研究,以节约实验成本l2. 3基因芯片微阵列制备实验
3.1基因芯片微阵列
评价
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指标
基因芯片微阵列制备技术的主要评价指标 有:容量,密度,样品点尺度,纯度,活性,规整度, 通量,可操作性等瞳.其中,样品点尺度,密度是 重要指标,决定着微阵列荧光检测和数据分析的 难易程度.因此,本文选取样品点尺度和密度作 为基因芯片微阵列制备质量的评价指标,具体说 明如下:
样品点尺度:指微阵列样品点的大小,一般用 样品点直径表示,接触式和非接触式点样设备多 为容积式压电驱动,制备的样品点尺度在75, 300ffm.本文采用样品点直径D表示样品点尺 度,测量方法为:将液滴喷点在表面平整,经疏水 化处理后的玻璃基片上,样点在表面张力的作用 下,形成规则的圆形,通过显微测量系统测出样点 直径的大小.
微阵列密度:指基片(实验系统中的玻璃基 片)内单位面积内的样品点数(单位:spot/cm),
可通过下式计算:
D一100×f(2),S,
式中:D为单位面积的样品点数,S为相邻样品点 的中心间距(单位:m),一般选为样品点直径D 的1.2,1.6倍.本文
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
的基因芯片微阵列制 备实验系统中,通过改变二维工作台的运行参数 对S进行设定.
3.2微阵列制备系统参量对样点直径和脉冲点 样稳定性的影响
影响微阵列样点直径和脉冲点样稳定性的因 素很多,可分为驱动,控制参量(驱动波形,电压幅 第6期耿鑫,等:微流体数字化技术制备基因芯片微阵列 值L,,驱动频率厂),几何参量(微喷嘴内径和微 喷嘴收敛角28)和点样液物性(黏度),驱动一控制 参量和几何参量统称为系统参量.本文将系统参 量中驱动波形固定为常用的基础波形——矩形 波,主要研究收敛角2,微喷嘴内径d,电压幅值 【,和驱动频率_厂对样点直径D和脉冲点样稳定 性的影响规律.电压幅值u与驱动频率,由计 算机(上位机)程序设置,变化范围分别为0,8o V和0~256Hz.微喷嘴内径d可选范围为15, 200ffm,微喷嘴至玻璃基片的高度为2.0mm. 点样液为3×SSC,使用乌氏黏度计测量出黏度为 1.28mm/s(黏度计常数:0.1099miTl/s). 3.2.1微喷嘴收敛角2对样点直径D的影响 实验条件:d一60ffm;U选用:30,40,50,6O, 7O,8OV;20选用:12,18,25,30,36.. 图3所示为微喷嘴收敛角2对样点直径的 影响曲线.在电压幅值U一定的情况下,当2 在12.,36.递增时,D随之有较大范围的增大. 当收敛角较小时,由于微喷嘴端部流道较长,易造 成微喷嘴的堵塞,且受锻制条件的限制,收敛角 2一般不超过60..因此,在基因芯片微阵列制 备过程中,微喷嘴的收敛角通常取3O.. g
i
g
曼
q
2
0
图3微喷嘴收敛角对样点直径的影响
Fig.3Influenceofdifferentnozzleinsidefalloffan
glesondropletdiameter 3.2.2微喷嘴内径d对样点直径D的影响 实验条件:f一2Hz;U选用50,55,60,65, 7O,75,8OV;d选用2O,30,40,5O,6O,7O,80,
i00,120,150Hm.
图4所示为d对D的影响曲线.当d在2O ,
150ffm递增时,D随之增大;在电压幅值U 确定的情况下,改变d,D在50~340ffm变化. g
矗
善
至
拿
占
图4微喷嘴内径对样点直径的影响
Fig.4Influenceofdifferentnozzleinnerdiameters
ondropletdiameter 3.2.3电压幅值U对样点直径D的影响 实验条件:,'一2Hz,一100ffm,2一30. 图5为电压幅值u对样点直径的影响曲线. 从图中可知,在电压幅值达到阈值45V之后才有 液滴喷出,U从45V增大至8oV时,样点平均直 径在182,300ffm变化,并随电压幅值的上升而 增大.
Drivingvoltage/V
图5电压幅值对样点直径的影响
Fig.5Influenceofdifferentvoltageamplitudeson
dropletdiameter
电压幅值反映了惯性力的大小,当电压幅值
从0V变化到45V时,惯性力逐渐增大,但微喷 嘴内的液体获得的惯性力不足以克服液体的黏性 力,因此,无液体喷出;当电压幅值从45V上升至 8OV时,微喷嘴内的液体获得了足够大的惯性 力,克服黏性力从微喷嘴中喷出,且样点的直径随 电压增大而增大.
OOO0OO0OOOO00O如加Mm
光学精密工程第19卷
3.2.4驱动频率l厂对样点直径D的影响
实验条件:U一8OV,===15/,m,20=30. 图6为驱动频率对样点直径的影响曲线.从
图中可以看出,当_厂在2Hz至5OHz之间递增时, 随之近似线性地减小,在26,4m变化.
Drivingfrequency/Hz 图6驱动频率对样点直径的影响
Fig.6Influenceofdifferentdrivingfrequencieson
drop/eldiameter
文献E2o]中提出,要实现喷射稳定,均匀,无
气泡产生,必须采用合理的驱动频率和电压幅值 组合.本文在此基础上,选用内径d分别为15, 1.()和200m的微喷嘴进行脉冲点样实验,得出 了驱动频率,电压幅值u对脉冲点样稳定性的 影响规律,如表1所示.
表1驱动频率,电压幅值对脉冲点样稳定性的影响 Tab.1Influenceofdifferentdrivingfrequenciesandvoltage
amplitudesonpulsespottingstability
从表1中可知,能够使喷射稳定,均匀,无气 泡产生的电压幅值U范围随着驱动频率_厂的增 大而减小.例如驱动频率/为2,10Hz时,稳 定喷射的电压幅值U为2O,8oV,而当驱动频率 厂为45,5OHz时,无论选择何种电压幅值[,r,均 有气泡产生,喷射不稳定.因此,表1可作为稳定 制备基因芯片微阵列时电压幅值U和驱动频率厂 的选择依据,即选择合适的U___厂组合可以有效地 避免不喷和有气泡产生的现象.
3.3基因芯片微阵列制备实验
3.2节得出的系统参量对样点直径D的影 响规律可作为基因芯片微阵列制备时系统参量的 选择依据.具体方法为:根据所需要的样点直径 D选择微喷嘴的内径尺寸,且微喷嘴收敛角2臼 选择30.;根据表1,并结合电压幅值U和驱动频 率对样点直径的影响规律(图5和图6),选择 合适的驱动电压U和驱动频率厂的大小. 大多数接触式和非接触式点样设备制备的样 点直径为75,300tam,为中低密度微阵列.本文 将验证用微流体脉冲点样技术制备样点直径约为 100m的中等密度微阵列的可行性.实验路线 如下:
3.3.1确定微喷嘴内径
由图4(微喷嘴内径对样点直径的影响)可 知,在不同的电压幅值下,要产生直径D为i00 m的样点时,微喷嘴内径d可选为30,60m, 本文选择=:=5Optm.
3.3.2设置驱动频率厂
根据南京理工大学微系统研究室积累的微流
体脉冲驱动,控制实验经验,将驱动电压的频率设 置为较低时有利于观察实验效果,为此将频率设 为2Hz.由图6(驱动频率对样点直径影响曲线) 可知:当微喷嘴内径d===15m时,驱动频率-厂:2 Hz对应的样点直径D一25/am;且由图4可知: D随着d的增大而增大.因此以(1)确定的微喷 嘴内径d一50/,m进行点样实验,可通过调节电 压幅值L,得到比25itzm更大的样点直径100 "m.
3.3.3设置电压幅值U
由图5(电压幅值对样点直径影响曲线)可 第6期耿鑫,等:微流体数字化技术制备基因芯片微阵列 知,样点直径D随u的增大而增大.在点样液 黏度,微喷嘴内径,驱动频率确定的情况下,改变 电压幅值u的大小,使其在0,8OV变化,进行 点样实验.在样点直径D接近100/xm时,减小 【,的步长,直至达到所需的误差范围,确定出u. 经多次重复点样实验,确定出U一65V. 实验条件:一50m,20=30.,L,一65V,_厂一 2Hz,样点间距s设为160m.
图7所示为在上述实验条件下制备出的3× SSC柠檬酸盐缓冲液微阵列.
图73×SSC柠檬酸盐缓冲液微阵列
Fig.73×SSCcitratebuffermicroarray
每个样点的直径大小如表2所示,样点平均 直径为102.2m,样点间距为(160-10)m,微 阵列密度约4000spot/cm.,且样点均一,圆整. 表2样点直径测量结果
Tab.2Resultofdropletdiametermeasurement(Unit:"m)
12
D
D
1O2.2um
(160?10)"m
4000spot/cm
3.4结果讨论
表3所示为微流体脉冲驱动与容积式压电驱 动制备基因芯片微阵列比较,容积式压电驱动以 Gesim公司的Nano—PlotterTM2.1/gE.为例. 表3微流体脉冲驱动与容积式压电驱动制备基因芯片微阵列比较
Tab.3Comparisonofgenechipmicroarraysprepared
bymicrofluidpulsedrivingandvolumepiezoelectricdriving
4结论
通过4种系统参量(收敛角2,微喷嘴内径 d,电压幅值和驱动频率f)对样点直径D和 脉冲点样稳定性影响的实验研究,得出了各系统 参量对样点直径D和脉冲点样稳定性的影响规 律,为基因芯片微阵列制备系统参量的合理选择 556758446596
0000
685729686696
000
M
435685537655
000
123456789C1
135O光学精密工程第19卷
提供了依据.以系统参量对样点直径和脉冲点样 稳定性的影响规律为依据制定实验路线,制备出
了样点平均直径为102.2肚ITI,微阵列密度约为
4000point/cm的基因芯片微阵列.与常用的
容积式压电驱动相比,基于微流体数字化技术的
基因芯片微阵列制备系统具有如下优点:微喷嘴
以普通硼硅酸盐玻璃为原材料经玻璃热成形加工
而成,化学性能稳定,对点样液摩擦力小,制作工
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理地选择系统参量,实现对液体微喷射的精确控
制,从而获得良好的微阵列制备效果.本文的研
究结果为发展微流体数字化技术制备高密度基因
芯片的新技术打下了实验和方法的基础.
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作者简介
耿鑫(1982一)男,江苏沛县人,博士
研究生,2005年于南京理工大学获得
学士学位,主要从事微流体数字化技术
及其应用的研究.E—mail:suyu—xinxin
@sohu.corn
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侯丽雅(1954,),女,江西余于人,教
授,1984年于北京航空航天大学获硕
士学位,1995年于(日)法政大学获博
士学位,主要从事微系统与纳米系统,
微流体数字化技术,生物制造工程等方
面的研究.Email:hou—liya@hotmail. 1352光学精密工程第19卷
—__,j^,1nq,#日}c?『^虹
I.一穗黜明I授,1982年于中国纺织大学获硕士学
r1灞l7乙工'…,JJu八十rllJ十圆露翟#一蔫静位,主要从事微流体数字化技术及其
应.{
微流体数字化技术,医学工程等方面的
_群
用的研窖F—manpmn1q只i1R_IllL褥%
誓研究.E—mail:zhangweiyi—email@163.
嘉
《.
学士学位,主要从事做流体数字化技术
瞄?苴田木不由一休军缔笔青而的研
_一究.
(本栏目编辑:曹金
?下期预告
单轴柔性铰链柔度系数试验装置的设计
李海星,丁亚林,惠守文,田海英,许永森
(1.中国科学院长春光学精密机械与物理研究所,吉林长春130033; 2.中国科学院研究生院,北京100039)
在空问光学遥感器大尺寸反射镜柔性支撑结构的试验研究过程中,为了获得第一手的柔度特性试
验数据,设计了一种结构紧蹙的单轴柔性铰链试验装置.采用该装置,可以在材料拉伸试验机上同时实
现端部弯曲和纯弯曲试验功能.该装置利用杠杆原理实现了纯弯曲加载,并采用由刚性辊子组成的约
束通道对纯弯曲组件进行约束,大大降低了摩擦对载荷传递的影响.试验过程模拟分析结果表明:"I"
型下推杆引起的横向偏载是影响纯弯曲试验的主要因素,最大横向偏载可控制在4.783N.试验结果
和有限元分析结果及理论计算值取得了很好的一致性,与有限元分析结果相比,试验结果和理论计算值
都稍偏小,试验值最大偏差为3.87.该装置为光学反射镜柔性支撑的试验研究提供了一种经济实惠
的解决
方案
气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载
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