黑龙江暴马丁香叶中槲皮素的提取及测定

黑龙江暴马丁香叶中槲皮素的提取及测定 黑龙江暴马丁香叶中槲皮素的提取及测定 ? 258? 中国中医药咨讯 JoumalofChinarraditionalChineseMedicineInformation 2010年7月上 July2010 第2卷第l3期 V01.2No.13 黑龙江暴马丁香叶中槲皮素的提取及测定 韩瑞亭孟大利 (黑龙江农业经济职业学院,黑龙江牡丹江,157041;沈阳药科大学中药学院,辽宁沈阳,110016) 【摘要】建立暴马丁香叶中槲皮索含量测定的测定 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 .肝硬化腹胀患者的护理. 【关键词】高效液相色谱法;暴马丁香;黄酮类化合物;槲皮素 暴马丁香为巧玲花系植物,属于温性树种,为多年生灌 木或小乔木,生长环境多样,适应性强,观赏性状独特,迄今 已有近千年的栽培历史.在我国主要分布于吉林,辽宁,黑 龙江,河北,陕西,甘肃,宁夏等地,其中东北三省山区和半 山区,例如小兴安岭,长白山一带最多.自我国东北至西南 主要分布在东北,华北,西北及长江流域【1】. 各省均有分布, 暴马丁香是传统的中药材,具有较强的生物活性.但针 对暴马丁香中黄酮类化合物的研究内容较少,为了深入挖 掘其药用价值,本研究在文献调研的基础上,针对暴马丁香 中槲皮素的提取分离及含量测定进行了如下研究. 1仪器与试剂 1.1Agilent1100型高效液相色谱仪,配有AgilentEclipse XDBC18(4.6mm×250mm,5um)色谱柱,uv检测器和 Chemstation化学工作站,Agilent,奥毫斯SE602F电子天平, CJS型高效中药粉碎机,KO一250B型超声波清洗器, SXT一02索氏提取器,CSC一10台式离心机,6210型真空干 燥箱,WHC一30电热恒温水浴锅. 1.2暴马丁香叶,采自黑龙江省牡丹江市,槲皮素标准品, 中国药品生物制品检定所. 1-3甲醇(色谱醇),北京化工厂,盐酸(分析纯),哈尔滨化 学试剂厂,无水乙醇(分析醇)哈尔滨化学试剂厂,磷酸(分 析纯),哈尔滨化学试剂厂;蒸馏水. 2提取 2.1粉末样品的制备 暴马丁香叶在8-9月采摘,在避光条件下阴干两星 期,然后用中药粉碎机粉碎,过孔径1.0mm筛,用烘箱60~C 烘至恒重,干燥密封保存,备用. 2.2提取 超声提取是在超声波清洗器中完成的C2].准确称取干 燥的丁香叶粉末样品1.OOg,置于lOOml锥形瓶中,在室温 下加入提取剂:30ml乙醇,lOml盐酸(20%),将锥形瓶置于 超声波清洗器中,超声提取40min后,离心倾出上层清液. 再按上述方法提取两次.将三次提取液合并,以甲醇作溶剂 配成4Og/ml的溶液,用0.45In的微孔滤膜过滤即得样 品溶液. 3HPLC丁香叶中槲皮素的分离测定 3.1标准溶液的制备 将槲皮素标准品在105~C的条件下干燥12小时,准确 称取槲皮素标准品0.0500g,以甲醇作溶剂,配成浓度为 50g/ml的标准溶液,备用. 3.2样品测定 高效液相色谱条件:采用反相键合的C18色谱柱,柱 温:25oC,流动相:V(甲醇):V(o.4%盐酸)=65:35,流速: 1.0ml/min,检测波长:371nm,进样体积10l. 4结果与讨论 4.1检测波长的选择 紫外光谱:用甲醇为参比,lcm石英比色皿对槲皮素对 照品溶液在200-450nm范围内进行波长扫描,得到榭皮素 的紫外最大吸收峰为371.3nm,255.2nm和228.6nm(如图 1),结果与文献报道[3】相符.结合文献值,故选择测定波长 为371.3nm. 夺?幸?夺?牵?寺?弓?夺?辛?争?夺??争?幸?夺?夺?夺?寺??争?毒?牵?夺?夺?夺?夺? 夺?夺?夺?夺?夺?夺?孛?夺?牵?夺?牵?t?夺?辛??{??争?夺?夺?专?夺?夺? 共有成分,经与对照品对照,e为齐墩果酸,另外斑点i,i,k 为白花蛇舌草与伞房花耳草不同的化学成分.据有关文献 报道【3】,两者是同属植物,化学成分预测结果均含有生物 碱,酚类,皂甙等相同成分.而白花蛇舌草主含蒽醌类,环烯 醚萜类,甾醇类等;伞房花耳草含车前草苷,鸡矢藤次苷,齐 墩果酸,B一谷甾醇和天门冬氨酸等10多种氨基酸. 白花蛇舌草应用广泛,疗效确切,是一种很有发展前 景的中药,而同科同属植物伞房花耳草与其形态相似,化学 成分相近,大量混用于临床应用,但其有关该品种的鉴别文 章大多以传统的性状和显微进行鉴别,这对具有完整性状 特征的药材有一定的准确性.但伞房花耳草干燥后或切制 后的外观形态特征与白花蛇舌草极为相似,因此,常给鉴别 工作带来困难与失误.因此,本文通过TLC方法检识药材 化学成分的方法,补充其鉴别手段,具有一定的可操作性, 准确性和科学性,可作为一种有效的鉴别方法.综上述研究 证明二者性状及化学成分相似,但也存在区别,伞房花耳草 能否替代白花蛇舌草临床应用尚有待药效学的比较研究. 参考文献 【1]陈雅,杨坤星.白花蛇舌草的化学成分及临床应用[J1.中国药 业,2008,17(5):62—63. [2】陆善丹.白花蛇舌草销势缘何看好[J】.全国药材信息,2008,5 (15):7-8. 【3]孔增科,胡双丰,章新建.白花蛇舌草与水线草及纤花耳草的 鉴别与合理应用[J】_河北中医,2007,29(11):1035—1036. 作者简介:李娟,女.中药师.研究方向:中药材质量控制 2010年7月上第2卷第l3期 July2010VN.2No.13 中国中医药咨讯 JoumMofChinaT珀ditionMChineseMedicineInformation?259? 图1槲皮素的紫外可见光谱图 4.2流动相选择 4.2.1流动相的组成 分别选用甲醇一水,甲醇一盐酸,甲醇 根据文献报导, 一 水一盐酸作为流动相,实验 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,使用甲醇一盐酸为流动 相时对照品得到较好分离. 4.2.2流动相中各组分的比例 为了进一步确定流动相的组成比例,通过实验,确定了 流动相的组成比例与槲皮素对照品容量因子的关系图(如 图2),从中可以看出,流动相体积比(甲醇:盐酸)在65:35至 40:60的区间内,槲皮素对照品皆能基线分离,k'值范围谱 峰基本符合l<k'<20的范围,实验过程中可根据所测定样 品的实际情况选择从65:35至40:60不同流动相. 图2流动相组成比例与榭皮素对照品容量因子的关系 4.2.3流动相中盐酸浓度的选择 . 在实验过程中,分别对比了0.1%,0.2%,0.4%和0.5% 的盐酸浓度对分离上的影响,结果在流动相比例为v(甲醇): v(0.5%盐酸)=65:35的条件下,盐酸的浓度对出峰的峰形影 响无明显差别,但0.4%的盐酸对样品的分离效果最好结 果.所以确定流动相中盐酸浓度为0.4%. 4.3柱温和流速的选择 在柱温方面,我们分别考察了室温(25cC),35~C和 45~C这三个柱温条件,结果样品的分离效果及色谱的出峰 时间和峰型无太大的差异.为了实验方便,又考虑到温度的 升高对设备在压力方面的影响,在柱温方面我们选择了室 温25%.参照大多数文献,流动相和样品的流速采用的 l10mFmin. 4.4线性范围,检出限和精密度 4.4.1线性范围,检出限 在一定浓度范围内槲皮素浓度与其峰面积成正比,色 谱条件:反相键合的C18色谱柱,柱温:25oC,流动相:v(rp 醇):vf0.4%盐酸)=65:35,流速:1.0mFmin,检测波长:371nm, 采用峰面积对浓度作图,得到标准曲线.精确配制不同浓度 的榭皮素标准品溶液,以峰面积为纵坐标),以质量浓度 (g/mL)为横坐标()()进行线性回归,得到线性方程为:y一1. 8609+31.25472x,R=0.99964,线性范围为: 1g/mL-50g/mL,检出限为:0.5g/ml. 4.4.2精密度' 在最佳实验条件下,考查了进样精密度.取浓度为 25g/ml的槲皮素标准溶液分别重复测定5次(见表1),计 算槲皮素保留时间和峰面积的相对标准偏差(n=5)分别为 0.185%,和0.58%. 5样品分析及回收率测定 对丁香叶中的槲皮素含量进行了测定,并测定了槲皮 素的加样回收率,所得结果见表2.其中RSD是平行制备5 份样品,然后测定样品中槲皮素含量所得的结果. 表2丁香叶中槲皮素含量测定结果及加样回收率试验结果 6结论 在进行暴马丁香叶中黄酮类化合物提取过程中,用超 声波辅助提取方法,以高效液相色谱为检测手段,以槲皮素 的提取率为考察参数,用反相高效液相色谱法测定了暴马 丁香叶中榭皮素的含量.详细考察了色谱分离检测参数,包 括检测波长,流动相的组成及比例,柱温和流速等对槲皮素 分离测定的影响.得出了最佳的色谱分离条件:反相键合的 C18色谱柱,柱温:25~C,流动相:V(甲醇):V(0.4%盐酸)_65: 35,流速:1.0ingrain,检测波长:37Into(100),参比波长:550nm (150).并对样品分析的回收率和精密度进行了测定,得到线 性方程为:v一1.8609+31.25472x,R=0.99964,线性范围为: 1g/mL一50s/mL,检出限为:0.5g/l1ll.建立了槲皮素含 量测定的反相高效液相色谱测定方法,该法操作重现性良 好,准确度较高,能应用于暴马丁香叶系列产品的质量控 制. 参考文献 [1】吉林省中医中药研究所编.长白山植物药志【M】.长春:吉林人民 出版社1982:896—899. [2]张晓东,潘国凤,吕圭源.超声提取在中药化学成分提取中的应 用研究进展[J】.时珍国医国药.2004,15(12):861—862. 【3】范维刚.相高效液相色谱法测定罗布麻叶中槲皮素和山萘酚[J]. 实验室.2008,27(8):53—54 表1槲皮素含量测定进样精密度试验结果