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高渗应激下ERK信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中的作用(可编辑)

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高渗应激下ERK信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中的作用(可编辑)高渗应激下ERK信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中的作用(可编辑) 高渗应激下ERK信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中的作 用 高渗应激下信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中 的作用 摘要 目的:观察高渗透压对体外培养的兔髓核细胞凋亡的影响及细胞外信号调节 激酶 ?/信号转导通路在此过程中的作用。 方法:用不同的渗透压梯度以及/特异性抑制剂 分不同 作用时间处理髓核细胞;流式细胞仪检测髓核细胞在不同处理组的凋亡情况, 蛋白 质免疫印迹技术检测各组/和/蛋白的表达情况;免疫荧光标记技术 检测/蛋白在髓核细胞内的分布...

高渗应激下ERK信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中的作用(可编辑)
高渗应激下ERK信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中的作用(可编辑) 高渗应激下ERK信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中的作 用 高渗应激下信号转导通路在兔髓核细胞凋亡中 的作用 摘要 目的:观察高渗透压对体外培养的兔髓核细胞凋亡的影响及细胞外信号调节 激酶 ?/信号转导通路在此过程中的作用。 方法:用不同的渗透压梯度以及/特异性抑制剂 分不同 作用时间处理髓核细胞;流式细胞仪检测髓核细胞在不同处理组的凋亡情况, 蛋白 质免疫印迹技术检测各组/和/蛋白的表达情况;免疫荧光标记技术 检测/蛋白在髓核细胞内的分布情况。 结果:高渗透压培养基中兔髓核细胞凋亡显著增加,与对照组相比差 异有统计学意义.,并呈时间依赖性;预处理组与相应时间段同 渗透压组相比,细胞凋亡进一步显著地增加.;组及其抑制组在 各时间段细胞凋亡均不明显;高渗透压显著激活./的表达,并且 在组表达水平最高,与对照组比较差异显著.,而几乎阻断 ./的表达;免疫荧光标记检测到./在高渗组的细胞胞浆和 胞核中均有分布。 结论:体外培养的兔髓核细胞能适应轻度增加的渗透压环境,而高渗透 压应激下可显著诱导其凋亡,特异性抑制高渗透压应激诱导的 短暂的/激活并进一步明显诱导兔髓核细胞的凋亡,高渗透压应激诱导激活 的 /信号转导通路具有抑制兔髓核细胞凋亡的作用。 硕士研究生:刘瑞龙骨科学 指导老师:王德春教授 关键词。/:/;高渗透压;细胞凋亡: / ? . : 、柝 . / ,?/, / ? . : , . 谢 . 、杭 州.. . / ? 、? .. . . /./ ?. : ? /, . :? : /;; 目录 目录 弓言? 第章实验材料和方法?一 .材料“ ..实验动物??“ ..实验试剂??“ ..实验仪器 .实验方法? ..兔髓核细胞分离和培养..调整培养液渗透压?” ..实验分组..细胞活性检测? ..流式细胞仪检测细胞凋亡..蛋白印迹 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ..免疫荧光标记 .统计学分析 第章实验结果.兔髓核细胞培养?. . 检测髓核细胞活性“ .流式细胞仪检测细胞凋亡 .高渗应激和对/蛋白表达的影响 .高渗应激下/在兔髓核细胞内的分布第章讨论 结论参考文献 综丕??.. 综述参考文献. 攻读学位期间的研究成果.. 青岛大学硕士学位论文 致谢??.. 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明 引言 引言 椎问盘髓核细胞生活在一种复杂的物理化学环境中,在日常坐位时椎间盘内压 力比直立站位时小,站立位肌肉的活动增加了椎间盘内压力。动态的机械压力在 体内调节椎间盘细胞结构和细胞外基质的合成中起重要的作用,当频率较低或者压 力负荷较高时蛋白聚糖的含量、细胞外基质的表达以及细胞死亡均增加乜。蛋白聚 糖分子侧链含有的大量带电荷的糖胺聚糖提高了椎间盘内的渗透压,产生的 渗透压 有助于组织对压力负荷的抵抗,也就是说髓核细胞适应压力负荷是通过提高椎间盘 渗透压实现的,而且是无压力负荷时椎间盘组织再吸收水分的主要 机制 综治信访维稳工作机制反恐怖工作机制企业员工晋升机制公司员工晋升机制员工晋升机制图 。离子渗透 压力和离子系数随着压缩力而增加,很可能是组织中蛋白聚糖浓度增加的原因四。 在昼夜循环的过程中椎间盘丢失和重新获得约自身%的液体,液体的变化引起细 胞外基质大分子和离子浓度的变化,进而引起细胞外渗透压的改变,导致正常髓核 的渗透压在?之间变化晦。可见椎间盘内的渗透压是明显地高于血浆渗 透压血浆渗透压左右。 椎间盘细胞对高渗透压的应答最显著的是细胞体积减小?。共聚焦显微镜观察 体外培养的髓核细胞,发现培养基中髓核细胞体积最大,随着渗透压的增 加细胞逐渐变小,当加入调整培养基渗透压为时,很多细胞体积减小, 细胞核内可见染色质凝结,并观察到一些细胞正在凋亡,因为可以观察到细胞浓缩, 核碎片,浓缩的染色质凋亡小体以及细胞内细胞器被破坏口。 体外实验还发现高渗透压能激活髓核细胞中的细胞外信号调节激酶,信号转导通路陋,高渗透压激 ? 活的通路涉及到神经元细胞的存活嘲,而且在研究高渗透压下细胞死亡的形式 和凋亡信号的改变时发现的高渗透压增加/的磷酸化水平引。另外, 激活的通路参与许多细胞的活动,如在结肠癌发展的过程中调节癌细胞凋亡抵 抗、增殖、血管再生及转移口?;而在肺癌细胞中通路与尼古丁烟碱乙酰胆碱受 体相关联,调节细胞的增殖、血管生成及细胞的抗凋亡。 已知的级联激活过程为:激活,激活,使活化而发挥 其催化底物磷酸化的作用,而且是信号转导通路特异的药物性抑制剂, 抑制或者激酶对的激活作用,但不抑制已激活的的活性,也 不抑制或者激酶对其它底物的激活作用羽。由以上看出,髓核细胞生活在 一种相对高渗透压的环境中,高渗应激可以诱导髓核细胞的凋亡,并且高渗应激激 活信号转导通路,通路在细胞的增殖、凋亡过程中起作用。至今,信号青岛大学硕士学位论文 转导通路在高渗应激下髓核细胞凋亡过程中的作用尚不清楚。本文利用体外培养的 兔髓核细胞对此进行研究。 第一章实验材料和方法 第一章实验材料和方法 . 材料 ..实验动物 周龄新西兰大白兔只,体重.. 。青岛市药物科学研究所 ..实验试剂 型胶原酶美国 美国 膜 美国 /’一:美国 胰蛋白酶美国 胎牛血清 杭州四季青生物工程有限公司 青一链霉素 美国 广州赛业生物科技有限公司 /特异性阻断剂美国 ?凋亡检测试剂盒 上海碧云天生物技术有限公司 蛋白浓度测定试剂盒 上海碧云天生物技术有限公司 预染蛋白质分子量标准 上海碧云天生物技术有限公司 超敏化学发光试剂盒 上海碧云天生物技术有限公司 多克隆抗体美国 多克隆抗体 北京博奥森生物科技有限公司 磷酸化/多克隆抗体 美国 辣根酶标记山羊抗兔 北京中杉金桥生物技术有限公司 标记山羊抗兔 碧云天生物技术研究所 胶片柯达 昆明市宏邦贸易有限公司 电泳液、转膜液、显影液及定影液等为青岛大学医学院附属医院中心实验室 提供 ..实验仪器 倒置相差显微镜 日本 二氧化碳细胞培养箱 型德国公司 青岛大学硕士学位论文 冰点渗透压计 天津斯格瑞科技有限公司 精密值计 上海精密科学仪器有限公司 全自动高压灭菌器 ? 公司美国 各型号移液器 法国公司 低温高速离心机 德国公司 振荡仪型 公司 超净工作台 济南净化设备厂 电热恒温水浴箱 上海医疗器械七厂 超纯水设备 ,美国 恒温磁力搅拌器 中国金坛市科技仪器有限公司 精密电子天平 上海天平仪器厂 一次性滤器 美国 流式细胞仪美国 公司 倒置荧光显微镜 德国莱茨公司 .实验方法 ..兔髓核细胞分离和培养 取周龄新西兰大白兔,耳缘静脉注射空气处死,无菌条件下快速取出脊 柱胸腰段,尖刀切开纤维环,将胶冻状髓核组织用无菌小匙轻轻刮出,并避免 混入 纤维环组织,将髓核组织放入无菌青霉素小瓶,含青霉素培养液冲洗遍后,用 无 菌眼科剪将组织剪成大小× 的碎块,转入.%型胶原酶消化液中 ?消化约,期间每摇匀一次,待组织块大部分消失,消化液混浊后加入 过量培养液,目不锈钢网过滤,转入离心管/,离心,弃上清, 加入适量培养液重悬后再离心,重复遍。加适量培养液/%/ 青霉素、链霉素,.,重悬制成细胞悬液,计数板计数,以×/接种于 培养瓶,每瓶。然后置于?、饱和湿度、体积分数%的培养箱 中。于倒置显微镜下观察细胞生长状态,接种后天首次换液,以后每天换 液,细胞融合达%一%时,.%胰蛋白酶消化传代,细胞传至第代融合达%% 时进行后续试验。 ..调整培养液渗透压 在培养液中加入无菌饱和溶液,通过渗透压计调整渗透压分别为、 第一章实验材料和方法 、,并调整值为.?.,放入?冰箱备用。 ..实验分组 实验随机分为: ?对照组:组和抑制组,作用时间为。 窑组和抑制组,每组分别设、、组。 ?组和抑制组,每组也分别设、、组。 抑制组的建立如下:吸净培养瓶中培养液,? 溶液冲洗遍后,加入适 量浓度为 的溶液,置于细胞培养箱中处理,吸净溶液, 。 溶液冲洗遍后,分别加入不同渗透压的培养液。 ..细胞活性检测 取各实验组指数生长期细胞,消化悬浮后以×/,接种于孔培养板,每组 孔,每孔. ,置?、%:培养箱中培养 。弃去原培养液,加入不同 渗透压培养液. ,相同条件分别培养、、。再次弃去培养液,每孔分 别加入无血清等渗培养液. 及 ,相同条件培养 后移除培养液, 每孔加入二甲基亚砜 ,避光振荡 ,于酶标仪 波长下 测定吸光度值。细胞存活率凡?处理组肌?对照组 %。 ..流式细胞仪检测细胞凋亡 各组细胞处理后,参照《凋亡检测试剂说明书》,吸出培养液至离心管, 洗涤贴壁细胞遍,加入.%胰蛋白酶消化至细胞轻轻吹打下来时,吸掉消化 酶,加入收集到离心管中的培养液,吹打收集各组细胞并再次转移至同一离 心管, /离心,弃上清,加入适量轻轻重悬细胞并计数,调整细胞密度 为 /,取至检测专用管中,/离心,弃上清,加入?结合液轻轻重悬细胞,加入 , 轻轻混匀,室温??避光孵育后,/离心,弃上清,加入 ?结合液轻轻重悬细胞,加入 碘化丙啶,轻轻混匀,冰浴避光 放置,然后通过流式细胞仪检测。用象限图表分析活细胞、坏死细胞、早 期凋亡细胞和晚期凋亡细胞百分比。 青岛大学硕士学位论文 ..蛋白印迹分析 各组细胞处理完成后,.%胰蛋白酶消化收集细胞至离心管,/, 离心,弃上清,预冷冲洗遍,转入.管中,称取细胞重量, 按照:加入强性裂解液 ,按照:加入蛋白酶抑制剂 , 充分震动混匀,冰上裂解,震动器上震动,再冰上裂解,低温离心 机?、/,离心,小心吸取部分上清至另一管中,法调整 各组总蛋白的浓度一致,按照体积:加入,混匀,?变性后,置 于一?冰箱备用。 蛋白质印迹法检测/、?/表达情况,根据目的蛋白的分子量选取%的分离胶, 根据预实验结果设置孔电泳凝胶,中间孔依次加入 、、 稀释、 、 一、 抑制组一、 抑制组、抑 制组一,两端孔分别加入 稀释,实验参照《分子生物学实验指南》。一 抗分别为:? :、? :、?/:,二抗为? ? :,底片显影后 软件分析条带灰度值。 ..免疫荧光标记 将细胞以浓度×接种于酸化和无菌处理的载玻片上,培养至细胞融合达到 %一%时,吸掉原培养液,加入渗透压为的培养液,培养,吸净高渗 透压培养液,%多聚甲醛溶液固定,漂洗,.%?穿孔 ,漂洗遍,/遍,%封闭,加入%稀释的一抗:, 置于?杂交,漂洗遍,/遍,加入%稀释的二抗 ? :,置于?杂交,漂洗遍,/遍, /浓度的染色,丙三醇溶液封片,避光于共聚焦显微镜下观察结果 并合成图像。 .统计学分析 收集本实验所测数据?,采用 .软件包处理数据, 采用检验,.时差异具有统计学意义。 第二章实验结果 第二章实验结果 头掘三石禾 弟一旱 .兔髓核细胞培养 分离的兔髓核细胞在?天开始贴壁,贴壁时呈梭形、多角不规则形,形态与 软骨细胞相似,经过周左右,形成细胞团,向四周蔓延,完全融合时呈蜂窝状, 胞质丰富,核仁大而轮廓清晰,折光行强,可见分裂相,第代细胞体积比第代 明显增大,传代周期也逐渐增长。高渗透压处理的细胞体积明显变小,变为细 长或 者多细角状,而且观察到很多针状或尾状的胞质突出,胞质内核仁消失,细胞 器结 构模糊,高倍镜下可见核碎片并向周边聚集,而且培养液中悬浮细胞明显增 加,细 胞与瓶壁粘附性减低,轻轻吹打可见细胞脱落见图。 图兔髓核细胞的形态 、示渗透压下细胞的形态,放人倍数分别为、×; 、示渗透压下细胞的形态,放人倍数分别为×、×。 青岛大学硕士学位论文 . 检测髓核细胞活性 实验显示,与对照组相比%细胞活力,各时间段实验组及 阻断组细胞活力波动在.?.%~.?.%之间,并无统计学意义; 而、、各实验组细胞活力分别为..%、.?.%、 .?.%,均与对照组有明显统计学意义尸.;相应阻断组细胞活 力分别为..%、.?.%、.?.%,与相应高渗应激蝴明 显的统计学意义尸.。 .流式细胞仪检测细胞凋亡 组、组及相应抑制组各时间段细胞凋亡均不明显包括早期凋 亡和晚期凋亡的细胞,而在组,随作用时间延长,细胞凋亡增加,其中 和组与组和组相比凋亡明显增加.,加入的预处理后,各时间段凋亡的细胞显 著地进一步增加.,而且 渗透压下作用,抑制组和非抑制组细胞晚期凋亡和坏死的细胞均增加 见图.及图.。 弼亡晚 检测 期和坏 误趁 死细胞 弼亡旱 活细胞 期细胞 . 日日日 巯式图各象陬的意义 珊朗留降?? ? ? ? .,.?. ?’。 . 苷‘’ : ?? 爹 日日日 蝴 毪? 第二章实验结果 ? ? ? ? ? ? 中一 .,‘?, ... :....‘? ::乓:. ..:疼 轳 爹: ?? :;雾 :鎏 ‘? ?一’?’ ’;:.::. . 日 . 日日 向 翻约知瑚 翻?喀鼢釉锄石蠢 弱嗍圆眄争似? ? ? 墨 ? ? ? ? ? ? ? ..... 口 ? ??? ? 一 ?? ?一 二 :.?’ ?? :... ‘:‘? ’:’ ?:’.’ ? ? ?? ? ‘’ ?? ???? ‘.‘.: ?’。?. . 。: 誊? 辩. 瓣. :二:..‘: 藩? 圹 瓣: .黧 ?黪 ’:‖’ 雾 . 日日日 . 日日 . 日日日 一 绷 ? ? ? ? ?? . ?.。:: .‘ :?礴.: :墓》:鼍:: .瓣?: ’:;:‘;。‘’: :.:. 日弱嘲 翻眇舛硼锄石 阳翻围?锄一 图.各实验分组细胞凋亡流式结果四象限图 青岛大学硕士学位论文 珥 面翎舶 咖翎渤 ? 耵? 咖锄广 面皿 三 图.各实验分组细胞凋亡流式结果条形图百分比/% .高渗应激和对/蛋白表达的影响 由流式结果看出,组各时间段细胞凋亡与对照组比较显著增加,而且 与相应的抑制组比较差异显著,选择检测组与其抑制组和对照组中 /蛋白的表达情况。作为总蛋白量的内参,渗透压显著增 加/蛋白的表达,而且表达量在组最高,随时间延长表达反而降低,但 是仍然明显高于对照组.,而在其抑制组/蛋白的表达水平在各个 时间段均很低见图.及图.。 第二章实验结果 锄 】一 唧一 油???函?‘簟 ? 髓 .忍 .血??嘲翻??豳翻??嘲??鼷潮??隧?嘲豳?? 图.蛋白质印迹分析显示不同处理组/、/蛋白表达情况 ’ 一 一 一 ? ‘ 一 . ‘ 胁眺青岛大学硕士学位论文 .高渗应激下/在兔髓核细胞内的分布 高渗透压激活细胞内的/,使其磷酸化/,而且 /在胞浆和核内均有分布见图。 图共聚焦显微镜显示高渗应激下腿/在兔髓核细胞内的分布 图示染色显示细胞核; 图示荧光标记显示/在胞浆和胞核均有分布; 图示和的合成图。 第三章讨论 第三章讨论 体外培养的髓核细胞的体积与培养液的渗透压呈负相关引。本文也观察到兔髓 核细胞形态类似的改变,渗透压培养基中细胞体积最大,而在组 中细胞体积减小最明显,在很多细胞可观察到针状或尾状的胞质突出。另外,蛋白 聚糖的合成率与细胞的体积有很好的关联性引。而蛋白聚糖的浓度是调节椎间盘物 理化学环境的一个主要因素,蛋白聚糖通过其结合带负电荷的氨基多糖侧链, 使椎间盘基质带有较多的负电荷,为了达到电荷平衡,在血浆和蛋白聚糖丰富的组 织之间离子以吉布斯一唐南平衡 的方式分布,与血浆 或周围组织液相比,椎间盘内阳离子浓度很高,并且细胞外渗透压几乎均为离子源 性,故结合的电荷密度直接导致离子浓度的变化以及产生的渗透压的改变。另一个 影响椎间盘离子成分的重要因素是水合作用,而水合作用又是随着压力负荷而变化 的,在正常情况下,一个昼夜大约有%%的椎问盘内的液体被挤出或重新吸收, 从而使正常髓核细胞外渗透压在之间变化瞄。而髓核细胞能在这样一 种变化的高渗透压环境中存活,提示髓核细胞具有适应高渗透压的能力,本研究发 现兔髓核细胞在渗透压条件下并无明显的细胞凋亡,也证实了髓核组织内 渗透压相对于血浆渗透压而言是高渗的,而且髓核细胞能适应这种程度的高渗环境。 进一步的研究发现,髓核细胞适应高渗环境与其表达/和等有关, 而且上述表达产物的调控过程均涉及到信号转导通路口儿町引。 另外,在研究小鼠胚胎纤维母细胞抵抗高渗透压诱导的细胞凋亡中还涉及到 ,而且也与的磷酸化相关联引。此外,低氧环境也能抑制髓核细胞的凋亡, 但是需要激活通路一钉。在本研究结果中高渗透压显著增加髓核细 胞的凋亡,而加入 预处理后,细胞凋亡明显进一步增加,并且预 处理组的/几乎被阻断,而且组中/水平很高,这些结果 显示/的激活与高渗透压环境中麓核细胞的抗细胞凋亡之间有密切的联系。本 文结果还显示在高渗透压环境中激活的/是短暂的,高渗处理、 与相比?/水平显著下降,这可能是的激活不仅依赖的活 性,同时还通过依赖的降解钉。 研究已证实,椎间盘细胞在高渗透压的刺激下,髓核细胞外基质,如、型 胶原蛋白,氨基多糖以及细胞骨架蛋白的表达发生强烈变化,而且细胞内的多个基 因表达也发生显著的改变阶捌。结合因子是一种核蛋白,显著增强胰 岛素诱导的一细胞的增殖,而用特异性抑制剂或者用显性缺失的突变株 发现显著地抑制和导致细胞增殖的停滞嘲。本文免疫荧光标记在细胞内的定位 青岛大学硕士学位论文 显示?/在胞浆和胞核中均有分布,提示高渗透压激活的信号转导通路可 能参与髓核细胞内某些基因的表达、细胞外基质的合成及细胞增殖等过程的调控。 细胞凋亡机制在椎间盘组织退变中起关键的作用,活体标本研究发现在纤维环 和髓核中均检测到凋亡的细胞,突出椎问盘明显高于正常的椎间盘嘲。随着椎间盘 老化和退变,椎间盘出现生物学上的改变,包括髓核细形态的改变、密度的增加但 是活性细胞数目减少、衰老的增加、表型的改变以危害正常细胞基质成分的合成 和分解代谢的增加为特征另外,加载在椎间盘上的机械压力导致液体静压力 的改变啪,这些因素均会导致椎问盘内细胞生活的物理化学环境的改变,从而导致 细胞增殖的变化,也是椎间盘退变的一些主要因素。本研究或许能为椎间盘细胞凋 亡与椎间盘退变之间的关系提供一些理论基础。 结论 结论 体外培养的兔髓核细胞能适应轻度增加的渗透压环境,而高渗透压 应激下可显著诱导其凋亡,特异性抑制高渗透压应激诱导的短 暂的/激活并进一步明显诱导兔髓核细胞的凋亡,高渗透压应激诱导激活的 /信号转导通路具有抑制兔髓核细胞凋亡的作用。 青岛大学硕士学位论文 参考文献 . . . . ’ ,:?. 【】.. , . 【】.,:../.嘞盯, 【】. . , : . . , ?【】. : .. .. . ,:?. 【】. . , & :砀 . ,:? 【】. . . , . : 【】. :. . ./ . , :. /们. , , . .【】. ,,:?. .. , , . ?. , 【】. . . , , . 参考文献 : 【】..? . ;?: . . . , , 【】. :?. .., ,【】., ,:...,/ /川. ,:?. . . , . :【】. ,:?. 。 . . , , .: : 】.... .. , . .. 【】. ., : . .? , , , , ?【】. .,. ,:. . , ,. .? 阴. ,:?. . . ., 【】. , :. 青岛大学硕士学位论文 . . , , 【】. . ,: . , , . . 阴. ,: .., , ? 川. :?.. , . , ,:. 【】. .., , . 】. ,:? , , . .曲 【】. .:. 文献综述 文献综述 高渗应激和信号转导通路对细胞凋亡的的作用 信号转导通路 活体内细胞总不断在整合外部应激的信号,这些信号可能导致细胞的死亡或 者 增殖,然而这些信号是受一系列的激酶所调控的,细胞的发育程序和环境介 质共同 引发独特的、演化的激酶,这些激酶转导信号从而调节细胞的增殖、存活、 凋亡及 细胞周期的停滞吲。激酶家族通过细胞膜转导细胞外一系列的应激信号到细 胞核内,是丝氨酸/苏氨酸激酶,根据不同的刺激物,特异地磷酸化丝氨酸和 /或者苏氨酸亚基,磷酸化后对底物进行正性或负性的调节,从而级联激活整 个信号 转导通路,激活的信号通路调节细胞内基因的表达、有丝分裂、游动性、新 陈代谢及程序性死亡即细胞凋亡‘删。传统的家族包含个家族成员:细 胞外信号调节激酶,羧基连接激酶,。而且每个家族成员 各有自己的亚家族成员,其中有和,而且生长刺激物很好地诱导, 的激活作用口’吲。另外已经被克隆出 ,而且,也相继发现, 但是,的生物功能及激活途径仍不清楚?引。具有双重特异性的激 酶和使的苏氨酸和络氨酸亚基磷酸化而激活,并且和 是将和信号转导给和,激活的转移到细胞核内使一系列底 物磷酸化,如的核糖体蛋白激酶,细胞质基质磷脂酶和多种 转录因子,一等?。和可以被多种生长因子激活,如 增加磷酸化的引,调节细胞由静止状态进入细胞分裂周期使细胞增殖,而且 还 调节细胞的分化、肌动蛋白细胞骨架变形及细胞移动,此外还参与应激反应 及 细胞死亡过程‘删。的级联激活反应如下见表。 青岛大学硕士学位论文 表 信号转导通路级联反应示意图,上图列出具有代表性的信号分子 信号转导通路的抑制剂有和,特异性地抑制 和,和作用于不同的亚基,二者是非竞争性抑制剂,而在研 究中应用最多的抑制剂是,其作用机制为抑制或者激酶对 的激活作用,但不抑制已激活的的活性,也不抑制或者激酶对 其它底物的激活作用咖,。 高渗应激与 高渗透压应激简称高渗应激,细胞在体外培养条件下,一般通过添加或者 甘露醇制成高渗培养基,造成细胞外高渗透压环境船删,另外蔗糖溶液也能形成细 胞外高渗透压?。而细胞内高渗透压一般选择能自由通过细胞膜的尿素来形成乜。 高渗应激引起多种细胞的信号转导通路的激活口棚,激活的参与高渗性 调节及细胞容量的调节瞳矧,高渗环境中阻断神经元细胞的死亡啪,参与细胞色素 介导的人角膜上皮细胞的凋亡,进一步的研究发现,高渗透压激活是活文献综述 化了常规和异常的结果汹,在研究鼠的肾小管髓袢升支粗 段细胞时利用或者蔗糖溶液形成细胞外高渗透压时,发现细胞暴露在 高渗环境中会发生细胞容量的减小,即细胞缩水,利用尿素溶液形成细胞内高渗透 压则细胞容量无变化,结果发现增加细胞内渗透压而不改变细胞的容量不会激活 ,而细胞缩水且不伴有细胞内渗透压的改变时会激活,这显示高渗透压激 活是细胞容量减小诱导的口?。正常髓核组织的渗透压在,明显 高于血浆的渗透压左右瞰,髓核细胞适应这种高渗透压环境是通过表 达弹性增强结合蛋白来实现的,而且是通过激活等信号转导通路作 用于和其目标基因上的‘静讲。 与细胞凋亡 至今,很多关于信号通路与肿瘤细胞凋亡关系的研究相继报道,关于激 活信号转导通路抵抗细胞凋亡的研究如下:抑制的激活迅速导致肺癌细 胞的凋亡哳,抗肿瘤药土贝母皂甙通过抑制通路而促进肿瘤细胞 的凋亡啪,下调组织因子从而抑制通路达到抗肿瘤的目的犯引,异麦芽低 聚糖硫酸盐抑制通路而抑制肝细胞癌九,通过抑制通路 而抑制肝细胞性肝癌的发展?,强心药类固醇减弱的磷酸化从而使细胞周期 停 滞,阻止人肝癌细胞的生长,减弱活性而促进乳腺癌细胞的凋亡?, 骨化三醇下调的表达而抑制肝癌细胞株副,冬凌草素下调活性 而诱导表皮样癌细胞的凋亡引,索拉非尼阻断通路而诱导肝细胞性肝癌的 ,具有 凋亡?,食管癌中抑制通路增加癌细胞的凋亡和细胞周期的停滞 。 抵抗细胞凋亡的作用副,结肠癌细胞抵抗凋亡也是通过激活通路 通路也是多种细胞存活所必需的,如乳腺癌细胞通过激活通路而存活, 通路调节相关的凋亡诱导配体诱导的小细胞肺癌的存活和增殖, 通路对白血病抑制因子调节/细胞的存活至关重要咖,此外,衣 原体的抗凋亡也是激活了//信号通路畸?。然而,激活的信号通路也 能促进多种细胞的凋亡‘一。 高渗透压与细胞凋亡 细胞外高渗透压增加多种细胞的凋亡‘删,如软骨细胞、肾集合管细胞、骨髓 间质细胞等。 高渗应激引起多种细胞的凋亡增加,同时高渗应激激活多种细胞内的信号 转导通路,激活的对细胞的凋亡作用在不同的细胞内作用不同,包括促进和抑 青岛大学硕士学位论文 制细胞的凋亡,然而高渗应激激活的信号转导通路对细胞凋亡的影响无相关的 研究报道。关节软骨细胞在高渗应激下凋亡显著增加,同时通路被激活??,而 髓核细胞生活在高渗透压环境中口引,进一步的高渗应激是否会增加髓核细胞的凋亡, 凋亡过程中是否激活通路,促进还是抑制凋亡,至今仍无相关的报道。综述参考文献 参考文献 .. , : . 【】 ,:?. .: , , .. .阴 ,:?. . 【】 .,:?. . , . : .,:?. . . , 【 ..:?. ..【】. , :. ., . 【】. , :. ., . 一. ,,【】.,: . , . : . 【】.,:. . , . ? . 阴 , : . . , , 【】 .,:?. ..,【】 .,:?. . ., ,青岛大学硕士学位论文 一??????????????????????????????????????????????????????一 ,们, :. . . . . , . : 【】【】 . . . ,: . . , , 【】 .,:. 【】...,: ., , . ,: 【】 .. . . ? . . ,: 【】 . . . ,阴. .,:. , . .& , :. 【】., ,. . 【】;:?.. , . , 阴.,: 幽 . . ,. 阴 ,:. 综述参考文献., . , 【】,, :. . , , . 【】 .,:?. . , . 【】 .,:?. .. , , 枷 : 【】 .,:. . , , . 【】. ,:?., . , . ,// 【】 . ,:一. .. .’ .. 【】 . ,: . . 【】. ,,:../ . 【】 . ,:?.. ./, /】 .,:. . , , . 青岛大学硕士学位论文四 . :.. . , , ? /【】 . :. .., , . 【】 :. .. , , . 阴 .:.. . , , / 【】 . :. .. , : 【】 .,?:. .. , 【】.,:?.. . , , .【】 ,:. . .“, , // ., :?. 【】 .. ,厄 , ,/强/【】.,:?.. . ,/ ., 阴 综述参考文献 :.., . 明 .,:?. . , , .: 一 【】.. ,:. , , . ,, ? .【】 , :?... , ,/ 【】 .,:?. . .,一/仃 . ? /阴 :?. . , , . . . // 【】 ,: . ., . 叨 ,:?. ./. , , . , 【】 . : .. 四 .,?:?. .? , , .川.,:?. .. ? , , 青岛大学硕士学位论文 四 ,. .. . , , / ,【】 . . : ., , . :、加.;:?. 【】。 .互髟 叨. , :?.. , , . ? 【】 .,: .. .? , , .? . 阴.,:攻读学位期间研究成果 攻读学位期间的研究成果 刘瑞龙,薛少青,周传利,王德春等.高渗应激下信号转导通路在兔髓核细胞 凋亡中的作用.中国矫形外科杂志,:?.致谢 致谢 本论文是在导师王德春教授的指导下完成的,在实验 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 及实验过程中遇到 的问 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 王德春老师都提出了宝贵的意见和见解,并不辞辛苦的讲解才使得我的实验顺利 的进行。从实验的设计选题到资料的搜集直至最后实验结束的整个过程中,花费了 王老师很多宝贵时间和精力,在此向王德春导师表示衷心地感谢导师严谨的治学、 认真负责的态度,开拓进取的精神和高度的责任心都将使我受益终生导师渊博的 专业知识,精益求精的工作作风,诲人不倦的高尚师德,严以律己、宽以待人的崇 高风范,朴实无华、平易近人的人格魅力对我影响深远。本论文从选题到完成,每 一步都是在王德春老师的指导下和反复实践完成的,倾注了恩师大量的心血,在此, 谨向王德春老师表示崇高的敬意和衷心的感谢 衷心感谢青岛大学医学院附属医院给予我这次学习成长的机会,衷心感谢青岛 大学医学院附属医院中心实验室的各位老师
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