【doc】酶免疫法检查淋球菌的实验研究
酶免疫法检查淋球菌的实验研究
上海免疰学杂志1990年第10巷第4期 酶免疫法检查淋球菌的实验研究
成都军区总医院(成都610083)廖宗志黄明金" 近年来,我国淋病患者有增多的趋势 "3
.为寻求一种敏感,特异,简单,快速的检 查
方法
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,本工作自制成鼠抗淋球菌(G0)抗 体,建立了淋球苗一酶免疫法检查(GO- EIA).并用以检查临床上不同类型的感染 者和部分健康体检者,且对本法韵灵敏性和 特异性,以及实验中的一些影响因素等作了 探讨,观报道如下.
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
和方法
一
,材料:
(一)GO来源:自淋病患者尿道分泌物 及阴遭分泌物中培养分离,并经革兰氏染色, 生化鉴定确证0.取棍舍菌株的培养物,用 细菌保存液稀释成适当浓度,于52.d水浴中 灭活2O分钟后备用.
(二)G0一Ab的制备,用上述Ga混悬液 和不完全佐剂等量混合碾成乳剂后,给小鼠 腹腔注射,每只0.1ml(GC10'/m1),每周一 次,连续3周后试血.用凝集法铡定效侨. 效价不理想时,再加强免疫1,2次.最后从 眼动脉中放血.抗体经用卡他球菌等抗原吸
收后,用免疫电泳检测呈单一融台线时即为 台格,再加适量中性甘油保存.
(三)实验对象:有泌屎生殖系局部感 染者78例,外伤性感染5倒,上呼吸道感染 32倒,肠炎23例,健康体检者18例,共156 侧,均按常规要求分别采取尿道分泌物,阴道 分泌物及瘸灶区分泌物送检.
二,方法:取被检者分泌物涂片,自然 固定,如G0一Ab覆盖,置湿盒内37.a温箱温 育3O分钟,用0.01mol/LpV[7.4TrJu一 日al缓冲蒗冲洗,冷风欧干;加入适量稀释 柏酶标羊抗鼠Iga抗体(上海生物制品所产 ?235?
品),混匀,同法温育3O分钟和冲洗,吹千}加 入新鲜配翩的3.3,-二氨胺基联苯胺盐酸盐 底物,再次同法温育,冲洗,吹干后于高倍镜 或油镜下观察.凡有呈现我黄色或棒黑色的 豆状或颗粒状小体者即可判断为阳性.试验 时,应有阳性祁阴性双对照.
结果
本实验共检查尿道分泌物,阴遭分泌物, 晒拭予及其它局部感染的脓性分泌物,以及 正常人的阴遭涂片156倒.其中有女性119 例,男性37倒.年龄最大55岁,最小17岁, 均葡时取样作革兰氏染色及EIA检查. 结果
表
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明,临床诊断为淋病的52倒患 者,其分泌物中,查觅有分布于细胞内外的革 兰氏阴性双球菌49倒,阳性率为94.2,用 EIA试验的52例中全部呈现阳性反应,用
性率达100.霉菌性阴道炎(9倒9,滴虫性 阴道炎(17例)革兰氏染色和EIA均阴性, 在上呼吸道感染的32倒中,见有革兰氏阴性 盛者14倒,阳性率为43}而EIA试验,无 一
倒阳性.同时,在l8例正常人的两种检查 中,亦都全部为阴性.
讨论
本组被检的52倒淋病患者均为阳性,而 其它病例的EIA检查,垒部为阴性.在检 出为革兰氏阴性菌的标本中,再经分离培养 后鉴定,确认系奈瑟_氏卡他球菌.多数病侧 在行革兰氏染色和EIA检查的同时,还散 了GC的培养分离}生化鉴定.在EIA检 '临床实验科
?妇产科
?236?
查的52例阳性标奉中经分离培养全部生长 出Ga.说明培养与EIA检查,二者都能获 得满意躬培果.但Ga的培养需要拈小时后 才能完成'珏赐EIA法最长不过2小时}试 验省时,特异,出率高.因此,我们认为,应 用EIA检查CO较革兰氏染色法拉查及细 菌培养,诊断游.更准确,及时.
本法的关键是制备出纯发较高的特异性 GO-Ab.我们选用了从淋病患者标本中分 离得到的三株典型GO菌株,经Ga专用培 养基传代,于36.D含10的00环境下培
养48小时,用细菌保存液稀释计数,加入佐 剂制成的乳剂,按前法免疫小鼠获得的GO— Ab,凝集效价均在1:80以上.抗体经用葡萄 球菌,卡他球菌等抗原吸收后,均无交叉反 应.有人(Wongetal1977)报道过,用福
尔马林处理整个细菌作为实验用抗原,静脉 注射该抗原所制备的鼠免疫血清作为抗体, 发现Ga各菌株闻免疫学差异性不受Ga菌 落类型泡暑辜响I'].我们选用三株混台菌悬 渣免疫了小鼠,拟想得到能够针对多种抗原 结构的鼠抗Ga的特异抗体,实验结果证实 了我们的预测.
鉴于被检标奉一般混有不同类型的污染 菌瑟共生菌,其中最常见的有葡萄球菌,链球 菌,大肠杆菌,变形杆菌,枯草杆菌和霉菌,以 及与Ga相似的其他奈瑟氏菌,这在涂片染 色中是难以鉴别的上述杂菌经我们培养鉴 定后,再与GG混台试验,仅有GO在GO- Ab—EIA中呈现阳性反应.说明GO—EIA 检查与其它菌株无交叉反应.
(本文得到或都市第三人民医院检验科钍时技及四JlI
省皮肤病研究所{生病研究室周启贵两位老师的大力支持,
并提供了部分实验标本,特此感澍)
参考文献
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(1989年l1月z7日收稿,1g9o年1月8日话皿) (上接第243面)
M不能杀伤半透性小室内的NS一1缸胞.但口入较 大剂量LPS~,I澈M一CF分皿,就能促使杀伤过程 实现.与此不屙,不论LPS存在与否,对小室内 的P815细胞均无杀伤作用,可见M母的杀伤作用是 接触依赖或太剂量触发信号依赖的,杀伤不同的靶 细胞对M潘化状态的要求也不尽相同.
M细胞毒机理十分复杂,且对同一靶细胞杀 伤中可能有多种机理参与,从而迭到最佳杀伤状态 此外,不同的瘤细胞对某种特定的杀伤方式怍用的 敬盛性显然不同这种差异可能与瘤细胞表达某些 原癌基因产物有关.弄清这些基本问题对有效地 发挥M抗癌作用,掌握肿瘤逃脱免疫系统控制的 机理无疑都是十分重要的.
参考文献
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浙公网安备 33021202002483