甘草有效成分（甘草酸，甘草次酸，甘草苷）的提取
、甘草酸的提取：
试剂：甘草粗粉，浓H2SO4，95%乙醇，80%乙醇，浓氨水，冰醋酸。
取甘草粗粉40g,加水煮沸2次(15倍,1.25h;12倍，1h),脱脂棉过滤，合并滤液，浓缩，冷却，搅拌下加入浓硫酸至不再析出甘草酸粘性沉淀为止（约PH=1）。放置，倾出上清液，棕色粘性沉淀用水洗涤数次，60℃以下干燥，粉碎，即得甘草酸粗品，称重。
将甘草酸粗品称重后加3.5—4倍量95%乙醇浸泡0.5—1h，抽滤，滤渣加3倍量80%乙醇回流1—2h，滤液冷却后加浓氨水（边加边搅拌）调至弱碱性（PH=8），减压回收乙醇至糖浆状，趁热加入等体积冰醋酸浸泡洗涤，放冷，析出结晶，过滤，即得甘草酸单铵盐粗品。称重后，用70—80%乙醇重结晶，即得甘草酸单铵盐纯品，称重，得率。
、甘草次酸的提取：
试剂：5%H2SO4 ， 氯仿，乙醇。
取甘草酸单铵盐，加5%H2SO4，加热10h,抽滤，水洗至中性，干燥，即得白色甘草次酸粗品，加热氯仿溶解，趁热过滤，所得滤液放冷，通过AL2O3柱，用氯仿洗脱，得甘草次酸粗品，加乙醇重结晶，得甘草次酸结晶。
、甘草苷的提取：
试剂：70％乙醇，甲醇。
取干燥药材粗粉约lOg，精密称定，加10倍量70％乙醇，回流提取2次，每次3h回流提取，纱布过滤，将提取液倒入已恒重的蒸发皿中，水浴浓缩至干，再减压干燥至恒重，得浸膏。
精密称取甘草浸膏量的l／20置于25mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理30min，冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用045um的微孔滤膜过滤，即制得供试品溶液。
、药典同时提取甘草酸和甘草苷：
试剂：70％乙醇，
取本品粉末（过三号筛）0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
、含量测定：照高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定。
1.色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为
流动相A，以0.05%磷酸为流动相B，按下
表
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进行梯度洗脱；柱
温35℃；检测波长为237nm。理论板数按甘草苷峰计算应均不
低于5000。
时间（分钟）
流动相A（%）
流动相B（%）
0～8
19
81
8～35
19→50
81→50
35～36
50→100
50→0
36～40
100→19
0→81
2.对照品溶液的制备： 取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加
70%乙醇制成每1ml各含0.02mg、0.2mg的溶液，即得。
3.测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，
测定，即得。
本品按干燥品计算，含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50%；甘草酸(C42H62O16)以甘草酸铵计不得少于2.0％。
技术文章
Ecosil C18色谱柱用于2010版中国药典方法甘草中甘草苷、甘草酸铵的含量测定谱图
Ecosil C18色谱柱用于2010版中国药典方法甘草中甘草苷、甘草酸铵的含量测定谱图
关键词：Ecosil C18，2010版中国药典，甘草酸铵，甘草苷，含量测定，谱图
2010年中国药典标准：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm。理论塔板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇分别制成每1ml含甘草苷20μg、甘草酸铵0.2mg的溶液，即得(甘草酸重量一甘草酸铵重量/1.0207)。
对照品溶液液相色谱图
组分名称
保留时间（min）
峰面积（mAU*s）
塔板数(N)
分离度（Rs）
拖尾因子
甘草苷
13.207
280.28
13813
-
1.06
甘草酸铵
31.786
562.17
269992
53.44
0.94
供试品溶液液相色谱图
组分名称
保留时间（min）
峰面积（mAU*s）
塔板数(N)
分离度（Rs）
拖尾因子
甘草苷
13.188
280.61035
13522
-
1.05
甘草酸铵
31.801
395.83215
258512
52.81
0.92
谱图来源： 中国广州分析测试中心 罗辉泰
色谱条件：
仪器配置：Agilent 1100
色谱柱：Ecosil C18 4.6mm*250mm，5μm
进样器：自动进样器（G1313A）
流动相：A：0.05% 磷酸；B：乙腈，梯度洗脱
泵：四元泵带真空脱气机（G1354A）
流速：1.0 mL/min 柱温：35℃
柱温箱：（G1316A）
检测：237nm 进样量：10μL
检测器：紫外检测器（G1314A）
色谱柱号：EC182546
软件：Agilent Chemstation
（请注明是否与药典方法一致 是□否□）
所用样品都用0.45um有机滤膜减压过滤
浙公网安备 33021202002483