下载

0下载券

加入VIP
  • 专属下载特权
  • 现金文档折扣购买
  • VIP免费专区
  • 千万文档免费下载

上传资料

关闭

关闭

关闭

封号提示

内容

首页 [定稿]同源重组

[定稿]同源重组.doc

[定稿]同源重组

Dixon飞
2017-11-24 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《[定稿]同源重组doc》,可适用于企业制度领域

定稿同源重组同源重组同源重组(HomologousRecombination)是指发生在姐妹染色单体(sisterchromatin)之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等以及真核生物细胞内的Rad、MreRad等等。同源重组反应通常根据交叉分子或holiday结构(HolidayJunctureStructure)的形成和拆分分为三个阶段即前联会体阶段、联会体形成和Holiday结构的拆分。目录简介基因敲除定义技术路线转移法DNA简介同源重组(HomologusRecombination)是指发生在姐妹染色单体(sisterchromatin)之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等以及真核生物细胞内的Rad、MreRad等等。同源重组同源重组反应通常根据交叉分子或holliday结构(HolidayJunctureStructure)的形成和拆分分为三个阶段即前联会体阶段、联会体形成和Holiday结构的拆分。同源重组反应严格依赖DNA分子之间的同源性重组的DNA分子之间的重组常见于非姐妹染色体之间的同源重组称为HomologousRecombination而小于同源性的DNA分子之间或分子之内的重组则被称为HemologusRecombination。后者可被负责碱基错配对的蛋白如原核细胞内的MutS或真核生物细胞内的MSH等蛋白质“编辑”。同源重组可以双向交换DNA分子也可以单向转移DNA分子后者又被称为基因转换(GeneConversion)。由于同源重组严格依赖分子之间的同源性因此原核生物的同源重组通常发生在DNA复制过程中而真核生物的同源重组则常见于细胞周期的S期之后。基因敲除定义基因敲除(geneknockout)是指对一个结构已知但功能未知的基因从分子水平上设计实验将该基因去除或用其它顺序相近基因取代然后从整体观察实验动物推测相应基因的功能。这与早期生理学研究中常用的切除部分观察整体推测功能的三部曲思想相似。基因敲除除可中止某一基因的表达外还包括引入新基因及引入定点突变。既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因也可以用正常基因敲除相应的突变基因。技术路线基因敲除是年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的一门新技术。年代初胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。年首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到年Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。此后的几年中基因敲除技术得到了进一步的发展和完善。基因敲除的技术路线如下:()构建重组基因载体,()用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内,()用选择培养基筛选已击中的细胞,()将击中细胞转入胚胎使其生长成为转基因动物对转基因动物进行形态观察及分子生物学检测。基因敲除的靶细胞目前最常用的是小鼠ES细胞。基因敲除的技术路线虽不复杂但由于高等真核细胞内外源DNA与靶细胞DNA序列自然发生同源重组的机率非常低约为百万分之一要把基因敲除成功的细胞筛选出来是一件非常困难的工作。因此同源重组的筛选和检测就成了基因敲除技术所要解决的关键问题。目前已有多种筛选方法其中年犹它大学的Capecchi教授的研究组发展的"正负双向选择系统"适用范围宽且效率较高。转移法同源重组(homologousrecombination)是将外源基因定位导入受体细胞染色体上的方法因为在该座位有与导入基因同源的序列通过单一或双交换新基因片段可替换有缺陷的基因片段达到修正缺陷基因的目的。位点特异性重组是发生在两条DNA链特异位点上的重组重组的发生需一段同源序列即特异性位点(又称附着点attachmentsiteatt)和位点特异性的蛋白因子即重组酶参与催化。重组酶仅能催化特异性位点间的重组因而重组具有特异性和高度保守性。根据氨基酸序列相似性和催化机制的差异位点特异性重组酶主要分为两大家族即整合酶系和解离酶转化酶系这两个家族相隔很远。整合酶家族催化重组的机制是进行酪氨酸介导的链交换该家族包含有CreloxP、FLPFRT等已经研究得比较清楚并广泛应用的重组酶系统。解离酶转化酶家族催化机制是由丝氨酸介导的当酶和DNA之间形成含磷的丝氨酸连接时连接处DNA的条链发生协调的交错断裂然后重新结合完成同源重组。该家族成员包括来自于链霉菌噬菌体的φC整合酶、lactococcal噬菌体的TP整合酶、放线菌噬菌体的R整合酶等。中C整合酶(φCint)能够有效介导噬菌体基因组中attP位点与细菌宿主染色体上attB位点间的重组反应将外源基因整合到基因组中使转基因的持续、高效表达为非病毒载体转移系统在遗传病基因治疗的应用开辟了新的途径。DNA日本理化研究所发表新闻公报说该所研究人员发现酵母线粒体中的DNA(脱氧核糖核酸)在一定条件下进行同源重组时不像以前认为的那样需要DNA形成超螺旋。这一发现将为抗衰老等方面的生物医学研究提供新线索。新闻公报说记录生命遗传信息的DNA呈稳定的双链螺旋结构但在复制、转录和重组等过程中DNA链会出现一种超螺旋现象这类似于螺旋状的电话线在受到外力时可能出现复杂的螺旋状态。理化研究所的凌枫和柴田武彦等研究人员在酵母线粒体DNA的同源重组实验中使用经过高度纯化的酶“Mhr”进行催化发现这种条件下的DNA同源重组不需要形成超螺旋而是通过一种名为“三链体”的中间体进行。凌枫对记者说曾有研究证明“Mhr”酶在抑制线粒体异质性上发挥着关键作用此次研究揭示了其催化的反应机制核心。由于线粒体异质性与衰老等生理过程密切相关理化研究所的这项研究为抗衰老等方面的生物医学研究提供了新线索。

用户评价(0)

关闭

新课改视野下建构高中语文教学实验成果报告(32KB)

抱歉,积分不足下载失败,请稍后再试!

提示

试读已结束,如需要继续阅读或者下载,敬请购买!

评分:

/5

VIP

在线
客服

免费
邮箱

爱问共享资料服务号

扫描关注领取更多福利