头孢曲松对表皮葡萄球菌生物膜形成的抑制作用

头孢曲松对表皮葡萄球菌生物膜形成的抑制作用 头孢曲松对表皮葡萄球菌生物膜形成的抑 制作用 检验医学2007年第22卷第6期LaboratoryMedicine2007,Vol22No6 文章编号:1673.8640(2007)06-O688~3中图分类号:R378.1文献标识码:A 头孢曲松对表皮葡萄球菌生物膜形成的抑制作用 朱冬安.,孙景勇,倪语星! (上海市南汇区中心医院,海201300;2.上海交通大学医学院附属瑞金医院,上海200025) 摘要:目的观察头孢曲松等4种抗乍素抑制表皮葡萄球菌生物膜的作用,探讨抗生素防渝葡萄球菌感染 的作用环节.方法辟j半定艟粘附实验筛选出形成牛物膜的表皮葡萄 ,观察不同浓度的约物对生物 球菌l5株 膜形成的抑制作用结果发现头孢曲松能抑静J生物膜形成,而头孢他啶,红霉素无抑制葡萄球菌生物膜的作 用,万古霉素埘葡萄球菌有很强的杀菌作用,fr}无抑制物膜的作片{结论头孢曲松能抑制葡萄球菌生物膜 形成.呵利用头孢f#i松抑制牛物膜的作用,通过阻止牯附来阻断葡萄球菌引起的粘附相天感染,达到预防感染的 }1的, 关键词:表皮葡萄球;牛物膜;头孢曲松 InhibitiveeffectofceftriaxonetoStaphylococcusepidermidisbiofiimZHUDong’an.,SUNJingyong, NIYuxing.(1.NanhuiCentralHospital,Shanghai201300,China:2.RuijinHospital,ShanghaiJiaotongUnizersity Medi~’alCollege, Shanghai200025.China) Abstract:ObjectiveFn()I)servewhetherceflfiaxonehasinhibitiveeffectontheStaph)Iococcu~sepidermidisbio— film.andstudythefun(‘tinnoiantibioticsinthepreventionan(itreatmentofStaphylococcusinfection.Methods15 Staphylococcusepidermidiswhosebinfitmwerepositivewerescreenedbyadhesivetest.Theinhibitiveefteetofthedrags withdifferentconcentrationwereobse~’ed.ResultsCeflriaxonecouhlinhibittheStaph)lococcusepidermidisbiofitm formationwhileceflazidime,erythrnmyeincouldnot.VancomyeincouldkillStaphflococcu~sstrongly,butcouldnotinhibit Thebiofilmformation.ConclusionsCefiriaxoneisusefultopreventStaphylococcusepidermidisinfeetiunbyinhibiting adhesiveff:t. Keywords;Staph)]x)coccu.sepidermidls;Biofilm;Ceflrlaxone 表皮葡萄球菌(StaphylOCOCCI~epidermidis, SE)是引起社区感染和医院感染的重要条件致病 菌之一…,能引起医疗器械相关性感染,导致发 病率,死亡率的增高和住院天数延长.其中的一 个重要原因是某些葡萄球菌菌株容易在导管和异 物表面粘附和形成细菌生物膜(biofilm,BF)2j. 本研究通过在体外建立SE—BF模型,观察头孢曲 松,头孢他啶,红霉素和万古霉素等抗生素有无对 SE—BF的抑制作用,从而为临床预防和治疗葡萄 球菌感染提供依据. 材料和方法 一 ,材料 1.标本来源64株SE菌株由瑞金医院临床 微生物科提供(咽拭9株,创面分泌物10株,血液 6株,尿液6株,痰液21株,静脉导管12株). 2,质控菌株SE(ATCC12228)及BF阳性 菌株(SRJ97—337)由复旦大学分子病毒学实验室 提供. 3.E试验纸条ABBiodisc公司.用于 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 葡萄球菌的最低抑菌浓度(M1C). 4,血平板,水解酪蛋白胨(M—H)平板购于 Biomeriex公司. 5.96孔和6孔细胞培养板采用CorningIn— corporated产品(costor). 6.抗生素头孢曲松(上海先锋药业公司), 头孢他啶(上海先锋药业公司),红霉素(上海四 药有限公司),万古霉素(美国礼来制药有限公 司). 7.试剂结晶紫(1:200稀释)染色液,固定 液,LB培养基,磷酸盐缓冲液. 8.仪器酶标仪,光学显微镜等. 作者简介:朱东安,男,1971年生.学士,主管技师.主要从事细菌耐药性 检测和机制研究 检验医学2007年第22卷第6期Laboratol~~Medicine2007,Vol22.No6 二,方法 1.SE的鉴定选择凝固酶试验阴性的葡萄 球菌菌落,用ATB32Staph鉴定到种. 2.粘附试验根据Christensen等方法略 作改动.首先将能形成和未能形成BF的对照菌 株(SEATCC12228)在LB培养基中培养24h. 用LB稀释成0.5麦氏单位,再用含0.25%葡萄 糖的LB1:200稀释.分别取出200txL菌液加入 96孔细胞培养板中,每种菌分别按种I块板.置 37?培养24h,吸出培养基,用磷酸盐缓冲液洗3 次(洗去未粘附的细菌).晾干后,加Bouin固定 液lO0txL固定1h,加结晶紫200txL染色10 rain.用酶标仪在570ilm处比色,渎数.汁算阴 性菌株的平均吸光度(A),标准差(S),以> A阴性菌株+3s判断为BF阳性菌株.同时将受试菌 株同上方法作增菌,稀释,培养,比色,每株做复 孑L,得至0A值. 3.MIC的测定用E试验法测定. 4,确定抗生素稀释范围头孢曲松:0, 8g/mL;头孢他啶:0—8I.zg/mL;红霉素:0, 0.25I.zg/mL;万古霉素:0,0.5~xg/mL. 5.粘附抑制试验将15株BF阳性SE菌株 在LB液体培养基中培养,步骤同粘附试验.分 别取200L接种于96孔细胞培养板中,加抗生 素20L(阴性对照生长除外).置37?培养(以 后步骤同粘附试验),用全波长酶标仪在57011111 比色,分别读出15株试验菌和阴,阳性对照菌株 的A值,判断菌株的粘附和粘附抑制情况. 为区分抗生素是杀菌作用还是粘附抑制作 用,于抗生素作用(37培养24h)后,吸出培养 物,转种于血平板(培养24h后看是否有活菌生 长),同时用磷酸盐缓冲液洗板3次(洗去未粘附 的细菌).晾干后,加Bouin固定液lO0txL固定1 h.加结晶紫200染色10min.用倒置显微镜 观察在盖玻片上细菌的粘附情况. 结果 一 ,BF阳性SE的筛选 实验结果显示,A阴性菌株=1.877;阴性= 0.024;A阴性菌株+3s=1.959.在64株待测SE中 检出形成BF的菌株15株(占23.4%). 二,不同浓度抗生素对BF抑制试验 将筛选出的15株形成BF菌株分别与4种不 同浓度抗生素作用后取均值,作图,其结果显示如 图1,4.只有添加头孢曲松后由于抑制其BF形 成,测定菌的上浮曲线反而下降至阴性对照菌株 的下层,见图1. 注:,?一形成BF的SE;一?一AT(c12228 图1不同浓度头孢曲松对BF阳性sE菌株的影响 注:一?一形成BF的SE;一?--A…1CC12228 图2不同浓度头孢他啶对BF阳性sF菌株的影响 注:,?一形成BF的SE;一?一ATccl2228 图3不同浓度万占霉素对BF阳性sE菌株的影响 注:,?一形成BF的SE;一?,ATCC12228 图4不同浓度红霉素对BF阳性sE菌株的影响 三,加抗生素后显微镜观察和细菌培养结果 头孢曲松,头孢他啶和红霉素作用后有细菌 生长,万古霉素>0.0156mL无细菌生长. 讨论 SE是皮肤和黏膜的正常菌群,该菌容易在导 管和人工瓣膜等异物表面形成BF,是造成医院感 染的主要原因.其主要的发病机制是SE形成 BF,通过粘附作用而引起感染E4,5].目前认为BF 的形成分2步,(1)初始粘附:是由细胞表面的大