RP-HPLC 法测定参芪二仙片中淫羊藿苷的含量【文库论文】
RP-HPLC 法测定参芪二仙片中淫羊藿苷的含量
====================================================================== 【摘 要】 目的 建立RP-HPLC 法测定参芪二仙片中淫羊藿苷的含量。
方法
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色谱柱:资生堂 C18(250×4.6 mm，5μm); 流动相:乙腈-水(30:70);流速:1.0ml?min-1;检测波长:270 nm。结果 淫羊藿苷在0.0408,0.2040μg?ml-1的范围内，线性关系良好，r=0.9993;平均回收率:96.1%，RSD=0.56%(n=6)。结论 方法简便，快速，结果准确，可用于参芪二仙片的质量控制。
【关键词】 参芪二仙片;淫羊藿苷;反向高效液相色谱法
参芪二仙片含有红参、黄芪、当归、仙茅、淫羊藿、巴戟天、黄柏、知母成分。原标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册。具有补肾填精，调补冲任，益气养血的功效。用于肾虚腰膝酸软，阳痿早泄，遗精，妇女更年期经血不调等症[1]。原标准中质量控制项只有性状、显微鉴别项和检查项，没有含量测定。本实验建立了对处方中淫羊藿的淫羊藿苷含量测定方法，科学合理有效地控制了药品质量，提高了药品质量标准[1]。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津LC-2010C HT 高效液相色谱仪;日本岛津LC Solution 色谱工作站。电子分析天平(瑞士，d=0.01mg)。
1.2 试药
淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110737-200415);水为二次蒸馏水，甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈均为色谱纯，其余试剂均为分析纯;参芪二仙片(沈阳红药制药有限公司，批号:20090202、20090203、20090204)。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
取淫羊藿苷对照品10.012 mg，精密称定，加甲醇制成每1 ml 含10.012 μg 的溶液，即得。
2.2 供试品溶液的制备
取本品10 片，除去糖衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，加入50%乙醇溶液50ml，加热回流30 分钟，放冷，滤过，用50%乙醇溶液洗涤残渣及滤器3 次，每次10ml，合并滤液及洗液，蒸至近干，残渣加水20ml 使溶解，转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取5 次，每次15 ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 阴性对照溶液的制备
取除淫羊藿柏以外的其它药材，按制法中工艺制备阴性样品。其它操作同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。
2.4 色谱条件
色谱柱:资生堂C18(250×4.6 mm,5μm);检测波长为;流速为1.0 ml?min-1;流动相为乙腈-水(30:70);理论板数按淫羊藿苷峰计算不低于5000;按上述色谱条件，分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性液各进样
10μl，记录色谱图(见图1)。结果
表
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明在淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照溶液在此峰位无吸收，对本品中淫羊藿苷含量测定无干扰，淫羊藿苷峰与其它组分峰分离完全[2.3]。
2.5 线性关系考察
精密称取淫羊藿苷对照品10.20mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液。(0.1020mg?ml-1)。分别精密吸取对照品溶液4μl、8μl、12μl、16μl、20μl 分别注入液相色谱仪中，记录色谱图，将峰面积对其相应的浓度进行回归处理，得回归方程:Y=1.36×106X，1.46×104，r=0.9993，表明淫羊藿苷对照品进样量在0.0408,0.2040μg 范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10ul 连续进样6 次，测定峰面积，RSD 为1.8%，表明本法精密度良好。
2.7 重复性试验
的样品6 份，按2.2 项下供试品溶液制备方法试验，测定 取批号20090202
样品中淫羊藿苷的含量，平均值0.2494 mg.g-1,RSD 为1.6%.表明方法重复性良好.
2.8 稳定性试验
、2、4、6、12、24h 分别进样10 ul，测定峰面积， 取同一供试品溶液在0
RSD 为1.8%，结果表明供试品溶液在12 小时内稳定。满足方法
要求
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2.9 加样回收率试验
取已知含量的本品(批号20090202,含量0.2494mg/g)，精密称取供试品0.25g，共称取6 份，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(C=0.06186mg/ml)
乙醇溶液50ml，按2.2 项下“„„加热回流30 分钟”起制备1ml，再加入50%
供试品溶液。精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，计算回收率，结果加样回收率为98.7%,RSD 为0.87%(n=6)。
2.10 样品含量测定 精密吸取供试品溶液10ul，
进样依法测定，结果见表1。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
在200,600nm 波长对淫羊藿苷对照品进行紫外扫描，淫羊藿苷在270nm 处有最大吸收，且其他组分无影响，故确定270nm 为测定波长。
3.2 提取方法的选择
根据《中国药典》2010 版一部中淫羊藿的含量测定方法中采用稀乙醇做为提取溶剂，故在本试验中，进行多种方案提取，最终选定加入50%乙醇溶液50ml，加热回流30 分钟，放冷，滤过，用50%乙醇溶液洗涤残渣及滤器3 次，每次10ml，合并滤液及洗液，蒸至近干，残渣加水20ml 使溶解，转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取5 次，每次15ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解为最佳方法。
3.3 流动相的选择
在试验中，参考有关文献，采用乙腈-水几种配比作为流动相，但结果不理想，
最后认定乙腈-水(30:70)为流动相，测定淫羊藿苷的含量，分离效果较好，峰型理想。该方法简便，快速，稳定，分离效果佳，结果准确，可用于参芪二仙片中淫羊藿苷的含量测定的方法。
参考文献
[1] 卫生部药品标准[S].中药成方制剂.第二十册.1998:156. [2] 中国药典[S].2010 年版.一部. 306
[3] 徐天玲.HPLC 法测定强骨益肾胶囊中淫羊藿苷的含量[J].中国药师,2010,13(10):1526-1527.
浙公网安备 33021202002483