【doc】精子膜抗原SA—30免疫对小鼠子宫内肥大细胞的影响

【doc】精子膜抗原SA—30免疫对小鼠子宫内肥大细胞的影响 精子膜抗原SA—30免疫对小鼠子宫内肥大 细胞的影响 畜牧兽医,2002,33(4),349—351 ActaVeteri~zariaetZootec,hcaSinCa 精子膜抗原SA.30免疫对小鼠子宫内 肥大细胞的影响 孙秉贵,周占祥,邓泽沛 (中国农业大学动物医学院,北京100094) 摘要:用牛精子膜抗原SA一30免疫雌性昆明系小鼠,取小鼠子宫做常规石蜡切片,甲苯胺蓝染色检测子宫内的肥 大细胞.结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,所有肥大细胞均位于子宫肌层,间情期时,SA一30免疫组和对照组子宫内肥大细胞在数最上无 明显差别(P>0.05);而妊娠第3天的小鼠子宫中,SA一30免疫后肥大细胞显着增多(P<0.05)提示SA30免疫 可能诱导妊娠早期小鼠子宫内的细胞免疫反应,从而导致生育力的下降 关键词:小鼠;子宫;SA一30;肥大细胞;组织化学 中图分类号:Q954.4文献标识码:A文章编号:0366—6964(2002)04—0349—03 肥大细胞是一种非常重要的免疫调节或免疫效 应细胞,能够分泌组织胺,TNF—a,NO等多种介 质_l一.研究表明,这些生物活性物质对哺乳动物 胚泡附植及早期胚胎发育有影响l4.SA一30是从 牛精子膜上分离到的一种伴刀豆素A结合糖蛋 白一,用SA一30主动免疫雌性昆明系小鼠,可使其 生育力下降,我们在小鼠血清及子宫黏液中均检 测到了抗SA一30抗体IgG,而且,SA一30可诱导小鼠 子宫内CI)4,CD8,NK等多种免疫细胞的增加. 本实验利用组织化学的方法,对SA一30免疫后小鼠 子宫内肥大细胞进行了检测,旨在了解SA一30对小 鼠子宫局部肥大细胞的影响,以进一步认识SA一30 在生殖过程中的作用及机制 l 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 和方法 1.1实验动物8,10周龄雌雄昆明系小鼠均购 自中科院动物所,常规饲养1周后,挑选健康者进行 试验. 1.2试剂ConA—Sepharose4B购自Parmacia公 司,NP一40为Fluka产品,甲苯胺蓝购自北京化学试 剂公司,弗氏佐剂由中国兽药检察所购买. 1.3牛精子膜SA.30的提取与鉴定按照文献5] 方法进行. 1.4小鼠免疫程序SA一30(30gg/只)用等体积的 收稿日期:2001.04'2_4 基金项目:国家自然科学基金(39770543);北京市自然科学基金资助 (6982014) 作者简介:孙秉贵(1971),河北阜平人,男,硕士,讲师,主要从事生 殖生物学方面的研究 完全弗氏佐剂充分乳化,背部皮内多点注射免疫雌 性昆明系小鼠(0.1ml/只),3周后腹腔注射(0.1 ml/只)进行第1次加强免疫,剂量改为40g/只,佐 剂为不完全弗氏佐剂,以后每隔两周加强免疫1次, 剂量与途径均与第1次加强免疫相同.共加强免疫 4次.对照组小鼠用不加SA一30的佐剂免疫. 1.5取材小鼠最后1次加强免疫后第8d,雌雄 合笼,第2d检查有阴栓者定为妊娠0d,妊娠3d时 颈椎脱臼处死(共5只),取子宫于未加冰醋酸的 Bouin'S液中固定48h,梯度酒精脱水,二甲苯透明, Paraplast包埋,制备5gm厚切片.同时取SA一30免 疫后处于间情期的小鼠,进行同样的处理.对照组 小鼠和SA一30免疫组同时取材. 1.6甲苯胺蓝染色按文献7的方法进行:切片 常规脱蜡至蒸馏水,从水中取出投入染液(0.8%甲 苯胺蓝,0.6%高锰酸钾,蒸馏水配制)放置30S,蒸 馏水洗两次后,用90%酒精分色(显微镜下观察控 制),100%酒精脱水,二甲苯透明,中性树脂封片 1.7细胞计数及统计学分析在光镜下(400×)对 每种细胞随机计数10个视野,计算单个视野中细胞 的平均数(mean?SD),SA一30免疫组和对照组小鼠 子宫间肥大细胞数量的比较,采用显着性检验t检 验法 2结果与讨论 本实验利用甲苯胺蓝染色,显示小鼠子宫内的 肥大细胞.结果表明,间情期小鼠子宫肌层内有较 多肥大细胞(2.14?1.01),细胞形态多样,大小不 35()畜牧兽医33卷 同,有的细胞浆内可见清晰的蓝紫色颗粒,子宫内膜 中则未发现肥大细胞(图1).妊娠第3天的小鼠子 宫内,肥大细胞极少(0.91?0.42,图2),这与文献 报道的结果一致lSA一30免疫后的小鼠,间情期 整 谬 蠢 子宫内肥大细胞的分布与对照组小鼠的相似(图 3),数量上(2.35?1.16)也没有明显差异(P> O.05);妊娠第3天时,虽然分布没有变化,但子宫内 肥大细胞的数量明显增多(2.56?1.07,图4),和对 M 赫2. MM { 舀簟 ? 图1间情期对照组小鼠子宫内的肥大细胞.M:子宫肌层;十示肥大细胞×100 Fig1Mastcellsindioestrousuterusofcontrolmice.M:myornetrium:十indicatesmastcell×100 图2妊娠第3天对照组小鼠子宫内的肥大细胞.M:子宫肌层;十示肥大细胞×100 Fig.2Mastceilsinuterusonday3ofpregnancyofcontrolmice.M:myometrium;十indicatesmastceils×100 图3SA30免疫后间情期小鼠子宫内的肥大细胞.M:子宫肌层;十示肥大细胞×100 Fig3MastceilsindioestrousuterusofSA30immunizedce.M:myometriuin:十indicatesmastceils×100 图4SA一30免疫后妊娠第3天小鼠子宫内的肥大细胞.M:子宫肌层;十示肥大细胞×100 Fig4Mastceilsinuterusonday3ofpregnancyofSA30immunizedmice.M:myometrium:十indicatesmastceils×l00 照组相比,二者有显着差异(P<O.O5).提示SA一 3O免疫雌性小鼠后,主要对妊娠早期子宫内的肥大 细胞产生影响,对间情期小鼠子宫作用不大.小鼠 子宫内肥大细胞数量的比较见表. 组织化学和免疫组织化学的结果证实,多种哺 乳动物子宫内有肥大细胞分布.但肥大细胞在妊娠 各阶段究竟起什么作用,目前尚未完全阐明.间情 期小鼠子宫中的肥大细胞可能主要用于抵抗外界病 原微生物的感染,以及子宫组织的修复.早期 研究认为,妊娠早期,肥大细胞在雌激素作用下释放 的组织胺有利于子宫蜕膜化反应_4,从而促进胚胎 着床.后来研究发现,用组织胺H2受体的封闭剂 将大鼠H2受体封闭后,并不能阻止胚泡的附植. 最近Salamonsen等_8J用肥大细胞的制动剂(stabiliz— er)FL55618使肥大细胞失活后,大鼠及小鼠的着 床均未受到影响.利用肥大细胞缺陷小鼠(w) 进行的实验也表明,子宫肥大细胞对蜕膜化反应及 胚泡附植并不是必需的_l.本试验在胚泡着床前 (妊娠第3天)小鼠子宫内仅发现极少量的肥大细 胞,也揭示肥大细胞对着床意义不大.肥大细胞分 泌的组织胺等可使子宫平滑肌收缩,有利于分娩的 启动和进行,但这一作用对胚泡着床及早期胚胎的 发育可能是有害的,因为着床及早期胚胎的发育需 要相对安静的子宫环境.小鼠肥大细胞还是TNF— a等多种细胞因子的来源之一l2i,而TNF—a可 通过损伤内细胞团阻止胚泡向胎儿分化_l?.在一定 4期孙秉贵等:精子膜抗原SA30免疫对小鼠子宫内肥大细胞的影响351 表小鼠子宫内肥大细胞的数目(mean?SD) TableThehumberofmastcellsinmouseuterus a:Comparedwithcontrolgroup(P>0.05);b:(P< 0.05) 因素刺激下,肥大细胞还可释放NO,过量的NO也 是引起早期胚胎丢失的原因之一.正常情况下,妊 娠早期小鼠子宫内肥大细胞很少,用SA一30免疫后 则显着增多,提示SA一30可诱导这一时期肥大细胞 的增殖分化或迁移.虽然SA一30引起的小鼠子宫 内肥大细胞增多的具体作用还不清楚,但可以推测, 这些超出生理值范围的肥大细胞将产生大量的生物 活性物质,如组织胺,NO,TNF—a等,影响胚胎附植 及早期胚胎的发育,从而导致生育力下降.以前的 实验已经发现,SA30可刺激小鼠子宫内CD4, CD8及NK细胞的增多,本试验进一步证实SA一30 能够诱导小鼠子宫局部的细胞免疫反应.这可能是 SA一30免疫小鼠后引起生育力下降的原因之一.对 SA一30作用及机制的进一步研究有可能为家畜繁殖 障碍的诊断及预防提供依据. 参考文献: [1]于家利,等.组织胺与免疫机制[J].国外医学与免疫学 分册,1983,6(3):120,122. 12JGordonJR,GalliSJ.Mastceilsasasourceofbothpre— formedandimmunologicallyinducibleTNF—a/cachectin [J.Nature,1990,346(6281):274,276. 13]HuntJS,MillerL,Vas.smerI),etalExpressionofthe induciblenitricoxidesynthasegeneinmouseuterine Ieukocytesandpotentialrelationshipswithuterinefunc— tionduringpregnancy[J].BiolReprod,1997,54(4):827 , 836. 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InfluenceofImmunizationwithSA.30onMastCellsinMouseUterus SUNBing—gui,ZHOUZhan—xiang,DENGZe—pei (CollegeofVeterinaryMedicine,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094,China) Abstract:FemaleKunmingmicewereimmunizedwithSA一 30(amembraneproteinisolatedfrombullsperms). Thechangesofmastcellsin"mouseuterusweredetectedbyhistochemicalmethod(toluidine bluestaining).Re— suhsshowedthatallmastcellsoccurredinthemyometrium.Indioestrousuterus.therewasno obviousdifference ofmastcellquantitybetweentestandcontrolmice(P>0.05).Intheuterusonday3ofpregna ncy,however, thereweremuchmoremastcellsinSA一 30immunizedmicethancontrolmice(P<0.05).Thedatasuggestthat immunizationwithSA一30mayinducecell— mediatedimmuneresponsesinmouseuterus,whichmaybeharmfulto fertility. Keywords:Mouse;Uterus;SA一30;Mastcell;Histochemistry