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糖尿病蛆虫疗法.doc

糖尿病蛆虫疗法

耳食之谈123
2019-01-13 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《糖尿病蛆虫疗法doc》,可适用于医药卫生领域

蛆虫疗法编辑蛆虫疗法指利用医用蛆虫帮助清理溃烂伤口吃掉阻碍伤口复原的坏死组织和细菌的一种自然生物疗法。年月法国研究人员表示蛆虫清理难以愈合的大型伤口的速度超过手术。中文名       蛆虫疗法类    型    自然生物疗法起    始    世纪引入国内      年蛆虫种类      医用蛆速    度    可能优于手术目录疗法历史疗法优势清理速度实验研究实验一实验二专家说法疗法历史蝇的幼虫蛆对感染创口的清洁作用很早就引起人们的注意。在十六世纪中叶就已发现感染创面上孳生的蝇蛆非但不会加重感染反而有利于愈合。在世纪拿破仑的军队里使用这个方法为受伤的士兵治疗并且将这个方法推广到了美国内战和第一次世界大战时期。世纪年代抗生素的出现使得蛆治疗法被遗弃用蛆治病成了一种简陋而不科学的土方法。在美国和欧洲一些国家蛆疗被广泛应用于各种化脓性感染的创面包括:脓肿、烧伤、坏疽和慢性腿部溃烂取得了良好的临床效果临床治疗率达。世纪由于滥用抗生素导致耐药菌出现新一代医生开始减少对抗生素的使用重新青睐自然生物疗法又使蛆虫疗法回到了人们的视线。国内王江宁教授于年将此疗法引入国内并应用于临床获得成功严重软组织感染合并全身中毒症状的蛆虫疗法病人可以不用截肢既保全了生命又避免了截肢。中央电视台《走进科学》节目两次报道了该疗法的有效性。该项研究分别于于年、年两次获得国家自然基金资助于年获得北京首都医学特色项目资助从分子水平揭示了生物清创的本质及蛆虫抗菌肽的分子结构及生物合成为人类生物清创奠定更坚实的理论基础年《生物清创的临床及实验研究》项目获得了北京市科技进步三等奖生物清创的临床适应症主要为:糖尿病足、褥疮和创伤引起的软组织感染。疗法优势医用蛆是指一种特殊蝇种(丝光绿蝇)的幼虫医用蛆虫清创伤口既快又好。首都医科大学王江宁教授及医院王爱萍医生临床研究证明该疗法比传统方法更能有效地清除伤口腐肉加快溃疡伤口的愈合从而避免患者因肢体溃烂而进行截肢手术。蛆虫疗法治疗糖尿病、足溃烂、皮肤溃烂等有一定优势。蛆虫不会吃伤口周围健康的组织只攻击创面上的坏死组织部分不影响周围正常组织并能促进肉芽组织的形成。它还可以进入到外科手术都难以到达的深部创面它们在吞噬腐肉后的排泄物中含有杀菌的盐体内还有抗生素和提高患者免疫力等有助于溃疡伤口愈合的物质。清理速度年月日法国研究人员表示蛆虫清理难以愈合的大型伤口的速度可能超过手术例如糖尿病患者身上的伤口。实验研究王江宁教授所获国家自然基金项目研究内容如下:作用机理:()蛆的分泌液能够破坏不健康或异常组织,而对健康组织无损。由于蛆虫产生的胶原酶、类胰蛋白酶、类糜蛋白酶能将坏死组织分解成半液状泡沫,然后进行消化此外它们的分泌液含有抗微生物的抗菌酞。()蛆虫能清除创面的细菌。它们有快速大量吞食消化细菌的能力。()蛆虫能刺激伤口愈合。有人在实验中发现蛆虫蠕动的机械刺激能促使成纤维细胞产生胶原和纤维蛋白,加速肉芽组织的生成。()蝇蛆分泌碱性物质改变创面酸碱度。()其他实验一活体蛆虫分泌物的抑菌作用研究一、活体蛆虫的无菌处理我们的方法是于喂养的天取出蛆虫。先用生理盐水反复冲洗将幼虫分别放在甲醛生理盐水溶液中分钟放入的双氧水溶液中分钟放入的碘仿溶液中放入的含氯的消毒液中放入的酒精中分钟不影响蛆的生活力。我们设计连续用以上浓度的甲醛、双氧水和含氯的消毒液对蛆进行处理每次处理完毕后用蒸馏水洗涤对消毒的蛆体表面经细菌和病毒学检验证实无细菌和病毒存在并且蛆的活力仍然存在无菌状态可用于活体临床与基础实验。二、活体蛆虫分泌物的获取取适量蛆虫(条)分为金葡菌诱导组(将条幼虫与金葡菌共培养小时)和对照组分别加入倍体积TNE缓冲液(mMTrisHCl,pH,mMNaCl,mMEDTA,及蛋白酶抑制剂混合物含µgmlleupeptin,µgmlaprotinin,andmMPMSF,mMNaVO)冰浴min充分匀浆匀浆液离心(Xg,OCmin)取上清液加倍体积的TNE缓冲液沸水浴min离心(Xg,OC,min)取上清液即为粗提物。三、抗菌物质生物活性测定方法的建立细菌浓度及培养基对抑菌斑形成的影响:研究发现不同细菌浓度及培养基对抑菌斑的形成及菌斑大小有明显作用经过选择我们使用能使抗菌物质产生最大抑菌斑的细菌浓度即个OD值ul来铺平板并用水解酪蛋白做为固体培养基便于纯化过程中更敏感地检测抗菌物质生物活性。 不同细菌对于抗菌物质的抗菌敏感性比较:比较了两种不同细菌革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)和革兰氏阴性菌(大肠杆菌)对抗菌物质的抗菌敏感性结果如图示ABC:抗菌粗提物AD:抗菌粗提物 EF:幼虫匀浆上清液EC:幼虫匀浆上清液D:TNE缓冲液B:TNE缓冲液四、总结溃疡创面继发细菌感染是糖尿病足患者导致截肢的主要原因。抗生素治疗具有局部浓度高的优点但局部应用容易导致细菌耐药本实验中头孢哌酮对从临床分离培养出的金黄色葡萄球菌的抗菌作用较弱证明了这一点。昆虫具有特殊的免疫防御体系多种昆虫受到外界有害刺激诱导时能产生体液免疫物质。苍蝇幼虫生活在病原微生物较多的环境中但它自身则不得病可见蝇体自身具有独特的免疫防御体系。实验中采集的蛆虫血淋巴分泌物提取液对金黄色葡萄球菌具有较强的抗菌作用其抗菌能力强于头孢哌酮。我们认为有害细菌在一定程度上起到了诱导作用刺激蛆虫的机体防御体系产生抵抗这种细菌的物质。丝光绿蝇幼虫(蛆)主要生长在腐尸和腐烂的鱼肉等含有大量细菌的环境中,以腐败组织为食物对有血运的活体组织无任何影响。国外一些学者利用丝光绿蝇幼虫的这一特性将其应用于感染创面的修复治疗中取得良好效果。我们将具有活力的蛆虫虫体消毒处理后,对蛆虫体表经细菌和病毒学检验证实无细菌和病毒存在将消毒的蛆虫用于糖尿病足部溃疡创面的临床治疗所有病例创面脓性坏死组织清除干净,新鲜的肉芽组织迅速生长,创面表面培养无细菌。我们认为蛆虫在溃疡创面上爬行吞食脓性坏死组织、清洁创面的同时环境中的金黄色葡萄球菌也进入蛆虫体内刺激蛆虫机体产生某种抗菌蛋白物质消灭细菌。实验二活体蛆虫分泌物促进糖尿病大鼠的创面愈合作用研究一、材料与方法、糖尿病模型复制:月龄雄性普通级SD大鼠,体重~g,购自大连医科大学实验动物中心。实验前h禁食,定量。实验当日称体重,尾静脉采血用血糖仪测定基础血糖然后,给实验组只mgkg注射链脲佐菌素(Sigma,临用前溶解在mmolL的枸橼酸缓冲液中,pH),其余大鼠给予等剂量枸橼酸缓冲液腹腔注射。周后当动物血糖浓度≥mmolL时,糖尿病模型复制成功。、创面模型制作:取上述人工复制的糖尿病大鼠只和正常组大鼠只,以盐酸氯胺酮注射液(mgkg)腹腔推注麻醉后,背部剃毛,常规消毒。在无菌条件下用特制打孔器在鼠背中部脊柱上下两处各打一圆孔,深至皮下,直径cm,创面面积为cm。止血后以无菌纱布包扎,单笼喂养,定量饮水与喂食。所有实验均在清洁级动物实验室完成。、中药生肌膏配置:由生黄芪、炮甲、熟地、金银花、黄连等十五味中药组成具有托里生肌、解毒化瘀之功效由大连大学附属医院中药房提供。、实验分组:分为中药治疗组(TLSJDM)喂以中药生肌膏ml只d单纯蛆疗组(MDTDM)、正常对照组(NORM)和模型对照组(DM)均喂以生理盐水ml只d。每日分别以蛆分泌物、生理盐水各ml湿敷中药治疗组单纯蛆疗组创面上部创面湿敷蛆分泌物、下部创面湿敷生理盐水。用无菌纱布覆盖绷带包扎并固定。单笼喂养。每日定时换药次至创面愈合。二、观测指标、愈合标准:天平称重后换算成创面平面面积。测得的数据均用x±s表示创面愈合标准为痂壳小于创面面积或愈合面积≥为完全愈合。、病理学检查:术后、、天取各组动物创面组织福尔马林液固定标本石蜡包埋切片后常规HE染色。、免疫组化:各组的bFGF、CTGF的水平于术后、、天取各组动物创面皮缘约×cm。用SABC免疫组化法分别检测组织切片后切片用二甲苯、梯度酒精脱蜡至水PBS(M)洗分钟次在室温下HO孵育切片分钟消除过氧化物酶PBS洗分钟次微波炉抗原修复℃分钟加动物血清封闭液封阻分钟倾去℃下加入稀释后的一抗工作液℃湿盒中过夜PBS洗分钟次加生物素化二抗工作液℃湿盒中温育分钟度酒精脱蜡至水以同上方法操作PBS洗分钟次加SABC酶标℃湿盒中温育分钟PBS洗分钟三次DAB显色镜下控制显色完成后入PBS终止显色流水冲洗分钟苏木素复染秒流水返蓝分钟脱水透明封固中性树胶封片。每张切片在×倍显微镜下随机选取创伤皮肤内的个不重叠的视野进行bFGF阳性表达细胞,CTGF阳性表达细胞计数。三、数据处理方法 以均数±标准差表示同组治疗前后采用配对t检验组间比较采用单因素方差分析用SPSS对数据进行统计分析。四、结果一般观察:造模周时造模大鼠均出现饮水量、尿量、摄食量增多并表现出反应迟缓和倦怠毛色无光泽。实验结束时正常对照组大鼠活泼好动毛色光泽摄食正常创面基本自行修复。模型对照组大鼠全身明显消瘦及饮水量、尿量加重创面渗出、糜烂严重创面不断加大加深其他情况无改善。中药治疗组大鼠毛色尚有光泽体重及饮水量无明显减少活动频率如常摄食尚可创面恢复如新。单纯蛆疗组大鼠毛色无光泽活动较前稍有增加创面恢复但形成的皮肤组织较薄。中药治疗组明显优于模型对照组及单纯蛆疗组。血糖变化除正常对照组其他各实验组各时间点,血糖值经单因素方差分析发现组间无显著性差异(P>)所以可以不考虑各组间血糖值影响伤口愈合的因素。创口面积及创面愈合时间变化:伤后模型组创面面积逐渐增大,并且伴有溃烂、渗出大鼠死亡率较高。蛆分泌物组及托里生肌中药组早期创面愈合速度较慢,各组间无显著性差异P>至伤后第~日,两组创面明显缩小。静脉性溃疡患者参与了此项新研究。在住院两周期间研究人员随机挑选患者分成两组每组超过人一组接受蛆虫疗法一组接受传统的手术刀清理伤口疗法。治疗时两组患者均被蒙上眼睛并不知道自己接受的是何种疗法。治疗使用的蛆虫是丝光绿蝇幼虫装在小瓶子里治疗时放在患者伤口上一周两次。蛆虫分泌的物质渗入伤口溶解死亡的组织而后吃掉在它们的内脏进行进一步降解。法国卡昂大学医学中心的安妮多姆马丁博士和同事表示两组患者在疼痛或者感受到的蠕动感方面没有差异。他们的研究发现刊登在《皮肤病学文献》上。一周后接受外科手术清理伤口的患者伤口处平均有三分之二的区域被腐肉覆盖腐肉会阻碍伤口愈合。相比之下接受蛆虫疗法的患者只有的伤口区域被腐肉覆盖。

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