藏紫草化学成分及其抑菌活性研究（可编辑）

藏紫草化学成分及其抑菌活性研究（可编辑） 藏紫草化学成分及其抑菌活性研究 西南交通大学 硕士学位论文 藏紫草化学成分及其抑菌活性研究 姓名:黄艳 申请学位级别:硕士 专业:生物化学与分子生物学 指导教师:谭睿 2012-05-21第页 西南交通大学硕士研究生学位论文 摘 要 藏紫草为紫草科滇紫草属植物长花滇紫草 .. 及细花滇紫草 ..的干燥根,分布 于西藏东部和南部。藏紫草为常用藏药,收载于《中华人民共和 国卫生部药品标准》藏 .,对肺病、多血病症疗效显著;有个成方制剂收入藏 药第一册.. 紫草药用。目前研究较多的为年版《中国药典》收载的新疆紫草 .和内蒙紫草 ,对藏紫草的研究甚少,其化学成 分和抗菌活性研究未见报道,鉴于藏紫草悠久的药用历史和良好 的药用价值,本文对藏 紫草化学成分进行研究并探讨其抗茵活性,为进一步研究其药效物质基础和药用价值提 供依据。 .柱层析色谱技术对藏紫草石油醚和乙酸乙酯部位 采用硅胶柱层析、 分离纯化,得到个单体化合物,通过、”等波谱学方法进行分析鉴 定,确定了其中个化学物分别为:一谷甾醇,紫草素, 齐墩果酸,苯甲酸 ,阿魏酸 ,胡萝卜苷,山奈酚?,槲皮素...仅. 鼠李糖苷肮...仅.., 咖啡酸。采用平板滤纸 片法对藏紫草提取物、、、和单体化合物、、、、、、进行大 肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌活性检测,并测定具抑菌活性样品的最 小抑菌浓度值。结果发现,藏紫草提取物对革兰氏阴性菌和阳性菌均有抑制作用,对芽 孢杆菌的抑制效果较弱。抑菌活性物质极性较小,主要为酯溶性成分。化合物为萘醌 类物质,抑菌效果显著,说明藏紫草很可能具有和新疆紫草同样的药用价值。化合物、 为黄酮类化合物,对三种供试菌均有抑制作用,说明藏紫草中黄酮类物质也是其具有 抑菌活性的物质基础,可以以黄酮含量作为其质量控制的标准之 一。此次研究为藏紫草 药效物质基础和药用价值提供了理论依据。 一:抑菌活性;最低抑菌浓度 关键词:藏紫草;化学成分;第页 西南交通大学硕士研究生学位论文 . ?. 一一 ,. 以西劣. ., . . , , .,, ? ?,. ,, . . . ‘ . , . , . ,. : 一; ; ; ;西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 缩略语说明柱层析法 氢核磁共振 碳核磁共振 薄层色谱 总醇提物 石油醚提取部位 乙酸乙酯提取部位 【仃 正丁醇提取部位菌落形成单位最低抑菌浓度光密度西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 第章前 言 .本课题的研究背景 藏紫草是紫草科植物长花滇紫草 及细花滇紫草 ..的干燥根, .. 是西藏二级濒危藏药材,分布于西藏东部和南部【。二者均为紫草科滇紫草属多年生植 物,其花药均只在基部结合,花萼裂到基部成条形或条状披针形,花冠兰紫色,长~ 毫米,花丝着生于花冠筒近中部及以上。二者的区别仅在花冠长度前者为毫米, 后者为毫米、喉部直径前者为~毫米,后者约毫米、花丝着生花冠 筒位置前者/处,后者/略有细微差别。藏紫草收载于《中华人民共和国卫生部 药品标准》藏药第一册...;性甘味?,具有清热?血、养肺、抑菌之 效,在我国有悠久的用药历史,常用于肺炎、结核空洞、高山多血症,藏成药中有 个方剂使用其作为药材入药,属于使用频繁的常见藏药材。 紫草作为药用,历史悠久,最早记载始于《本经》,以后历代本草都有记载。目前 在民间作为药用的紫草品种较多,有新疆紫草 .、内 蒙紫草 .、狼紫草 .、紫草 . .、密花滇紫草 、滇紫草 等。年版《中国药典》收载 、露蕊滇紫草 的药用紫草为紫草科软紫草属中的新疆紫草 .,也称 为软紫草,是药材“软紫草”的原植物和内蒙紫草 .,也称为黄 花软紫草、黄紫草、假紫草‘。目前研究较多的为药典收载的品 种,在化学成分和药理 作用临床应用都有相应研究,发现具有抑菌、消炎镇痛、抗病毒作用,能够保护肝脏损 害,影响癌细胞的生长促其凋亡,并具有抗生育作用等。但是目前其他紫草品种的相关 研究甚少。第页 西南交通大学硕士研究生学位论文 .本课题的研究意义 藏紫草有较强的药用价值,是个藏成药处方药材,随着市场需求逐年增大,野 生资源日益减少,现为西藏二级濒危藏药材之一。因国内外对藏紫草的研究甚少,仅泽 仁旺姆‘利用藏紫草茎尖组织,建立了离体再生组织培养技术,有关其化学成分的研究 还未见报道,本课题拟对藏紫草化学成分和其生物活性进行研究,为藏紫草化学成分和 药理机制研究奠定基础,并为其临床研究提供依据。 .本课题研究的设计思路 本文研究的 主要内容 简爱每一章主要内容马克思主义基本原理主要内容行政体制改革的主要内容财务管理的主要内容手卫生相关知识培训的主要内容是 如下: 藏紫草化学成分的提取分离和纯化; 对分离得到的化合物进行结构鉴定; 结合藏紫草药效作用,对其提取物和单体化合物进行抑菌活性研 究。 .本课题研究的设计步骤 本文研究的主要方法如下: 采用乙醇溶剂冷浸提取藏紫草化学成分浓缩得到粗提物总浸膏,将总浸膏用 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取得不同极性部位浸膏。 一等分离材料,对不同极性 利用柱层析硅胶、葡聚糖凝胶 部位分离纯化,得单体化合物。 采用..?、?、、等波谱方法和化学方法鉴定 单体化合物的结构。 采用平板滤纸片法考察其提取物以及单体化合物的抑菌活性,检测其最低抑 菌浓度。西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 第章紫草科药用植物研究概况 .引言 紫草科,为双子叶植物,约属余种,分布于温、热带地 区,中国有属种,全国均分布,有个亚科,分别是紫草亚科、 破布木亚科、厚壳树亚科、天芥菜亚科, 温带大多数是草本,热带则为灌木或乔木。通常被有糙毛或刚毛;单叶大部互生,无托 叶;两性花,辐射对称成螺状聚伞花序;花萼裂,花冠管状或漏斗 状;雄蕊,子房 上位,室;果常为个小坚果或核果。该科有些供药用,有些供观赏用:具药用价值 的植物主要为紫草亚科的软紫草属、紫草属、滇紫草属 、狼紫草属、假狼紫草属;具有有观赏价值的有基及 树福建茶、牛舌草;还有作为油料植物破布木,饲料植物的聚合草等。本文对紫草 科药用植物的化学成分和生物活性的研究概况进行了综述。 .化学成分研究 紫草科药用植物主要集中在紫草亚科,其化学成分含量丰富,以下对其主要化学成 分作一简要概述。 ..挥发油类化合物 小花琉璃草为紫草科琉璃草属的植物,张援虎禾用水蒸汽蒸馏法提取了小花琉璃 草的精油,通过.分析,确定了其中种化合物,含量最多的为茴香脑%, 爱草醚.%、小茴香酮.%和对一甲氧基一苯甲醚.%。茴香脑可促进骨 髓细胞成熟并释放入外周血液中,可用于治疗白细胞减少症。小茴香酮是樟脑的异构体, 具有相似的局部刺激作用。刘虹将新疆紫革石油醚部位未乙酰化 和乙酰化后?西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 比较分析,发现未乙酰化的化学成分为正十六烷、,.桉叶二烯,乙酰化后检出化 学成份有种,大部分为脂肪族化合物,分别为,.桉叶二烯、,.二异丙基萘、 十四酸、十五酸、.二叔丁基..氧杂螺,,.癸二烯、.十六烯酸、棕榈酸、十八醛、 棕榈酸内酯、硬脂酸、基.羟基苯基乙基苯酚、丫硬脂酸内酯、硬脂酸内酯, 其中棕榈酸和硬脂酸的含量最高分别为.%、.%,工业上可用于制造肥皂油膏、栓 剂等产品。谷红霞【对新疆紫草和泰山紫草挥发油进行了比较分析,均鉴定了多种化 学成分,占总挥发油的%,主要为烃类,醛类和酚类。但是二者的化学成分差异较大, 共有的成分仅种,除了正十七烷含量基本一致外,其他三种共有组分含量差异都较大。 泰山紫草中化学成分含量较高的为,.二叔丁基对甲酚.%可做食品的抗氧化剂, 反式橙花叔醇.%可用于合成替普瑞酮,治疗胃溃疡,也可作香料,.新戊氧基.. 丁醇.%,.二叔丁基.,戊二烯.%。而新疆紫草含量较高的组分为樟 脑 .%,单萜类,具有杀虫止痒、消肿止痛作用;一烯丙基..甲氧基苯酚.% 和顺一一二十三碳烯.%。由此可见紫草科药用植物的挥发油成分丰富,脂肪族类 化合物和单萜类含量较多,具有较好的药用经济价值,应对其深入研究开发利用。 ..萘醌类化合物 紫草科中萘醌类化合物含量丰富,主要集中在软紫草属中。在年,日本学者 最早对新疆紫草和紫草进行了系统的化学成分研究。目前分离得到的萘醌类物质有:去 氧紫草素、乙酰紫草素、异戊酰紫草素 、脱水紫草素、一甲基正丁酰紫草素 .、一羟基异戊基紫草素、,一 二甲丙烯酰基.乙酰氧基紫草素,、一羟基一仪,丫一二甲 基一.戊烷基紫草素,??、,二甲丙烯酰基一羟 基.阿卡宁,?、阿卡宁、羟基阿卡宁 、去氧阿卡宁、乙酰阿卡宁、乙西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 酰基.羟基一阿卡宁.、紫草嘧啶?妣‘、紫草 素、异丁酰紫草素、异戊酰阿卡宁、 二甲基戊烯阿卡宁、仪.甲基.正丁酰阿卡宁 【..、,.二甲丙烯酰阿卡宁,‘、 .二甲基戊烯紫草素、,.二甲丙烯酰紫草素 ,】、.甲氧基.乙酰基紫草素.、 一羟基异戊基阿卡宁、.乙酰氧基异戊酰阿卡宁 .】、.甲氧基.紫草素、.甲氧基.,. 二甲丙烯酰基紫草素.,.。 ..黄酮类化合物 木合塔尔.奴尔买买捌研究维吾尔药材牛舌草时发现,乙醇浓度对于总黄酮提取影 响最大,用倍体积的%乙醇?提取次,.小时/次,黄酮含量可达到.%; 马厉芳】对黄花软紫草各组织黄酮含量的测定,发现各组织间含量差异较大,花的含量 最高为.%,茎含量最低为.%;李丽【】从厚壳树醋酸乙酯部位分离得到个黄酮 、 类化合物【,山奈酚、槲皮素、槲皮素一?一阿拉伯糖苷? 山奈酚.?可拉伯糖苷一?.;石生齿缘草为紫草科植物,是 蒙医常用药之一,在东北和内蒙古资源丰富,从石生齿缘草中分离得到个黄酮苷类化 合物’,’,,一四羟基黄酮醇一一一葡萄糖苷..?,’,,一三羟基 黄酮 醇一?一葡萄糖苷锄?..;吴永江【刀从日本产砂引草叶中也分离得到 这个黄酮苷类化合物,从本科植物中还分离到柚皮素..甲醚羽等黄酮类化合物。 ..酚酸类化合物及其盐类 ,邻羟基 徐庆军从倒提壶中分离得到.二羟基苯甲酸,. ‘;李丽从厚壳树分离得到对羟基苯甲酸 苯甲酸?第页 西南交通大学硕士研究生学位论文 ,咖啡酸,咖啡酸乙酯 ,迷迭香酸甲酯 . ,.甲氧基苯甲酸辛酯劬 】;从新疆 紫草中还分离到咖啡酸四聚体谳洫及其盐【】,迷迭香酸撕及其盐,阿 魏酸 及其盐口等。 ..甾体及萜类化合物 张援虎【从小花琉璃草分离到了个甾体化合物:胡萝卜苷、,豆甾烷一,.二酮、 .谷甾醇、.羟基一豆甾烯.一酮;另从石生齿缘草【中分离到豆甾醇。徐庆军四从民 族药倒提壶中分离得到三个三萜类化合物:,,,.四羟基齐墩果..烯..酸 ,,,.一.. ,....葡萄吡喃糖基一仅,,, 一四羟基齐墩果一烯一酸一一,,, .... ,,.二羟基齐墩果..烯.,,.三酸,??. 为新化合物,命名为倒提壶酸,为首次从倒提壶属植物中分离 ..,,. 得到。王俊‘从琉璃草中分离得到齐墩果酸;并从紫草中分离得到的的苯型及苯醌型的 单萜类成分:软紫草萜酮,软紫草萜醇,软紫草呋喃萜酮 ,紫草呋喃萜~【】。 ..木脂素类化合物 索茂荣‘在石生齿缘草乙酸乙酯部位分离得到个新的木脂素糖酯类化合物。结构 为:环”一’:’一’,’一,一二羟基.,,,’一三甲氧基一,’.环木脂素..烯.,’.二羰 基.?.乙酰基蔗糖苷,环”’:’一.’,’.,’.二羟基.,.二甲氧基.,’一环木脂素 一一烯.,’.二羰基.蔗糖苷,环”一’:’.’,’一,’.二羟基.,.二甲氧基.,’.环木 脂素.一烯一,’一二羰基一?一乙酰基蔗糖苷。西南交通大学硕 士研究生学位论文 第页 ..生物碱类化合物 紫草科类植物中所含生物碱类型主要为吡咯里西啶类,有近种单体,主要 集中分布在琉璃草属、蓝蓟属川、天芥菜属 、勿忘草属四?如‘、沙引草属【】。 ..脂肪酸及其他类化合物 在紫草科植物中分离得到月桂酸、十八烷酸、十九烷酸、三十二烷酸、 十四烯酸甘油酯、十六碳酸甲酯、咖啡酸十八烷醇酯、咖啡酸二十烷醇酣、阿魏酸二 十四酯,二十四酸二十四酯‘、二十四烷酸、二十九烷副、’,’,.二羟基苯基壬酸 乙酯、阿魏酸辛酯【】、葡萄糖、尿嘧啶、尿囊素、尿素‘删等。 .紫草科药用植物药理活性研究 目前对紫草科药用植物的药理作用研究主要集中在对软紫草属新疆紫草 .和内蒙紫草以及紫草属中紫草 的研究,结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明其药理活性显著,具有抗炎、抑菌、抗 癌、抗病毒、抗衰老、抗生育、保肝、止血、舒张血管等作用。 ..抗炎作用 .抑制活性炎症是由于损伤因子导致具有血管系统的活体组织损 伤时,机体 组织产生的一系列防御性反应。炎症的病理过程常见而又重要,炎症反应可激活肾上腺 素受体系统,在炎症阶段,炎症白细胞活性升高.倍,磷酸二酯酶活性升高 .倍,腺苷酸环化酶浓度减低.倍。由此可推测炎症症状发生与磷酸二酯酶 活性升高是有关系的。,属于磷酸二酯酶家族,主要分布在上皮细胞、肥大细胞、 嗜酸粒细胞、巨噬细胞等炎性细胞内。赵海青【】测定了从新疆紫草内分到的个羟基萘西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 醌类化合物对的抑制率。发现去氧阿卡宁的值最小为. /,与阳性药 抑制活性相当;,,二甲基丙烯酰阿卡宁值最大为. /,抑制活性 最弱;乙酰阿卡宁的值为. /:阿卡宁的值为. /。而研究表 明抑制剂对红斑狼疮、败血症、皮肤疾病等慢性炎病疗效显著。因此此研究为开 发新的治疗慢性炎病的药物提供了依据。 .抗炎镇痛作用 赵雪梅研究由二甲苯引起的小鼠耳壳发炎水肿时发现,紫草提 取物可以抑制小鼠耳部肿胀,抑制率达到.%;进一步研究表明,紫 草的抗炎作用与 提取物浓度正相关,并且紫草的纯提物效果好于水提物,说明紫草抗炎有效成分主要是 脂溶性物质。 .抗体表溃疡溃疡是由于粘膜表面组织或皮肤局部缺血、缺氧、创伤,导致毛细 管通透性增高,形成炎症,继而炎症使损伤加重,成为溃疡。孙文唰将狼紫草全草水 煎之后,浓缩成 /的狼紫草水提物,然后用醋酸致小鼠皮肤溃疡模型后,涂抹狼紫 草水提物,天后,小鼠渗出液减少,出现结痂,溃疡愈合。另用醋酸造小鼠急性腹膜 炎模型后,采用高中低剂量灌胃治疗,发现高剂量组对小鼠毛细管通透性有明显抑制作 用,并且发现小鼠扭体反应随着剂量的增大而减少。这些研究表明狼紫草的水提液可以 促进溃疡愈合,并且具有抗炎镇痛作用,可能是由于狼紫草水提液降低了毛细血管通透 性。 ..抑菌作用 .提取物抑菌活性研究杨荣【】研究了密花滇紫草 、露蕊滇 . 紫草 .、滇紫草 .、黄花 软紫草..、软紫草. 、紫草 六种药材的体外抑菌试验,发现这六个品种的水提和醇提液对金黄色葡 萄球菌均有抑制作用,并且以软紫草的抑制作用最好。李惠型采用滤纸片法测定滇紫 草 和新疆紫草 、露蕊滇紫草西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 .提取物的抑菌活性,发现三者对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌 中度敏感;对革兰氏阴性菌大肠杆菌和变形杆菌也为中度敏感;露蕊滇紫草和滇紫草的 提取物对.溶血性链球菌为高度敏感。说明这三种植物的提取物对革兰氏阳性菌和阴性 菌的抑菌效果良好。 .单体化合物抗耐药菌活性研究 叶型研究了新疆紫草对含抗耐药活性的金黄 色葡萄球菌株的活性。试验菌株为:标准金黄色葡萄球菌;耐大环内酯含 大环内酯外泵蛋白金黄色葡萄球菌;多药耐药含外泵耐药 基因金黄色葡萄球菌 ;耐四环素含四环素外泵蛋白金黄色葡萄 球菌;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和。研究发现粗提 物对 有明显的抑制作用,仅为 上/。进一步的研究发现,这是由于在 新疆紫草中紫草萘醌单体及其衍生物含量较高,起直接抗耐药活性;通过对粗提物分离 纯化,发现化合物..浓度为 菌株的活性良好,其抑制 ./时,对 效果是阳性对照的倍;化合物..抑菌效果与相近;化 合物??和..对菌株也有较好的活性,值均为 /。紫 草萘醌二聚体类化合物。.对、 、菌株均有一定的抑 菌活性,值分别为、、 咖。对混合物..主要成分是紫草萘醌二 聚体类物质活性测定,发现单独试验时对六种抗耐药性菌株均无活性,但是其与 混合试验时却具有抑菌活性,随着浓度增大,抑菌活性反而低, 这说明..产生活性可能是抑制了外泵机制,其作用机理需要进一步的研究。 ..抗肿瘤作用 .甲基丙烯酰紫草素的抗肿瘤作用 甲基丙烯酰紫草素在新疆紫草中含量丰富,研 究发现新疆紫草根部提取的多种萘醌类物质都可以抑制肿瘤细 胞?。邵振俊‘研究了 甲基丙烯酰紫草素对.人胃癌细胞的抑制作用,发现随着药物浓度的增大, 一细胞的增值受到抑制,并随着时间的推移,抑制作用加强。继而采用免疫组西南交通大学硕士研究生学位论文 第 页 化法研究了甲基丙烯酰紫草素对肉瘤荷瘤小鼠.的影响,发现在小鼠体内, 甲基丙烯酰紫草素给药浓度为. /时,.亚单位有棕黄色颗粒出现,与对 照组比较具有统计学意义,并随着药物浓度增加,黄色颗粒越多,即..的表达 一 进一步受到抑制。.是一类核转录因子,常以/二聚体形式存在,当细胞受 到刺激时,.进被激活,与其抑制物分离,由细胞浆转入细胞核,与靶基因启动 子上的位点结合,传递信息,抑制癌细胞生长,转移例。甲基丙烯酰紫草素可以下 调?的表达,故其诱导细胞凋亡的分子机制可能是抑制了?.的活性。 .紫草素抗肿瘤作用 癌细胞发生的机理目前主要有表型遗传修饰改变假谢和 细胞突变学说,后者又包括非整倍体假谢,“和基因突变学谢。等认为, 由于细胞内基因突变,抑癌基因突变失活,癌基因突变激活,而引起癌细胞大量增殖, 形成肿瘤。目前抗癌药物作用机制主要有:与直接作用干扰其复制等功能, 抑制蛋白质合成,干扰核酸合成代谢,组织纺锤丝形成等。张志泉‘研究紫草素对体外 细胞的生长影响时发现紫草素对该细胞有抑制作用,当紫草素浓度为 /, 作用后,抑制率接近%。紫草素对细胞的影响呈现一定的时效剂量依赖性。 吴振】发现紫草素对多种肿瘤细胞具有显著的生长抑制作用,其中包括: 鼠纤维瘤细胞、.人黑色素瘤细胞、人宫颈癌细胞、.人乳腺癌细 胞。在.细胞中,紫草素上调蛋白的表达水平,导致蛋白表达的上调, 促进线粒体释放细胞色素,激活,激活激酶,参与细胞调控,诱导细胞 凋亡。细胞凋亡在肿瘤的发生中起着重要的作用【,蒋英丽研究紫草素对人大肠癌细 胞的作用时,采用法测定细胞生长抑制率,发现当 ./的药物作 用天,抑制率可达到%,当./的药物作用天时,抑制率为.%,天后为 .%。采用琼脂糖凝胶电泳分析时发现,当浓度为. 上/的紫草素对 细胞作用天后,便出现梯形条带,提示细胞核降解。采用流式细胞仪分析时发 现随着作用时间的增长,凋亡细胞的比例增大,而期的细胞比例下降,说明新疆紫 草素可能是选择性诱导期细胞凋亡。当用法检测凋亡细胞时,发现 ./的第 页 西南交通大学硕士研究生学位论文 新疆紫草素处理细胞天后可以看到晚期凋亡细胞,由此可知新疆紫草素抗肿瘤作用的 机制可能是诱导肿瘤细胞凋亡。 研究发现新疆紫草素对拓扑异构酶选择 性地抑制‘,促使形成酶.复合物,最终导致基因不能转录而引起细胞死亡。因引 起细胞凋亡的因素很多,新疆紫草素对肿瘤细胞诱导凋亡机制还需深入的研究。 林江研究了新疆紫草素对细胞宫颈癌细胞、小鼠胶质瘤细胞、 人舌鳞癌细胞体外生长的抑制作用。发现紫草素对这三种细胞的抑制作用 均比较明显,当紫草素浓度为 后对细胞的抑制率为%;当紫草 ./时, 素浓度为 ./时,对细胞的抑制率为.%;当紫草素浓度为 ./时,对 的抑制率为%。这些细胞都随着药物浓度的增大和作用时间的增长,抑制率 相应的增大。经观察发现实验组的三种细胞受药物影响后细胞出现了死亡的前期征兆, 在结构和形态上都发生了较大的变化。细胞同细胞、一 细胞一样,细胞 数量减少,细胞生长缓慢,并且在细胞内出现空洞,只是空洞比后二者多,这可能是由 于细胞的细胞核受到紫草素作用,导致细胞凋亡;而 和细胞的形态 不再单一,形状各异,细胞膜皱缩,细胞的突起缩短,这可能是由于细胞质受到紫草 素作用,导致细胞坏死。研究细胞平板克隆时发现,细胞和 的克隆形成 率比细胞高,三种细胞都随着药物浓度的增加,细胞克隆率降低, 下降幅 度最大,说明紫草素抑制细胞形成克隆的作用明显。 陈志‖研究紫草素对白血病细胞.增殖的影响,发现紫草素在测定浓度~ ./时,作用 后抑制率为%; “/范围内对该细胞都有抑制作用,浓度为 .%。 在 后的.%增长至后的 /时,随着时间的增长,细胞凋亡率也也由 进一步研究表明,紫草素可下调.细胞的.基因表达,一表达下降,线粒体 调控凋亡相关活性物质释放,激活而促进凋亡。 王雪宝【】研究了新疆紫草素对荷瘤小鼠肝癌的抑制作用,发现当新疆紫草素浓 度为. /时,对小鼠肝癌的抑制率为.%,抑制作用明显;淋巴细胞转化率为西南交通大学硕士研究生学位论文 第 页 .士.,细胞活性为.士.,与阴性组对照,显著提高,说明紫草素不仅可 以抑制肝癌肿瘤细胞且同时提高机体免疫力。 .萘醌类化合物抗肿瘤耐药作用 癌症患者的化疗治疗中经常会出现肿瘤耐药或 肿瘤多药耐药现象,肿瘤耐药是指肿瘤细胞对某种抗肿瘤药物产 生抗药性后,对其他结 构和不同作用机理的抗肿瘤药物仍然敏感;而多药耐药性是指肿瘤细胞对某种药物产生 耐药性后,对其他不同的药物也产生耐药。耐药机理最常见的是膜转运蛋白将药物从细 胞内泵出细胞外,从而导致细胞内药物浓度下降至低于杀死癌细胞的浓度阂值从而不能 杀死癌细胞。宣嫣艳【在研究七种天然紫草萘醌类物质对癌细胞的耐药性时发现,常规 的化疗药物长春新碱和一线化疗药物柔红霉素、紫杉醇对药敏细胞和 ./的效果很好,但是对耐药细胞/和./的耐药数有 倍,效果很不理想;而柔红霉素、紫杉醇的耐药数也有几百倍。据文献报道,大多数常 用的临床化疗药物,如米托蒽醌、柔红霉素、紫杉醇、长春新碱等都是.糖蛋白.、 和的底物或诱导剂【彤。研究七种天然紫草萘醌类物质.甲基一正丁酰 紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、异戊酸紫草素、,.二甲基丙烯酰紫草素、乙酰 紫草素均对药敏细菌杀伤效果好,对耐药细胞没有耐药性耐药倍数约为。说明 这些化合物不同于临床常用的化疗药物,他们不是膜转运蛋白的底物,对肿瘤细胞的遏 制不受膜转运蛋白的影响,可以发挥抗癌药效。七种化合物中.甲基一正丁酰紫草素的效 果最好,这可能是由于其侧链基团最大;并且含有双键的,一二甲基丙烯酰紫草的抑制 作用比不含双键的化合物作用强,这说明这七种化合物的构效会影响抗癌活性,这 为以后合成开发利用此类化合物提供了一定的依据。进一步研究发现,这七种抗癌化合 物诱导了细胞发生坏死样程序性死亡,发现给药后细胞核清晰可见,但是 线粒体损坏,细胞浆内出现自噬小体,这是典型的细胞坏死特征。 王英丽】研究了新疆紫草萘醌类色素对体外培养的.卵巢肿瘤细胞系、 人宫颈癌细胞系影响,发现能够明显抑制.和的生长,而 对对照组的正常细胞成纤维细胞系和人胚。肾没有影响,说明新西南交通大学硕士研究生学位论文 第 页 疆紫草萘醌类色素能够诱导生殖系肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有毒性,从而抑制其 体外增殖。 .紫草粗提物抑制癌细胞作用 王力】研究紫草粗提物对癌细胞抑 制作用,发现可 以有效的抑制肺癌细胞烈.的生长,并引起癌细胞的凋亡。进一步实验表明,由 于粗提物结合,与..形成竞争关系,导致降解。从粗提物中得到的单 体化合物其抑制活性最强,为.× ‘,发现其与..存在着相类似 的化学结构,其分子机理是结合于 ,使构型改变,从而抑制其异 源二聚体如,,乳讯和同源二聚体的活性,导致降解。表明紫草中 抗癌活性成分抑制了转录激活,达到抗癌效果。 .乙酰紫草素注射液抑瘤作用 曾云跚研究了乙酰紫草素注射液对小鼠移植瘤 肉瘤细胞株的影响,发现低中高剂量对小鼠移植瘤的生长都有明显的抑制。高剂量 组达%,显微观察发现肿瘤组织内有大量坏死的肿瘤细胞,提示乙酰紫草注射液可以 直接杀死肿瘤细胞,具有研发价值。缪世坤‘】研究发现乙酰紫草素注射液高剂量 /可以明显抑制小鼠肺癌肿瘤体积和重量的增长,抑制率达到了.%。 ..抗病毒作用 买尔旦.马合木提删在研究新疆紫草水溶性部分体外抗的药效活性时发现,各 样品都具有一定的抗病毒作用。其中抑制率大于%时,最小浓度仅为. /。 陈瑞琪‘将从角膜炎患者弃用医疗材料中分离得到的.病毒单纯疱疹病毒型 感染乳兔肾细胞,将紫草多糖维持液稀释被感染的乳兔肾细胞,培养观察发现抑毒指数 为~,表明紫草多糖有抗病毒作用。 ..抗衰老作用 随着年龄的增长,衰老的发生是必然的,解释衰老的理论有端粒学说、体细胞突变 学说、自由基学说等。许今博研究了新疆紫草提取物对野生型黑腹果蝇寿命和小鼠第 页 西南交通大学硕士研究生学位论文 .半乳糖亚急性衰老模型的影响发现将新疆紫草脂溶性组分分成低、中、高三个剂量组 含生药量依次为.%,.%,.%,水溶性组分低、中、高剂量组.%,.%, .%,将各组剂量添加入果蝇培养基内,逐日观查果蝇死亡数目,结果脂溶性高剂量 组.%最长寿命为.士.,水溶性高剂量组.%的果蝇寿命为.士. ,二者高剂量均可以延长果蝇的最高寿命。采用.半乳糖致亚小鼠急性衰老模型, 随后灌胃注射脂溶性提取物和水溶性提取物次/,灌胃容积为. /,后 测量.超氧化物歧化酶和.谷胱甘肽过氧化物酶、、和 值。发现在脂溶性和水溶性提取物的高剂量组中,清除自由基最主要的抗氧化酶 ?和.活性升高。丙二醛是自由基与脂质发生过氧化反应 的产物,其能够反应机体脂质过氧化受损伤的程度。尿素氮是。肾功能主要指标 之一,当肾功能损害时,血尿素氮浓度增加。实验结果显示水溶性高剂量组和脂溶性各 剂量组都可以使小鼠和降低。可促进神经递质的分解,降低记忆,因 此活性可以作为研究脑衰老的重要指标【】,实验结果显示水溶性提取物各剂量组 能使活性降低,起到抗脑老化的功效。新疆紫草脂溶性提取物和水溶性提取物抗 衰老的物质基础可能与紫草中萘醌类物质和酚酸类多糖成分有关。 ..抗生育作用 .紫草抗生育作用 马保华用同位素放射免疫法测定黄体生成素和 卵泡激素水平,连续灌胃紫草天后,发现血清中和浓度显著降低, 大 鼠卵巢内无成熟卵泡,基本为原始卵;停药合笼天后发现对照组%已经怀孕生仔, 给药组的怀孕率为;天后给药组%的大鼠恢复了生育力。表明紫草干扰垂体减少 和的分泌,继而影响卵巢的周期性变化,卵泡不能发育成熟,造成不孕,停药 后,卵泡正常发育,紫草对大鼠的抗生育作用是可逆的。 唐丹凤【叼取大鼠卵巢内颗粒细胞作为实验材料,发现紫草 .紫草多糖抗生育作用 多糖对颗粒细胞生成和有抑制作用,当紫草多糖含量为.班时,可以明显抑第 页 西南交通大学硕士研究生学位论文 制在人绒毛膜促性腺激素刺激下颗粒细胞生成,表明紫草多糖是直接作用于颗粒细胞 ?.促性腺激素的靶细胞,从而抑制人绒毛膜促性腺激素,促使甾体激素的生成;而抑制 作用具有时效性,说明紫草多糖的抗生育作用也是可逆的。 .紫草提取物抗生育作用 杨柳‘将正常健康孕妇的绒毛组织体外培养,.紫草 乙醇提取物培养。发现培养液中含量占基础值的百分比随着培养时间的延长 后下降至.,说明紫草乙醇提取物可以明显抑制人绒毛组织分泌。宋林丽【发现 紫草提取物可以抑制以二氢吡啶建立的雌性小鼠和新西兰兔的真性性早熟模型下 丘脑一垂体.性腺轴的功能,从而起到干预性早熟作用;推测可能对骨骺板的提早闭合也 有抑制作用。 ..肝损伤保护作用 刘烈明研究了新疆紫草提取物对种实验性小鼠肝损伤的保护作用。将新疆紫草粉 碎后用正己烷回流提取后,滤液浓缩,滤渣保留待用,酸碱处理,得到脂溶性物质.。 将滤渣用%丙酮再次回流提取,得到水溶性提取物一?,将二者各自配成高低剂 . . 量组,高剂量组? /, /,低剂量组 /,? /。 将各实验药物作用于分别用.、酒精、、/引起肝损伤的实验小鼠。 实验结果显示,各实验药物对这种模型小鼠都有较好的肝损伤保护作用,综合各项指 标发现新疆紫草脂溶性提取物优于水溶性提取物.。这为以后进一步研 究新疆紫草抗肝损伤有效成分提供了依据。 ..止血作用 努尔艾买提江对新疆紫草止血作用和机理进行了探讨。将新疆紫草用正己烷、乙 酸乙酯、%乙醇、水提取后,配成高中低三个剂量组灌胃给药,采取小鼠断尾出血记 录出血时间,发现乙酸乙酯部位时问缩短率会随着剂量的增大而增大;水部位的时间缩 短率最大为.%。再对乙酸乙酯部位提取物考察,发现其可以显著缩短小鼠凝西南交通大学硕士研究生学位论文 第 页 血时间,提高纤维蛋白原含量,升高小鼠血小板数量,缩短凝血酶时间。 血小板可以提供膜磷脂,激活凝血酶原,并且可以聚集、黏附,起到止血作用。推断新 疆紫草止血的机理之一可能是通过增加含量,并促进其转化为纤维蛋白,继而缩短 。 ..舒张血管作用 袁萱为探讨紫草素对血管的舒张作用,采用大鼠离体胸主动脉灌流技术研究。当血 。 管环稳定后,加紫草素溶液,发现当浓度为. /时,血管环张力仍 没有明显 变化,说紫草素对血管本身基础张力无影响。当经去甲肾上腺素、预收缩的 血管,加入紫草素,发现在浓度为. /时,经预收缩血管的内皮完整、 去内皮血管环的张力也无影响,说明紫草素对由于细胞内钙离子释放导致血管的收缩无 影响;对经预收缩的去内皮主动脉血管无影响,但是具完整内皮的主动脉血管明显 舒张,说明紫草素主要是依赖完整的血管内皮诱导血管舒张。进一步研究发现鸟苷 酸环化酶抑制剂、氧化氮合酶抑制剂、吲哚美辛环氧合酶抑制剂都能 够抑制紫草素的舒张作用,但并不完全,说明紫草素对血管的舒张作用具有其他途径 。 .紫草临床应用研究 黄素芳‘在治疗皮肤溃疡患者时,结合敷料负压引流技术,将紫草油纱布覆盖于患 者外伤创面,疗效显著,经临床观察 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 ,紫草油毒性低,具有一定止痛效果,并且可 调节新陈代谢,促进上皮组织再生,继而减少疮面感染。江文忠叫 将紫草 、白 芷 、冰片 、麻油 、金银花 、蜂蜡 ,制成紫 草油纱布,治疗烧伤患者,发现紫草油治疗组比对照组的感染率低.%,创面愈合时间 提前一天。长期临床经验表明,复方紫草油具有生肌止痛、活血化瘀、清热解毒的功能, 此正为外伤辨证治疗要点。页 西南交通大学硕士研究生学位论文 第 王彩云将复方紫草油滴入患者耳道,并按揉耳屏,使其进入中耳腔。个疗程后 天为一疗程,治疗组有效率.%,其中,好转.%,治愈例子,占.%; 无效例,占.%。而对照组总有效率.%,其中,好转.%;治愈例,占.%; 无效例,占.%。对照组平均治愈时间为天,而治疗组仅为天。紫草油对急 性化脓中耳炎的疗效是显著的。 药物性静脉炎属于血栓性浅静脉炎,由于药物的理化因素或者浓度过高导致的渗透 性损伤,使局部血管缺氧而发病。将复方紫草液沿静脉局部外敷、对照组为%硫酸镁 粉外敷。发现治疗组总有效率为.%,显著疗效为%。而对照组总有 效率为.%, 显著疗效为.%,二组间差异显著,临床经验表明复方紫草液对药物性静脉炎疗效良 好,且无毒副作用‘。 紫癜性肾炎是由过敏性紫癜导致肾脏损害的疾病,王丽华‘让患者口服紫草汤。治 疗结果显示治疗组有效率%,无效例,治愈例;对照组有效率%,无效例, 治愈例。过敏性紫癜性肾炎目前仍以对症治疗为主,需及早诊断治疗。 潘强‘对手术切口感染患者随机分为两组,治疗组患者切口处涂抹紫草膏,对照组 根据患者实际情况选择适宜的抗生素进行治疗。治疗结果显示治疗组例中天内有 例治愈,而对照组例中天内有治愈,紫草膏对外科手术感染治疗效果显著。 刘伟兰【对门诊宫颈糜烂患者例进行治疗,治疗组采用冷冻治疗后敷加味紫草 油,而对照组仅为冷冻治疗,治疗结果显示治疗组总有效率为%,名患者中有 人痊愈,仅人无效,占%;而对照组总有效率为%,名患者中人痊愈,人 无效,占%,说明冷冻治疗后辅以敷加味紫草油可以提高患者的痊愈率,痊愈时间也 缩减,可以更好的消减患者疾苦。第 页 西南交通大学硕士研究生学位论文 第章藏紫草化学成分的研究 .引言 藏紫草为紫草科滇紫草属植物长花滇紫草 .. 及细花滇紫草 ..的干燥根,分布 于西藏东部和南部。藏紫草为常用藏药,收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》藏 药第一册...;性甘味?,可清热?血、养肺、抑菌之效;在我国有悠 久的用药历史,常用于肺炎、结核空洞、高山多血症对肺病、多血病症疗效显著;有 个成方制剂收入藏紫草药用。藏紫草的药用价值明显,但至今尚未见其化学成分的研究 报道,因此本文拟对藏紫草化学成分进行系统的研究,为其开发利用提供实验依据。 .实验部分 ..实验仪器及材料 仪器: 核磁共振仪.?为内标 薄层扫描仪 瑞士卡玛公司 型公司 旋转蒸发仪 型数控超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司 材料: 分离材料:羧甲基纤维素钠,柱层析硅胶.目,薄层层析硅胶青 公司生 岛海洋化工厂出品,?瑞典 产 试剂:萃取用试剂石油醚,乙酸乙酯,正丁醇为工业纯,洗脱用试 剂石油醚,氯仿,二氯甲烷,乙酸乙酯,丙酮,甲醇为工业纯重蒸。第 页 西南交通大学硕士研究生学位论文 显色剂:%硫酸乙醇试液、磷钼酸试液、试液、碘单质。 药材:藏紫草购自西藏金丹,经西南交通大学生命科学与工程学院宋良科副教授 鉴定为藏紫草,为紫草科滇紫草属植物细花滇紫草 ..的干燥根,留样标本现保藏于本学院室。 ..提取分离 取藏紫草的干燥根埏,粉碎过目,倍体积量的%工业乙醇冷浸提取次, 不定期搅拌,滤过,滤渣加入倍量体积%业乙醇,室温超声 过滤,合并 滤液,药渣弃去,将滤液用旋转蒸发仪于?减压浓缩得到总浸膏曲,取 浸膏于?的热水中分散悬浮。依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,当萃取液至 无色即可停止萃取,减压浓缩,回收溶剂,分别得到石油醚部位浸膏.曲、乙酸 乙酯部位浸膏.曲、正丁醇部位浸膏蓟,提取流程图见图.。 藏紫薯干燥根 粉碎,%乙醇 ?冷浸提取次 滤液 药渣 超士~过’滤 滤; 总浸膏 依次用石油醚、乙酸乙酯、 正丁醇萃取 ? 浸膏 石油 图.总浸膏制备的流程图西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 取 石油醚部分浸膏, 硅胶拌样,硅胶柱层析,石油醚:丙酮::, 梯度洗脱,经薄层色谱检测合并相同的组分,共得到个部 分..~..。 . .. 经石油醚:丙酮:重结晶,得到无色针晶,化合物,余下部分经 石 油醚:丙酮:,梯度洗脱,每 作为一个馏分,得...,经石油醚重结 晶得到 白色颗粒结晶,化合物。 . .. 经硅胶拌样,硅胶柱层析,石油醚:丙酮::,得到 一氯仿:甲醇:柱色谱反复纯化后得到化合 ..?..?,..?经 物. 。石油醚部位分离流程图见图?。 .. 氯仿:甲醇: 小物 图石油醚部位浸膏分离流程图 取 乙酸乙酯部分浸膏, 硅胶拌样,硅胶柱层析,氯仿:甲醇::, 梯度洗脱,每 作为一个馏分,薄层色谱检测合并相同的组分,共 得到个部分 .】阡.、。 . . 作为一 ,硅胶柱层析,石油醚:乙酸乙酯::,梯度洗脱,每 个馏分,得.??.?,.? 经氯仿:甲醇:重结晶后得化合物. , .?经丙酮重结晶得化合物. 。 . . 作为一 硅胶柱层析,石油醚:乙酸乙酯::,梯度洗脱,每 个馏分,得..~..,.?经甲醇重结晶后得到化合物. 。第页 西南交通大学硕士研究生学位论文 . . 洗脱液加滴冰醋酸, 硅胶柱层析,石油醚:丙酮::,每 梯度洗脱,每 作为一个馏分,得到..一..。..经甲醇重结晶后得 到化 合物. 。 . . 洗脱液加滴冰醋酸,梯度 硅胶层析,氯仿:甲醇:?:,每 洗脱得到化合物 。 . . 洗脱液加滴冰醋酸, 硅胶层析,二氯甲烷:甲醇::,每 梯度洗脱,每 作为一个馏分,得到.?~.,.经 一尹醇 。 柱色谱纯化后得到化合物. . . 洗脱液加滴冰醋酸, 硅胶层析,二氯甲烷:甲醇::,每 梯度洗脱,每 一氯仿:甲 作为一个馏分,得到?,.经 .甲醇柱色谱后, 醇:柱色谱纯化后得到化合物. 。.经 再经薄层层析硅胶氯仿:甲醇:减压抽柱纯化得到化合物 。分离 流程图见 图?。第页 西南交通大学硕士研究生学位论文 : 图乙酸乙酯部位浸膏分离流程图 ..化合物结构鉴定 化合物 .谷甾醇.,分子式为,无色针晶丙酮。硫酸乙醇 , :.,,. 显色为紫红色斑点。核磁数据?, .,.,,.,.,,.,.,,,. :.一,. ,,岗. ,.。, .,.一,.一,.一,.一,.一,. 一,.一,..,..,.一,.一, .一,.一, .一,.一,.一,..,第页 西南交通大学硕士研究生学位论文 ..,..,..,..,..,.., .一,..,.., ..。谱图中 .处 的双重峰,示为双键上的氢原子信号, .处的多重峰,示为与羟基 相连碳原子上的 质子信号。 .、.、.为个甲基峰。谱图中 .、.处表示, 位碳碳双键, .、.、.、.、.、.、.、.分别表示个甲基碳 信号,以上数据与文献报道基本一致,故确定该化合物为.谷甾醇, 其结构式如图 ?。 图化合物的结构式 化合物紫草素,分子式为,红褐色颗粒状粉末氯仿,核 :.,,,.,,, 磁数据., .,,.,,.,,.,.,,. ,.., .,,.’,.,,.,’.,.,,.’,. :.., ,,,.,,。, ..,..,..,..,.’,.., ..,..,.一’,..,..,..’, ..’,..’,..’。谱图中 .,,, .,,为两个酚羟基, .,,.,,.,,. .,,户. .,,.’ 为三个芳香质子信号, 为烯质子信号, 为连氧碳上的质子信号, .,,, .,,为两个甲西南交通大学硕士研 究生学位论文 第页 基质子信号, .,,. 为羟基上的质子信号。以上数据与文献【报 道一致,故确定该化合物为紫草素,其结构式如图.。图化合物的 结构式 化合物齐墩果酸 ,分子式芙,白色粉末氯仿, :.,, .砌反应阳性。核磁数据, .,.,,. ,.,.,,乒. ,.,., ,.,,.,,.,,户. 。, :..,..,..,..,.., ..,.一,.一,..,..,., .一,..,..,..,..,.., .一,.,..,..,..,.., .,..,..,..,..,.., .一。?谱图中 .,,. .~. 显示位有羟基取代; 之间有个甲基的质子信号; .处可见双键的碳上的质子信号。谱图中显示 该化合物有个碳信号,其中 .显示位有羟基碳信号, .处有一个 羰基峰; . 矛.的碳信号表明该化合物含有双键;以上数据与文献【报道一致, 故确定该化合物 为齐墩果酸,其结构式如图?。西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 图化合物的结构式 化合物苯甲酸 ,分子式为,无色针晶氯仿, , 显示个芳香质子信号:.,,.,. ,., ,.,,.,.,.,.,,.,. ,一。 ,显示七个碳信号,:.,.,.., 一,.一,..,.。以上数据与文献【垮艮道的数据一致,故确 定该化合物为苯甲酸,其结构式如图.。 图.化合物的结构式 化合物阿魏酸 ,分子式为,无色针晶甲醇, , :.,,. ,,.,,. , ,.,,.,. ,.,.,,. ,.,. ,,. ,一,.,,。., :.,.一,..,.,..,. 一,.,.一,..,..。谱图中 .,,. , .,,. 和 .,,., . ,一为苯环上的三个芳香质子信号,提示该化合物具有,,.三取代 的苯 环; .,,. 和 .,,. 是反式烯氢质子信号,西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 .,是甲氧基质子信号。谱图中 .、.、.、.、. 为五个信号; .、.、.是三个季碳信号,.为羰基信号,.为甲 氧基信号。以上数据与文献【报道一致,故确定该化合物为阿魏 酸,其结构式如图?。 图.化合物的结构式 化合物 胡萝苷,分子式为,灰白色无定形粉末, :. .反应阳性,反应阳性。., ,,.,,. ,..为糖基其它的信号。., 此: .., ..,..,..,.., ..,..,..,..,..,.., ..,..,.一,..,.一,.一, ..,..,.,..,..,.., ..,..,.一,.一’,.’,..’, ..,.一’,.一’,.一’,.一,.一。 谱图中 .显示烯碳质子峰,. 为环外双键:谱图中 .、 .为分子中不饱和双健,显示分子有..; .为葡萄糖环’上的碳信 号, . 为葡萄糖环?上的碳信号,以上数据与文献 】报道一致,故确定该 化合物为胡萝卜苷, 其结构式如图。西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 图化合物的结构式 化合物 山奈酚锄,分子式为,淡黄色粉末甲醇, , ,:.,,一,.,,一,.,,. ,.’,’,.,,. ,.’,’,.,。., :..,..,.,..,.., ..,..,.一,..,.一’,.一?, ’,..’,’,.’。谱图中 .和.处分别出现 相互偶合的双重峰,偶合常数为. ,提示其为’’系统,是黄酮 环’,’. 和’,’.信号; .和.处的两个信号为二氧取代黄酮环上两个问位质子信号, 】.为.位羟基活泼质子信号,故推断该化合物为环,.二氧取代黄 酮。与文献【 波谱数据对照,确定该化合物为山萘酚,其结构式如图.。图.化合 物的结构式 化合物 槲皮素? ..鼠李糖苷...仪.,分子式为 :.,,.?, ,黄色粉末甲醇, .,,. ,.’,.,,户. ,一’,.,,一,.,,,.,,.’’,.,,/. ,.”。. , :..,..,.,.., .?,.,..,..,..,.., .’,.’,..’,..’,..,..”, .一”,..”,..”,..?,..”。 谱图中.,,.,.,,.为环间位偶合质子信号;., ,一’,.,,. ,一’,.,,. ,.,为环 偶合系统,提示存在槲皮素黄酮母核; .,为中的信号; . ,,卢. ,.”为中的信号;”?谱图中 .、.、.、 .、.、.为中的信号; .、.、.、.、.、.为黄酮 .、 部分的环的信号; .、.、.、.、.为黄酮部分的环 的信号。以上数据与文献‘报道一致,故确定该化合物为槲皮素... 仅..鼠李糖苷, 其结构式如图.。图化合物的结构式 化合物咖啡酸,分子式为,淡黄色无定形粉末。. ,:.,,户. ,.,.,,. ,., .,,.,. ,一,.,,. ,.,., ,户. ,.。. ,:.., .., .,.,.一,..,..,.一, ..。.谱图中 .,,. ,.,,.,.第页 西南交通大学硕士研究生学位论文 .,,. 和 显示一组偶合系统,为三取代苯环上质子信号; .,,户. .,,乒. 和 为一组反式双键上质子信 号;”.谱图中 .为一羰基碳信号; .,.,.为三个季碳信号, 以上数据与文献‘垮艮道一致,故确定该化合物为咖啡酸,其结构 式如图.。 图.化合物的结构式 ..实验结果 运用,.等物理化学方法鉴定了个化合物的结构,包括个甾体 类、个萘醌类、个三萜类化合物、个黄酮类,个酚酸类,化合物结 构见表?。 个化合物分别为: 齐墩果 .谷甾醇., 紫草素, ,阿魏酸撕,胡萝 酸 ,苯甲酸 槲皮素一仅鼠李糖苷 苷, 山奈酚, 咖啡酸。化合物~均为首次从该 .一仅一, 植物中分离得到,结构如表.所示。 表.化合物的结构式的结构西南交通大学硕士研究生学位论文 第页西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 .小结 .柱层析等多种分离手段对藏紫草化学成分 本研究采用硅胶柱层析, 进行分离纯化,从中分离得到个单体化合物。运用.,化学方法进 行结构鉴定,鉴定了个化合物,分别为:.谷甾醇.,紫草素, 阿魏酸 齐墩果酸 , 苯甲酸撕, , 胡萝苷,山奈酚,槲皮素一?一一鼠李糖苷 一?一??, 咖啡酸。结构类型涉及甾体,萘醌, 三萜,酚酸,黄酮类等化合物。所有化合物均为首次从该植物中分 离得到。西南交通大学硕士研究生学位论文 第页 第章藏紫草化学成分抑茵活性研究 .实验材料及仪器 ..实验样品 藏紫草粗提物..项下的醇提总浸膏、石油醚萃取物、乙酸乙酯 萃取物、正丁醇萃取物。..项下分离得到的化合物紫草素、 齐墩果酸、苯甲酸、阿魏酸、山奈酚、槲皮素.? 鼠李糖苷、 咖啡酸。 ..供试菌种 枯草芽孢杆菌 、金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 ,以上菌株均由本学院微生 物实验室提供。 ..试剂