高效液相色谱法研究黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍时成分含量的变化

高效液相色谱法研究黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍时成分含量的变化 高效液相色谱法研究黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍时 成分含量的变化 维普资讯 //0>. 2006年 3月 色 谱 V01(24N0(2 March2006 ChineseJournalofChromatography 168―170 高效液相色谱法研究黄连生物碱与吴茱萸黄酮 配伍时成分含量的变化 ， 吕秀阳 ， 许海丹 ， 吴平东 潘浪胜 (1(浙江大学材料与化工学院制药工程研究所，浙江 杭州310027;2(湘潭大学化工学院，湖南 湘潭41l105) 摘要:为了研究中药配伍过程中是否发生化学反应 ，先从单味药材中提取不同的组分或大类化合物，然后对其进行 配伍，用高效液相色谱法(HPLC)测定其在配伍前后的成分变化。实验采用HPLC对黄连生物碱与吴茱萸黄酮配 伍后的各色谱峰进行检测和分析，结果表明黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍后色谱峰具有加和性，各成分的相对峰 面积未见明显变化 ，且未见新的色谱峰产生，说明黄连生物碱 与吴茱萸黄酮配伍后没有发生化学反应。 关缱词:高效液相色谱法;黄连生物碱;吴茱萸黄酮 ;中药配伍 中图分类号:0658 文献标识码:A 文章编号:1000― 8713(2006)02―0168―03 栏 目类别:研究论文 StudyOn ContentVariation ofChemicalC0nstituentsDuring Combination ofRhizomaCoptidisAlkaloidswithFructus EvodiaeFlavonoidsbyHighPerformanceLiquidChromatography PAN Langsheng ，LU Xiuyang，XU Haidan ，WU Pingdong ‘ (J(InstituteofPharmaceuticalEngineering， CollegeofMaterialsScienceandChemicalEngineering， ZhejiangUniversity，Hangzhou310027，China 2， Coliegeof ChemicalEngineering， XlangtanUnlversity，Xiangtan411105。 China) Abstract:InordertostudythecompatibilityofChineseherbaldrugs， amethodwasproposed byinvestigatingchemicalreactionswithcombinationofchemicalconstituentsormajorgroups ofchemical compoundsofChineseherbaldrugs(Thecontentvariationofchemicalconstituents during combination ofrhizoma coptidisalkaloidswith fructusevodiaeflavonoidswasanalyzed byhighperformnaceliquidchromatography(HPLC)(Theexperimentalresultssh owedthaton― lysmallchangesoftherelativepeakareasofdifierentchemicalconstituentswe reobservedand nonew peaksweredetected(Nochemicalreactionswereobserveddunngthecompatibilitytest ofrhizomacoptidisalkaloidswithfructusevodiaeflavonoids( Keywords:highperformnaceliquidchromatography (HPLC); rhizomacoptidisalkaloids; fructusevodiaeflavonoids;compatibility ofChineseherbaldrugs 黄连一吴茱萸药对的应用历史悠久，古方中有左 子复合物沉淀。彭明兴等 进一步得出了黄连与 金丸(6:1)、变通丸 (又 叫茱萸丸，1:1)和甘露散 吴 茱萸配伍后各种黄连生物碱 的溶出率与黄连用量 (2:1)等，均通过改变该药对配伍 比例而来。现代 成 相同比例下降的结论，并检出一个二药单煎时未 临床应用也证明，调整黄连、吴茱萸 的用量 比例，可 检出的组分。黄连与吴茱萸共煎时黄连中的生物碱 用于治疗多种与脾 胃功能失调有关 的疾病 ，如 胃脘 和吴茱萸 中的黄酮类物质是否发生了化学反应 以及 痛、腹痛、呕吐、呃逆、泄泻、便秘、痢疾、反酸嗳气、痞 发生了怎样的反应，目前还存在争议，同时，对吴茱 满等…。近年来对黄连一吴茱萸药对 的物质基础研 萸存在时黄连生物碱溶出率降低的原因尚未能给出 究得出了吴茱萸可使黄连生物碱的溶出率降低的结 一 个合理的解释。 论 ，其 中王浴铭等 推测黄连生物碱溶出率降 黄连和吴茱萸药材 中的化学成分过于复杂 ，直 低的原 因是其与吴茱萸中的黄酮类物质形成了大分 接研究两种药材配伍引起的化学反应 因影响因素众 收稿 日期:2005-0530 第一作者 :潘浪胜 ，男，博士 ，E-mail:panls97@126(corn( 通讯联系人:吕秀阳。男，博士，研究员，Tel:(0571)87952683，E-mail: luxiuyang@zju(edu(ca( 基金项 目:国家重点基础研究发展规划(973)项 目(G1999055405)，教 育部优秀青年教师资助 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 (教人司[2002]4O号)和高等学校 博士学科点专项科研基金项 目(20010335029)( 维普资讯 //. 第 2期 潘浪胜，等:高效液相色谱法研究黄连生物碱与吴茱萸黄 酮配伍时成分含量的变化 ??169?? 多而难度很大 ，且难以得 出一个 明确的结论 。为了 1(3(2 吴茱萸黄酮样品的制备 深入研究中药配伍时化学成分 的变化 ，本文提出了 吴茱萸用甲醇回流提取，滤液减压浓缩得浸膏， 一 个研究中药配伍过程中是否发生化学反应的新思 浸 膏加适量的水溶解，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙 路，即先从单味药材 中提取不同的组分或大类化合 酯 萃取。乙酸乙酯萃取物经聚酰胺柱色谱吸附，依 物，然后对不同组分或大类化合物进行配伍研究。 次用水、1O,乙醇、3O,乙醇、5O,乙醇、7O,乙醇、 本文先从黄连中提取黄连生物碱 ，从吴茱萸 中提取 95,乙醇梯度洗脱，将含黄酮的组分合并再经聚酰 吴茱萸黄酮，然后研究黄连生物碱与吴茱萸黄酮不 胺柱色谱吸附，以30,乙醇洗脱，得到含金丝桃苷 同比例配伍前后各成分的含量变化规律，以期为中 和异 鼠李素-3-O一半乳糖苷 的吴茱萸黄酮混合物。 药配伍理论提供现代科学依据。 提取纯化过 程中吴茱萸黄酮的定性鉴定采用聚酰胺 薄层色谱法。吴茱萸黄酮混合物用 10,乙醇配成 1 实验部分 1(13g,L的溶液。 1(1 仪器、材料与试剂 ‘ 1(3(3 供试品的制备 Agilent1100型高效液相色谱仪，配有 四元梯 黄连生物碱和吴茱萸黄酮溶液分别按 12:0，9: 度泵 、在线脱气机 、自动进样器 、柱温箱和紫外检 3，8:4，6:6，4:8，3:9，0:12的体积比配伍 (总体积相 测器 。 同)，配伍后的样 品密封于样品瓶 中于70?下加热 黄连 为毛茛科植 物味连 Coptischinensis 4h。在 HPLC分析前用 0(45 m微孔滤膜过滤 。 Franch的干燥根，吴茱萸为芸香科植 物吴茱萸 黄连 生物碱和吴茱萸黄酮采用的溶剂是 10, Evodiarutaecarpa(Juss()Benth的干燥近成熟果 乙醇(在纯水中溶解度较低)，受其沸点限制，采用 实，均由中国中医研究院中药研究所何希荣主管中 70?作为生物碱与黄酮配伍的反应温度。 药师提供并鉴定 。盐酸小檗碱 、盐酸 巴马汀和盐酸 各配伍样品在加热前后均为澄清溶液，无浑浊。 药根碱 3种对照品购 自中国药品生物制品检定所 ; 2 结果与讨论 黄连碱、金丝桃苷和异 鼠李素-3-O一半乳糖苷对照品 2(1 黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍前后的变化 由本实验室 自制 (制备方法见文献 [7])。 图 1是典型样品的色谱指纹图谱，其 中a为吴 乙腈 (色谱纯 ，德 国Merck公司)，十二烷基硫 茱萸黄酮未加热前的色谱 图，b为黄连生物碱未加 酸钠(SDS，进 口分装，广州市医药公司化学试剂玻 热前的色谱图，C为黄连生物碱与吴茱萸黄酮 6:6 璃仪器批发部 )，磷酸 (分析纯，浙江新安化工集 配伍样品经 70?下恒温加