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RT-PCR操作步骤

RT-PCR操作步骤 RT-PCR步骤一、总 RNA提取 1. 取 200mg组织，放到 1.5mlEP管中，加入 1mlTrizol剪碎。 2. 震荡 30s。 3. 加 0.2ml氯仿，剧烈摇动 30s，室温 3min。 4. 12000×g，4℃离心，15min。 5. 吸上层无色水相，移入另一 EP管中（约 0.5ml）。 6. 加等体积异丙醇，-20℃，30min。 7. 12000×g，4℃离心，10min。在管底部可见微量 RNA沉淀 8. 弃上清，加 75%乙醇 1ml，振荡。 ...

RT-PCR步骤一、总 RNA提取 1. 取 200mg组织，放到 1.5mlEP管中，加入 1mlTrizol剪碎。 2. 震荡 30s。 3. 加 0.2ml氯仿，剧烈摇动 30s，室温 3min。 4. 12000×g，4℃离心，15min。 5. 吸上层无色水相，移入另一 EP管中（约 0.5ml）。 6. 加等体积异丙醇，-20℃，30min。 7. 12000×g，4℃离心，10min。在管底部可见微量 RNA沉淀 8. 弃上清，加 75%乙醇 1ml，振荡。 9. 7500×g，4℃离心，10min。 10. 弃上清，用滤纸小心吸取残留液体，室温干燥 5-10min。 11. 沉淀溶于 20μlDEPC水，取 1μl加入 79μlDEPC水测 OD260/OD280 12. 计算浓度与纯度，-70℃保存。二、逆转录合成 cDNA第一链反应体系如下混匀快速离心一次反应条件如下 -20℃ 冰箱冻存三、PCR反应混匀快速离心一次反应条件如下 PCR产物-20℃冰箱保存取 PCR产物 8μl 加 5×Loading Buffer 2μl 2% 琼脂糖凝胶电泳 120V。 100mA 30min 溴化乙锭染色，凝胶成象仪成象并保存结果。

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