【doc】动物布鲁氏菌病试管凝集试验方法改进的探讨
动物布鲁氏菌病试管凝集试验方法改进的
探讨 兽医卫生
动物布鲁氏菌病试管凝集
试验方法改进的探讨
李璐
(辽宁省疫病预防控制中心,沈阳110000J DOI:10.3969/J.ISSN.1671—6027.2011.02.021
自Wright建立试管凝集试验(SAT)以来,布鲁 氏菌病(以下简称"布病")试管凝集试验一直是各 国用作诊断人和未免疫牲畜布鲁氏菌病的常规血 清学诊断方法,我国将其列为动物布鲁氏菌病诊断 的法定正式试验.SAT是一种特异,较敏感,稳定的 检测方法,可以检测人,畜血清中的抗布鲁氏菌 IgG,IgM,IgA3类免疫球蛋白,但主要检测的是 IgM和IgG2型抗体,且SAT检测IgM的敏感性较 高,因此可作为布鲁氏菌病的早期诊断,同时又可 用于牲畜布鲁氏菌病疫苗免疫后血清抗体的检测. SAT试验操作简便,判定容易,因此有广阔的应用 前景.然而,《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646—2002)规定的方法是早些年前根据当时的实 验室仪器设备条件所建立的,随着实验仪器设备的 不断发展与更新,布病试管凝集试验中我们以前用 的吸管现在已被操作更为方便准确的微量移液器 所取代,并且在使用移液器进行操作的前提下,可 减少一些不必要的操作,节省了稀释液与血清的 用量.下面就稀释血清的实验步骤对"
标准
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推荐
的方法"和"建议改进的方法"做具体比较.以羊 和猪为例,每份血清用4支凝集试管.
1按GB/1_18646-2002方法
第一管中加入1.15mL稀释液.第2—4管各加 入0.5mL稀释液.用lmL吸管取被检血清0.1mL; 加入第1管内,并混合均匀.混合方法是将该试管 中的混合液吸入吸管内,再沿试管壁吹入试管中, 作者简介:李~(1981~),辽宁人,硕士.主要从事猪病 和人畜共患病诊断检验.
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如此吸入,吹出34次,充分混匀后以该吸管吸混 合液0.25mL弃去.取0.5mL混合液加入第2管,用 该吸管如前述方法混合.再吸第2管混合液0.5mL 至第3管,如此倍比稀释至第4管,从第4管弃去 混匀液0.5mL.
2建议改进的方法
本方法有两方面的改进:其一是用移液器取代 吸管,其二是按比例将原方法中第一管的1250L 体系变成1000L体系,按如下操作:
第一管中加入920L稀释液.第2,4管各加 入500L稀释液.取被检血清80L,加入第1管 内.将移液器调至500L刻度吹打混合均匀,取 500L混合液加入第2管混匀.再吸第2管混合液 500L至第3管,如此倍比稀释至第4管,从第4 管弃去混匀液500L.
鹿,牛等血清的稀释可依本法按比例变成 1000L体系,为960L稀释液+40ixL待检血 清.
3讨论
两种方法的血清稀释度相同,从第1至第4管 的血清稀释度分别为1:12.5,1:25,1:50和1:100,只 是在稀释液和血清的用量上有所差异,阴阳结果的 符合率为100%.在大批量检测中,后者有明显的优 势,比前者减少了一次弃液,降低了气溶胶产生的 概率,操作快速,简便,并且能够减少肉眼衡量吸管 刻度的主观因素,结果更为稳定客观,更适合应用 于布病试管凝集试验.
建议将来对标准进行修订时考虑本"建议改进 的方法".
2年第2期?