b溶血性贫血的实验室检查

null溶血性贫血的 实验室检查溶血性贫血的 实验室检查Laboratory diagnosis of hemolytic anemia南方医科大学第一临床医学院 实验诊断学教研室 熊石龙 shilongxiong@yahoo.com.cn本章提纲本章提纲一、溶血性贫血定义和分类 二、溶血性贫血的确诊试验 三、溶血性贫血原因的实验室检查null贫血 外周血中单位容积内红细胞计数、血红蛋白含量或红细胞比容（Hct）低于正常下限。症状: 疲乏困倦； 气促；心悸；食欲差，腹帐、便秘； 头晕、眼花，嗜睡，精力不集中体征： 皮肤黏膜苍白； 黄疸； 肝脾肿大null 贫 血失血性贫血 缺铁性贫血 巨幼细胞性贫血 再生障碍性贫血 溶血性贫血null溶血性贫血：各种原因使红细胞生存时间缩短，破坏增多，骨髓造血代偿不足时发生的一类贫血红细胞破坏增加红细胞代偿性增加溶血：红细胞非自然衰老而提前遭受破坏的过程。 溶血性疾病：发生溶血而骨髓能够代偿，未出现贫血。 溶血性贫血：溶血程度超过造血代偿能力，出现贫血。定义null 溶血性贫血的分类 １．根据红细胞破坏的场所： 血管内溶血：在血流中被破坏 获得性因素和酶缺陷 血管外溶血：在单核-巨噬系统中被破坏 膜缺陷、珠蛋白异常、 脾功亢进 原位溶血： 在骨髓中被破坏 巨幼细胞贫血、急性白血病null 溶血性贫血的分类 ２．根据发生机制： 代表疾病膜酶血红蛋白红细胞 内在缺陷遗传性球形红细胞增多症 遗传性椭圆形红细胞增多症G6PD缺陷症 PK缺陷症珠蛋白生成障碍性贫血 异常血红蛋白病null溶血性贫血的分类红细胞外在因素损伤免疫因素非免疫因素AIHACASPCH 药物诱发的免疫性溶贫 新生儿同种免疫性溶贫溶血性输血反应 PNH微血管病性溶血性贫血心源性溶血性贫血 行军性血红蛋白尿症 砷化物、硝基苯、苯肼、蛇毒等中毒 溶血性链球菌、疟原虫、产气荚膜杆菌等感染null（一）显示红细胞破坏增加的依据 1 红细胞寿命缩短、破坏增加的检验 红细胞寿命测定； 红细胞形态改变； 血浆LDH测定 null2 血红蛋白代谢的检验 血浆游离血红蛋白测定(<40mg/L)； 血管内溶血的指征 血清结合珠蛋白测定 (500-1500mg/L)； 肝脏合成的α2糖蛋白，运输游离血红蛋白 血浆高铁血红素白蛋白试验； 不敏感，见于严重血管内溶血 null（二）显示红细胞代偿增生依据 外周血网织红增多； 外周血红细胞形态： 大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，Howell-Jolly小体、Cabot环、点彩红细胞等 增生性贫血骨髓象： 增生明显活跃，红系显著增生，粒系相对减少，巨核系一般正常 Howell-Jolly小体 Cabot环（二）显示红细胞代偿增生依据 外周血红细胞形态： 大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，Howell-Jolly小体、Cabot环、点彩红细胞等Howell-Jolly小体 Cabot环null 特 点 1.遗传性溶血性贫血常有贫血、黄疸、脾肿大的家族史 2.某些溶贫呈一定的地域性分布 3.化学因素所致常和患者所从事的职业有关 4.多种药物都可致溶贫 5.长期反复贫血和黄疸见于遗传性溶贫，自身免疫性溶血 性贫血亦常表现为时重时轻 6.恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病和SLE易并发AIHA， 人工心脏瓣膜置换术后常易致继发性红细胞破碎综合征null溶贫的实验室诊断1.确定是否为溶血性贫血 2.确定主要的溶血部位是血管内还是血管外 3.查找溶血原因，明确诊断nullHb代谢示意图 珠蛋白 血红素 铁 +卟啉单核巨噬系统 脾脏血管外溶血RBC血管内溶血血浆游离Hb肾脏血红蛋白尿游离胆红素 肝脏结合珠蛋白近曲小管上皮细胞肾阈结合胆红素粪胆原的肠肝循环含铁血黄素尿 Rous 实验胆汁粪胆原肠道血液肾脏尿胆原高铁血红蛋白清蛋白/血红素蛋白null 　 检　查 　　一．溶血性贫血的筛查检测 　　１．血浆游离血红蛋白测定 参考值 0-40 mg/L 意义：见于血管內溶血 　　２．血清结合珠蛋白检测 　　　 参考值 　0.5-1.5g/L 　　　　 意义：见于血管內溶血及严重的血管外溶血null　　３．血浆高铁血红素清蛋白检测 　　正常结果：阴性 　　意义：阳性见于严重血管內溶血 ４．含铁血黄素尿试验（Rous　试验） 　　血红蛋白在肾小管上皮细胞代谢为 含铁血黄素，脱落后铁染色法查出 正常结果：阴性 　　意义：阳性见于慢性血管内溶血 ５．红细胞寿命测定 正常红细胞半衰期为２５～３２天．溶血性 　　贫血時常＜１５天． 溶血原因 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 的有关检验溶血原因分析的有关检验一、红细胞膜缺陷的检验 二、红细胞内酶缺陷的检验 三、珠蛋白合成异常的检验 四、自身免疫性溶血的检验 五、阵发性睡眠性血红蛋白尿症有关检测一、红细胞膜缺陷的检测一、红细胞膜缺陷的检测null　　 　　（一）红细胞渗透脆性试验 　　 （erythrocyte osmotic fragility test) 　　目的：了解红细胞的渗透脆性（即抵抗力） 　　原理：红细胞皱缩红细胞膨胀甚至破裂高渗溶液等渗溶液正常null —红细胞对低渗溶液的抵抗能力 0.6 - 0.8%NaCl溶液——红细胞不破裂 0.42-0.45%NaCl溶液——部分红细胞破裂 0.35-0.30%NaCl溶液——红细胞完全破裂 NaCl0.6%对低渗溶液抵抗能力减小即RBC渗透脆性增加null脆性增高：遗传球（椭）、AIHA伴球形细胞增多（在0.52或0.72开始溶)。 脆性减低: 各型地中海贫血、缺铁性贫血、肝硬化及阻塞性黄疸等。结果： 正常人开始溶血0.4２～0.4６%，完全溶血0.28～0.32% （患者与对照相差0.04%以上即为阳性）。null（二）红细胞孵育渗透脆性试验 （erythrocyte incubated osmotic fragility test) 原理：红细胞在37 C孵育过程中，葡萄糖消耗增加，ATP贮备减少，钠泵受阻，钠离子在胞内聚集，红细胞膨胀破裂 参考值：未孵育 50%溶血 4.00 - 4.45 g/L NaCl溶液 37 C孵育50%溶血 4.65 -5.90 g/L NaCl溶液 临床意义： 用于轻型遗传性球形细胞增多症、遗传性非球形细胞溶贫的诊断和鉴别诊断null（三）自身溶血试验（及纠正试验） （autohemolysis and correction test) 原理：先天性非球形细胞溶血性贫血病人红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，生成ATP不足，不能维持钠泵，导致溶血增强。加入葡萄糖或ATP，观察溶血能否被纠正。参考值：正常人红细胞孵育48h小时后，溶血度<3.5%；加入葡萄糖或ATP后明显纠正，溶血度<1%nullI型：G6PD缺乏症； II 型：丙酮酸激酶缺陷症自身溶血试验及纠正试验结果（溶血%）二、红细胞酶缺陷的检测二、红细胞酶缺陷的检测null 葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏症 蚕豆病：患者多为儿童，在每年3-5月蚕豆成熟季节发病。起病急，在食新鲜蚕豆几小时至几天突然发作。表现为急性溶血伴有血红蛋白尿，治疗以输血、防治急性肾功能衰竭及肾上腺皮质激素为主。 (一) 高铁血红蛋白还原试验 (一) 高铁血红蛋白还原试验 正常时亚铁Hb 经亚硝酸盐氧化成高铁Hb，当红细胞内G6-PD含量正常时，Hb Fe+++ 可以还原为Fe++(红色)；G6-PD缺乏时， Hb Fe+++ 则不能还原为Fe++(褐色)，通过颜色变化来间接测知G6-PD含量是否缺乏。目的：该试验用来了解G-6PD活性，是一种间接的方法。红细胞对Glu的代谢有2个途径1、无氧糖酵解(90%)2、戊糖旁路途径(5-10%) 原理：nullG6PD高铁Hb还原酶G6PG6-PANADPNADPH还原型美兰氧化型美兰高铁Hb（Fe3+）为褐色氧合HB（Fe2+）红色结果：光电比色法 ，正常还原率＞75%，低于75%为异常， 提示G6PD活力↓，74 ～31%为G-6PD缺乏的杂合子（红棕 色），30%以下为显著缺陷的纯合子（为棕色— 目测比色法）。null（二）氰化物-抗坏血酸盐试验 原理: 6-磷酸葡萄糖 NADP GSH H202 氧合血红蛋白 6-磷酸葡萄糖酸 NADPH GSSG H20 高铁血红蛋白 结果:正常人标本呈红色 临床意义: 1.纯合子G6PD缺乏经1-3h温育后,变为棕色 2. 杂合子标本3-4h变成棕红色G-6PD（三）变性珠蛋白小体生成试验（三）变性珠蛋白小体生成试验又称“红细胞包涵体”、 “赫恩小体”、 “Heinz小体”、 “海因小体” 原理：G-6PD缺乏及不稳定Hb病患者 Hb易被氧化，其珠蛋白变性沉着于红细胞膜上。 抗凝血 +乙酰苯肼37℃温育2～4h充分的氧化 其Hb氧化成Heinz小体（用结晶紫、甲紫或煌焦油兰染色，油镜观察）　　　　null1. 正常人 ＜30% 2. G6P缺陷症、不稳定Hb、HbH病等常高于45%结果： 该小体为圆形或多角形色涵体，φ0.2～2um。 多位于红细胞边缘，一个红细胞含1～20个，多为1～2个，以含5个以上小体的红细胞计数null（四）G6PD荧光斑点试验和活性测定 原理: G6PD 使NADP还原成NADPH, 后者在紫外线照射下发出荧光 参考值： 正常人强荧光； 酶活性 5 U/gHb三、珠蛋白合成异常的检测三、珠蛋白合成异常的检测null血红蛋白的结构 原卟啉 血红素 Hb（四聚体） 铁 2条α链 珠蛋白：由4条多肽链组成 2条非α链正常人 HbA（22） 97% HbA2（22）1.5-3% HbF（2 2） 0.5-0.8%null 血红蛋白病 珠蛋白肽链量的不正常(地中海贫血) 血红蛋白分子结构异常(异常血红蛋白病) 遗传性溶血性疾病 (一) 血红蛋白电泳 (一) 血红蛋白电泳蛋白质的两性性质—是由氨基酸的NH+与COO- 决定的。 等电点—调节水溶液的pH，能使蛋白质的NH+与COO- 数目相等呈电中性， 此时蛋白质无电泳，在水中电解度小，并发生沉淀。 电泳：一个带电荷的离子或胶体颗粒在电场中可向一极移动。 原理：在一定的pH缓冲液中，缓冲液的pH大于Hb等电点，其带负电，在电场中向阳极移动；反之向阴极移动。 由于各种Hb珠蛋白肽链结构不同，其等电点不同，电泳方向和速度亦不同，故可分离出不同的区带，对区带进行电泳扫描，可进行Hb定量分析。null (+) H J K A G D E (-) 1. HbH增多是HbH病，为α-地中海贫血的一种；HbA2明显增高见于轻型β地中海贫血；HbF 明显增高见于中重型β地中海贫血。 2. 正常值：醋纤法（PH8.6）HbA 96%~98% ，HbA2 1.0%~3.1% ， HbF＜2%电 泳 结 果CAA2FA异常正常null（二） HbF （2 2）酸洗脱试验： 含HbF红细胞着色 （三）HbF定量测定（碱变性试验）: 2岁-成人 HbF<2%，>4%为异常， 重型 地贫30-90%， 遗传性胎儿血红蛋白持续存在综合症100% （四）HbA2定量测定 诊断轻型地贫的重要依据 （五）限制性内切酶谱分析四、自身免疫性溶血性贫血检验四、自身免疫性溶血性贫血检验自身免疫性溶血性贫血 （autoimmune hemolytic anemia,AIHA)自身免疫性溶血性贫血 （autoimmune hemolytic anemia,AIHA)1.病因：抗红细胞自身抗体的产生机制尚未阐明，有以下的解释：病毒感染可激活多克隆B细胞或化学物与红细胞膜相结合，改变其抗原性，导致自身抗体产生 2.分类： 本病可为原发性的，也可继发于结缔组织病、造血系统肿瘤、感染等。 按抗体反应最适温度分为温抗体型和冷抗体型，后者又分为冷凝集素综合征和阵发性冷性血红蛋白尿（一） Coombs试验（抗人球蛋白试验）（一） Coombs试验（抗人球蛋白试验） 原理：不完全抗体(IgG)，无法架接两个邻近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原相结合。 抗人球蛋白抗体是完全抗体,可与多个不完全抗体的Fc段相结合,导致红细胞凝集现象,称为抗人球蛋白试验阳性。 目的：检查红细胞表面的或血清中游离的不完全 抗体，用于诊断AIHA。直接Coombs Test(+)说明病人RBC表面上包被有不完全抗体间接Coombs Test(+)则说明病人血清中存在着不完全抗体nullCoombs血清（抗人球蛋白血清）（一）直接试验（一）直接试验１．正常人：阴性 ２．直接反应阳性，最常见于AIHA（其他有药物诱发的溶贫、阵发性冷性Hb尿、新生儿同种免疫溶血病、SLE、类风湿关节炎、恶性淋巴瘤等）。目的：测定吸附于红细胞表面的不完全抗体方法：结果：（二）间接试验（二）间接试验有过剩抗体时直接、间接均为阳性。 AIHA分三型：C3型12%，IgG型24%，IgG+C3型60%。冷凝集素病为IgM抗体。目的：测定血清中游离的不完全抗体方法：结果：间接阳性，见于AIHA，正常人为阴性。病人血清正常RBC抗 IgGnull(二)冷凝集素试验： 冷凝集素是一种可逆性抗体，在低温时可与自身红细胞、“O”型红细胞或患者同型红细胞发生凝集，当温度增高时，凝集块又消失 参考值：效价 140，反应最适温度4C 临床意义：阳性见于冷凝集素综合症null冷凝集素综合症 以中老年患者为多，寒冷环境有耳廓、鼻、手指发绀，但加温后即可消失。 除贫血和黄疸外其他体征少见 实验室检查： 有轻到中度贫血，反复发作有含铁血黄素尿。冷凝集素试验阳性 null(三)冷热双相溶血试验 阵发性寒冷性血红蛋白尿症（PCH）患者的血清中有双相溶血素，在0-4C时，溶血素与红细胞结合，并吸附补体，但不溶血；当升温至30-37C则发生溶血 参考值：阴性 临床意义： 阳性见于阵发性寒冷性血红蛋白尿患者五、阵发性睡眠性血红蛋白尿五、阵发性睡眠性血红蛋白尿阵发性睡眠性血红蛋白尿 (paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH)1.病因:红细胞膜缺陷引起的慢性血管内溶血 睡眠时加重 发作性血红蛋白尿 全血细胞减少症 阵发性睡眠性血红蛋白尿 (paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH)（一）Ham试验（酸化溶血试验） （acid hemolysis test, Ham’s test)（一）Ham试验（酸化溶血试验） （acid hemolysis test, Ham’s test) PNH是造血干细胞水平发生了突变，导致红细胞膜出现获得性缺陷，影响了膜的结构，使之对正常血清中的补体敏感而发生溶血，特异性高，是国内外公认的PNH确诊试验。目的：了解有无PNH补体敏感红细胞原理：PNH补体敏感红细胞可被正常人新鲜血清所溶解，但在酸性条件下（PH6.4～6.5）更为显著。 ① 要有补体存在② 有酸性环境这个试验关键有两点null（二）蔗糖溶血试验（sucrose hemolysis test) 原理：蔗糖溶液加强补体与红细胞结合，导致溶血增强。 临床意义： 敏感性最高，特异性差。是PNH的筛选试验。阴性常可排除PNH，阳性需再做Ham 试验。阳性率90-91%。 （三）蛇毒因子溶血试验 原理：蛇毒因子直接激活补体C3，旁路途径激活补体系统，攻击PNH病人红细胞。 临床意义： 是特异性PNH试验，敏感性优于Ham试验 常用的溶血性贫血病因实验检查项目常用的溶血性贫血病因实验检查项目null 练习题 用券下载整式乘法计算练习题幼小衔接专项练习题下载拼音练习题下载凑十法练习题下载幼升小练习题下载免费 练习题诊断溶血性疾病的必需条件是 A 红细胞寿命缩短，破坏增加 B 贫血 C 网织红细胞增多 D Ham试验阳性 E Coombs试验阳性nullnullTHANK YOU !THANK YOU !