高效液相色谱分析低聚糖类

一 s 高效液相色谱分析低聚糖类 2孛7 呈塞堂 巡 华南理-I-大学 轻化所 碳水化合物研究室 ／4 摘要 本文研究比较了两种液相色谱柱(氨基键合柱和离子交换柱)分析低聚禧的结果。发现由于 低聚糖在乙腈 、水混合溶剂中溶解度较低，氨基键台柱仅可用作低聚糖的定性分析，并不适台于低聚糖 的定量分析 关键词：高教渍相色谱， 、， 低聚糖扮析、氨基键合柱 — 丽 The analysl S of cllgosuccharides with NH2一bond carbohydiate column and ion—exchange column were studied．It WaS found that NH2一bond column can be ttsed in qttalltiv e analysis but is not suitable for the quautitive analysis b ecause of the limited solubility of oligo succharide in mixed acetonltrile一}{20 solvent． key word S： HPLa， 0liEosaccharide analysis， NH 2一bond column 一 ， 前言 碳水化合物分析在发酵、医药和食品研究中占有重要地位．高效液相色谱以其准确，快速、简便等突出 优点又在碳水化合物分析中占有重要地位．氨基键合柱是一种重要的碳水化合物分析柱，其特点为当其流 动相乙腈水溶液中的乙腈台量较高时．它可以很好地分离不同的单糖和二糖．当流动相乙腈水溶液中乙腈 含量较低时．它又可用以低聚糖的分析。现已有很多关于氨基键台柱用于低聚糖分析的报道。 (1—3) 然而由于低聚糖在乙腈水琨台溶剂中溶解度较在水溶液中的为低。聚合凄高的糖类，甚至有可能完 全不溶．从而导致样品中糖类不能完全流出并检涮，致使定量和定性分析的结果均大受影响，而现有文 献中都很少涉及此类问题。 与氟基柱相反，离子交换色谱柱流动相为水，所有低聚糖均能流出井得以检测。但它仅可分离四糖 以下的糖，四糖以上则合并为一单峰。本研究以离交柱为基准，探讨氨基柱用于低聚糖分析的适宜性。 ， 5) =，材料与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 2．1材料 低聚糖样品一样品1为沈阳试剂三厂生产的麦芽糖生化试剂。样品2为中科院上海生化所生产的麦芽 糖生化试剂。样品3和4均为本室制作的淀粉米曲酶糖化样品。葡萄糖。分析纯试剂J麦芽糖、麦芽三糖 均为进口标样。乙腈t色谱纯试剂。其它试剂均为分析纯试剂。 2．2分析方怯 葡萄糖值用碘置怯测定。 氟基柱分析条件 色谱柱l Carbohydrate Analysis，Water s公司，美国。移动相I乙腈 (色谱纯)水 (去离子 水过0．45txm超滤膜，二者比饲65：3s．娓台脱气君使用。流速·2．5ml／分钟．柱温。室温。检测器I Differential Refra etomete r，Water s公司，美国．数据处理仪I Data Module 780t Waters公 司．美国。 离子交换柱分析条件。 色谱柱，Sugar PakI．Waters公司．美国。移动相t脱气击离子水．过0．45ttm超滤膜。流速。 0，5ml／分钟。柱温·90‘c ． 63 维普资讯 http://www.cqvip.com 硷澳l器l Differentia!R~fca cto~ete r，W a er s公司 ．美国 。 数据处理仪t Dafa Module 730．Water s公司，美国。 ’ 兰、结果与讨论 0 1 2 3 4 5 6 7 丽而 分 4 s 6 7 8 9 10 11 分 图1样品1氨基柱分析色谱图 图2样品1离交柱分析色谱图 图1和图2分别为样品1的氨基柱和离子交换柱分析的色谱图 可以看出=者有明显的区别。氨基柱 分析柱中较小的糖类先流出，而离子交换柱中较大分子的糖类先流出，并且，三糖以上的糖类合并为一 连峰 分别使用响应因子法时图1和图2的定量处理结果如表】L三艚以上均昕育低紊靖响电因子均按 三 糖计，下 同) 襄1 样昌1在两种柱上定量分析的螬幂 葡萄糖}麦芽糖 三糖 四糖 五糖 六糖{七糖 八糖 九糖 十糖 十一弹 — — l ’ 3．75 I 7O．40 25．82 —i j一45．07 16．49 35．94 从表1可以清楚地看出两种色谱柱的定量分析结果差别较大。麦芽三蓿．麦芽糖以及葡萄糖的绝对 比例在两种分析方法中相差甚远．但仔细研究便可发现．它们的相对比侧却比较接近。显然两种分 析 方法的差异主要在于三糖以上的成协。低聚糖在乙腈水溶液中溶解毒降低，有些成份检出量低或者完全 不能捡出。从而引起了定量上的误差。 图3和图4分别为样品2的氟基柱和离子交换柱分析色谱圈。分别用响用因子归一化法处理数据， 二 者的定量分析结果如表2。 从表2可以看出，由于样品2中的三糖和三糖以下的成份含量很高，故两种柱子分析的结 果 较 为 接 近。同时可知由于太分子低聚糖台■少。图3中麦芽三糖以上的峰很少。 维普资讯 http://www.cqvip.com I J L ． 0 l 2 3 4 5 6 7 8 910I】l2 分 4 5 6 7 8 9—10 ll— 甜、 图3样品2氪基柱分析色谱图 图4样品2离交柱分析色谱 图 } l I I ～ 、％＼、 葡萄糖I麦芽糖 三糖 四糖 五糖 六糖 七糖1八糖 九糖 十糖十一辐 柱子 ～ I 氨基柱 1．31 f 91．13 e．88 0．22 0．19 O．18 离交柱 1．27 f 88．41 7．98 1．05 0．05 1．21 特别值得一提的是，样品1和样品2均为生化试剂，均合乎化工部 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 HG一3l1“一77即它们的比旋 光度 (口) ·均在130。±2‘范围内。但是它们 的麦芽糖台量相差甚远．由此可见常规分析方法的映陷。同为 色谱分析，氨基柱也把两个样品的差剐缩d,T。由于样品l和样品2均为水溶性产品·可在离子交换柱中 全部溢出和检测．因而离子交换柱可以作为比较的标准．故此可以认为氨基柱用于低聚塘分析不太适宜。 当然使用外标法可以用氦基柱定量分析单糖，二糖和三糖。但由于低聚糖在乙腈水中溶解度的限制，在 缺乏标样的情 下是很难定量分析三糖以上的成份的。有时定性分析也会很困难。如果只分析样品中单 糖．二糖和三糖．使用离子交换柱可能更为方便。 另外两个样品的分析结果也可说明这一点。图6和图6及表3分别为样品3的氨基柱和离子交换柱分析 的色谱图和二者的定量分析结果。图6、图7和表4则分别为样品4的氨基柱和离交桂的色谱分析图和二者 的定量分折结果。 参考文献 1．陈洪．淀粉与淀粉糖．1．30~$4(1989) 2．蔡心尧，朱叶 ．食品与发酵工业，6，20~26(1987) 3．z·L·Nikolov．J·B·Jakavljeric，Star ch／Starke，36(3)，97~100 0984) 4．M·Toth，E·La s zlo，J·Hollo，Starch／5tarke，3 6(1】)．374~378(1984) 5，B·Herbr eteau．M ·Lafos se，Chr0matog rapMa，33(7～8)，325~330(1992) 维普资讯 http://www.cqvip.com 0 1 2 3 4 5 6 7 8 lO ll 12分 了 — ■ ．_iT一-分 露5样品3氟基柱分析色谱图 图6样品3离交柱分析色谱图 I 1 ／． L O l 2 3 4了 玎 百百 分 —— — i— __I 一lo ll l2分 66 图7样品4氨基柱分析色谱图 图8样品4离交柱分析色谱图 维普资讯 http://www.cqvip.com ＼ 、 糖 葡萄糖 麦芽糖 三糖 四糖 五糖 l亢糖 七糖 八糖 九糖 十糖 十一1 ～— ～ 柱 子 氨基柱 0．78 51．16 37．65 3．33 O．41i 0．5O 1．3o 1．95 0．27 1．98 0．58 离交拄 0．42 28．38 2O．22 1．47 49．O3I 寰4 祥晶4在两种柱上分析的定■培暴 ＼ 糖 ～ ～ ＼ 葡萄糖 麦芽糖 三糖 四糖 五糖 六糖 七糖 八糖 九糖 十糖 十一糖 柱 子 ～ ～ 、 ～ ～、＼＼ ， 氨基柱 3．45 59．35 26．54 0．53 0．47 0．19 0．09 -52 5-52 3．O1 0．85 离交柱 2．09 36．80 l6．07 0．81 0．78． 45．45 专 利 获 奖 新 产 品 “ 爷宝” 双开式多功能膨化机 获国家专利权。获垒国科技成果及专利新产品两项金奖。是换代新产品，取代进 口机 功 能，利用各种谷物生产方便米粥、新式巴锅、多味圈、虾条、圆球、梅花、花生等数十 种新颖独特的膨化系列食品。还有膨化绿豆、黄豆、红小豆、花生、芝麻等。味道纯正 口 感好。利用广泛，能再加工米糕，米花糖多种膨化粉等产品。大中型机适宜企业转产，科 研、粮食，食品行业开发利用。承担膨化疑难课题。产品包换包退 (需简介照片2元) 邮编 110 300 电话 (024)7852004 辽宁省斯民市膨化机厂 地址；辽宁省新民 市市医院西南佣原卫生公司对门 厂长刘树和 封面介绍 江苏白熊机械 (集团)公司 江苏白熊机械 (集团)公司是以张家港市轻工机槭厂为主体，并以此为核心层组建的经济联台体。 该公司现有固定资产5l10．65万元．自 宥梳动资金船37．62万元，拥有机械加工主要设备g口8台套，物理测 试 化学分析，无损探伤 及工夹模县柱钡 仪器116台套，具有一类压力容器制造许可证，是国家=级计量 单位。该公司主导产品为 “白熊牌 成套饮料机械设备以及塑料工业专用设备。产品多次评获部优、省 优和科技进步奖。 “白熊 机械畅销全国，在国内拥有四千家用户，并远销俄罗斯、泰国、马来西亚等 国家和地区。 “白熊 集团以过硬的质■、优良的服务赢得广大用户的信赖和赞誉。竭诚欢迎国内外客 户光临惠顾。 总经理；褚卫东 联系人 ：黄学祥 地 址：张家港市三 镇 驻 市区经营部：城北路52—1号 (长途汽车站对面向右50米) 邮编{215~,24 电挂{0005 电话I (05222) 570521 570126 570193 电传l (05222) 570538 67 维普资讯 http://www.cqvip.com