首页 考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量

考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量

举报
开通vip

考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量 ·研究原著· 文章编号: 1000-2790( 2001) 06-0528-02 考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量 王多宁1 ,赵雁武2,田芙蓉3 ( 1陕西医学高等专科学校基础部,陕西 西安 710068, 第四军医大学: 2 基础部化学教研室, 3 预 防医学系放射医学教研室, 陕西 西安 710033) 关键词: 蛋白质测定;考马斯亮蓝; 微盘比色法 中图号: Q503   文献标识码: A 摘 要: 目的 建立快速、灵敏的测定蛋白质的方法. 方法  以考马斯亮蓝作为显色剂, 用酶联免疫测定仪微盘比色...

考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量
·研究原著· 文章编号: 1000-2790( 2001) 06-0528-02 考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量 王多宁1 ,赵雁武2,田芙蓉3 ( 1陕西医学高等专科学校基础部,陕西 西安 710068, 第四军医大学: 2 基础部化学教研室, 3 预 防医学系放射医学教研室, 陕西 西安 710033) 关键词: 蛋白质测定;考马斯亮蓝; 微盘比色法 中图号: Q503   文献标识码: A 摘 要: 目的 建立快速、灵敏的测定蛋白质的方法. 方法  以考马斯亮蓝作为显色剂, 用酶联免疫测定仪微盘比色测定 牛血清白蛋白和小鼠肝组织匀浆的蛋白含量,并与常量比色 法进行了比较. 结果 考马斯亮蓝微盘比色法与常量法相 比, 对样品的测定结果相近, 而前者样品用量少 (只需几微 升) ,简便、快速、检测极限低( 0. 63 Lg ) . 结论 考马斯亮蓝微 盘比色法是一种简单、快速、灵敏的蛋白质测定方法, 尤其适 用于大批量、微量样品的蛋白质含量测定. Protein quantification with coomassie bul liant blue microplate-colormetric WAN G Duo-Ning 1 , ZH A O Yan-Wu 2 , TIA N Fu- Rong 3 1 Department o f Basic M edicine, Shaanxi Medical College, Xi'an 710068, China, 2 Depar tment of Chemistr y, Faculty of Preclinical M edicine, 3Department of Radiomedicine, Facul ty o f Pr even- tiv e M edicine, Four th M il itary M edical U niversity , Xi'an 710033, China Keywords: pr otein assay ; coom assie br illiant blue; mi- cr opla te-colormetr ic Abstract: AIM To develop a r apid and sensit ive method o f pro tein quantification assa y. METHODS Protein content o f bov ine serum albumin ( BSA ) and mice liver homogenate w as det erminat ed by microplate colormetr ic ( M PC ) in w hich coomassie br illiant blue ( CBB) is used as co lo r reagent. RE- SULTS Detecting limit of M PC w as lower ( 0. 63 Lg ) than that o f macro-colormetr ic ( MC ) . MPC had advantage o f 收稿日期: 2000-01-05; 修回日期: 2000-04-10 作者简介:王多宁( 1956-) ,男(汉族) ,甘肃省静宁县人. 实验师. T el . ( 029) 2530009 Email. Wangzeng@ pub. xaonlin e. com rapidity and lesser vo lume o f sample ( a few micro liter ) . CONCLUSION MPC is a method of simplicity , r apidit y and sensitivity for pr otein quantification assay especia lly suitable for the det erminat ion o f lar ge number o f micr oliter samples. 0 引言 生物样品蛋白质含量的测定是许多 实验室 17025实验室iso17025实验室认可实验室检查项目微生物实验室标识重点实验室计划 经常 遇到的问题. 常用的方法有 Low ry 氏法和 Bradford 法[ 1- 4] (也称考马斯亮蓝法) . 考马斯亮蓝( CBB)法由 于方法简单, 显色剂单一, 反应迅速等更被常用. 但 对于大批量而蛋白质含量又少的样品测定, 常量法 ( M C)测定比较费时、费试剂,且 CBB与蛋白质结合 物易吸附在比色杯上,不易清洗, 重复使用会影响测 定结果. 因此, 我们建立了酶联免疫检测仪微盘比色 测定法( M PC) . 1 材料和方法 1. 1 材料 牛血清白蛋白( BSA) , 上海长阳生化制 药厂产品. 考马斯亮蓝 G-250, Fluka 进口分装. 其 他试剂均为分析纯试剂. DG3022A 型酶联免疫检测 仪, 南京华东电子管厂产品. 721 分光光度计, 上海 第三分析仪器厂产品. 1. 2 方法 1. 2. 1 试剂的配制 标准牛血清白蛋白液: 蛋白浓 度为 0. 5 g·L - 1 ,以生理盐水配制. 考马斯亮蓝显色液: CBB-G-250 100 mg 溶解在 50 mL 的 950 mL·L - 1的乙醇中,然后加 850 g·L - 1 磷酸 100 mL,放置至室温后加蒸馏水稀释至 1 L,用 滤纸过滤避光保存备用. 1. 2. 2 标准曲线的制作 常量法: 在试管中分别加 入蛋白标准液: 12. 5, 25, 50, 75, 100, 125, 150 LL(即 含 BSA 分别为 6. 25, 12. 5, 25, 37. 5, 50, 62. 5, 75 Lg ) , 然后分别加生理盐水补充使其体积为 200 LL, 空白管加 200 LL 生理盐水,混匀后各加考马斯亮蓝 显色液 4000 LL,摇匀,室温放置5 min后,在 595 nm 比色测光密度. 528 第四军医大学学报( J F our th M il Med Univ ) 2001; 22( 6) 微量法: 在 96孔板中分别加入 BSA 标准液 1. 25, 2. 50, 3. 75, 5. 00, 6. 25, 7. 50 LL(含 BSA 分别 为0. 625, 1. 250, 1. 875, 2. 500, 3. 125, 3. 750 Lg) , 再用生理盐水补充使每孔液体体积为 10 LL,空白孔 只加生理盐水 10 LL, 慢慢摇匀后,分别各加 CBB显 色液 200 LL 摇匀,室温放置 5 m in 后, 在酶联免疫测 定仪 600 nm 直接测定吸光度. 将各自测定的结果作 直线回归,并作图. 1. 2. 3 样品蛋白质含量的测定 称取小鼠肝组织, 用生理盐水制成 5 g·L- 1的匀浆. 如有块状不溶物, 会造成加样误差,应先以500 r·min- 1离心5 m in,然 后取上清液测定. 常量法测定:在试管中加组织匀浆 100 LL 和生 理盐水 100 LL, 混匀后, 加 CBB 显色液 4000 LL,摇 匀室温放置 5 min后, 595 nm 比色测定. 微盘比色测定: 在 96 孔板中加组织匀浆 5 LL, 生理盐水 5 LL, 混匀后加 CBB 显色液 200 LL, 室温 放置 5 m in 后, 600 nm 进行微盘比色测定. 将所测结果分别用各自的回归方程计算出每毫 升匀浆的蛋白含量,并作配对 t检验. 2 结果和讨论 两种测定方法的标准曲线如Fig 1, 2. 在各自的 检测浓度范围内, 微盘比色法的线性较好 ( r = 0. 9958) . 图 1 常量法测定 BSA 的标准曲线 Fig 1 Standard curv e of BSA w as determinated by macro- colormetr ic   对 24只小鼠肝组织匀浆的蛋白含量测定, 两种 方法的测定结果分别为: 常量法为 0. 679±0. 086 ( x-±s) ,微盘比色法为 0. 681±0. 160 ( x-±s) . 图 2 微盘比色法测定 BSA 的标准曲线 Fig 2 Standard curve o f BSA w as determinated by micr o- plate colo rmetr ic   配对 t 检验的统计结果 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,常量法和微盘比色 法比较, t= 1. 2724, P = 0. 217, n = 24, 测定结果相 近, 无明显差异. 而考马斯亮蓝酶联免疫测定仪微盘 比色法,较常量法相比具有简便, 快速, 灵敏(常量法 检出限为 6 Lg ,而微盘法的检出限为 0. 63 Lg ) ,样品 用量少(只需几微升) ,节省试剂, 结果打印, 线性好等 特点,是生物实验室大批量微量蛋白质相对含量测定 的首选方法,值得推广. 参考文献: [ 1] Bradford M M. A rap id and sens it ive meth od for the quant ition of m icrogram quan tit ies of protein u til izing the p rinciple of pr o- tein dye bin ding [ J] . A nal B iochem, 1976; 72( 1-2) : 248- 254. [ 2] Li HB, Li ZR, Wang ZL, Sun LY. Determin at ions of p rotein by micro-low ry method [ J ] . Shengw uhuax ue Yu Shengw uw ul i J inz han ( P rog Biochem B iop hys) , 1993; 20( 5) : 402- 403. [ 3] Ye QL , Li WZ, Yan g LL, Lin DX, Lin S , Chen Y, Lui JC, Lin AZ. The CBB-SDS method for qu ant itative micro-analysis of protein [ J ] . L inchuang J iany an Zaz hi ( J Cl in L ab Tech ) , 1986; 4( 3) : 120- 121. [ 4] Guo M L, J iang YM. Effect of ingred ients of coomass ie bril lian t blue color-develop in regent on protein [ J] . Shengw uhuax ue Yu Shengw uw uli J inz han ( Pr og Biochem B iop hys) , 1996; 23( 6 ) : 558- 561. 编辑 许福明 529第四军医大学学报( J F our th M il Med Univ ) 2001; 22( 6)
本文档为【考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质含量】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享,如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服,我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
下载需要: 免费 已有0 人下载
最新资料
资料动态
专题动态
is_783326
暂无简介~
格式:pdf
大小:89KB
软件:PDF阅读器
页数:2
分类:
上传时间:2012-08-23
浏览量:54