几种国产与进口葡聚糖凝胶的比较

几种国产与进口葡聚糖凝胶的比较 ，、 ) ／ 吴文俊王友同 中国药科大学生物制药学院，南京 210009) ＆ z ． {= 摘 要 对国产和进I：1的葡聚糖凝胶进行丁对照实验，比较丁两者相同规格的凝胶粒度、均匀度、溶胀度、外水体积、 分离 主 不 ，器 ， 关键词 墼堕 ． 自蛋白 ! !生 ，)＼ ‘叹 葡聚糖凝胶分离蛋白质，在生化实验中极具代表 性，一直被作为药学生物学高等教育的主要生化实验 之一。多年来一直使用进口分装葡聚糖凝胶作为实 验材料．使用效果虽好，但价格昂贵，且呈逐年上涨趋 势。因此寻求价廉物美的国产品代替价格昂贵的进 口同类 产 品，具 有 实 际 意 义。我 们对 国 产 CT SephadexG 一 25、Sephadex G 一50、Sephadex G 一 75 与进口分装的同类产品在粒度、均匀度、溶胀度、外水 体积、分离效果都做了 比较。同时对 Sephadex G一 50的重复使用情况也作了比较实验。 1 实验材料与仪器 1 1实验材料 国产 CT Sephadex G一25、Sephadex G一50 、 Sepha dex G一75 进 口分 装 S,ephadex G一25、S~phadex G一50、 Sephadex G一75(上海生化所申华生化公司)。 牛血清白蛋白，进 口分装。 蓝色葡聚糖，瑞士进 口。 溶菌酶(中科院上海生化所东风生化技术公司生 产 )。 1．2仪器 沙芯层析柱．规格：1×24cm 显微镜(上海仪器设备厂) 8823A紫外检测仪，9523A一数字式记录仪(北 京新技术应用研究所出品) 2 实验 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1,21 2．1葡聚糖凝胶粒度和均匀度 将葡聚糖凝胶充分混匀，用药勺随意取少量，均 匀地平铺于血球计数板上．然后放在 100倍显微镜下 观察凝胶的直径，将其按大(粒径 150～200,am)、中 (粒径 90～120,um)、小(粒径 40～90,um)分戚三类， 数每一视野各种颗粒的数目，每种凝胶计数不少于 30个视野。然后累加每种颗粒的总和．并计算出其 所占颗粒总和百分比，以比较粒度、均匀度的情况。 2．2溶胀度 称取各种规格葡聚糖凝胶 3．0g，放入 100mI．量 筒(经校准)中．各加 50mL蒸馏水．室温溶胀 48h，记 录其体积和颜色。然后放入冰箱冷藏保存待用。 2．3外水体积 将溶胀好的葡聚糖凝胶装柱．用蒸馏水作洗脱 液，待柱床体积稳定后，然后用 0．5％蓝色葡聚糖测 定外水体积。 2．4分离效果的比较 将溶胀好的葡聚糖凝胶装柱，保持国产与进口的 葡聚糖凝胶装柱体积相同，用蒸馏水或生理盐水作洗 脱液．待柱床体积稳定后．连接紫外检测仪及记录仪． 灵敏度定为0．1A．纸速为 6cm／h．进样量为 0．2mE／ 次，流速为 5a／rain。当用生理盐水作洗脱液时样品 化工时 1999卑(13j卷第2期 一 23 一 、 ～ ， ． 维普资讯 http://www.cqvip.com 工艺‘试验 (TechnoLogy＆ Testing) 浓度含 1．13rag／mL牛血清白蛋 白和含 2．24mg／mL 溶菌酵。用蒸馏水作洗脱液，分离胶用 Sephadex G 一 25时，样品浓度含 4．2mg／mL牛血清白蛋白和含 8．4mg／mL溶 菌酵；分离胶用 Sep}'~dex G一5O和 Sephadex G一75时，样品浓度含 2．1mg／mL牛血清 白蛋白和含 4．2mg／mL溶菌酶。操作时同种规格的 国产与进口葡聚糖凝胶在同等条件下平行操作。 2．5重复使用 ． 将一个月前同时溶胀并放冰箱冷藏保存的进 口 或国产 Sephadex G一50装柱，用生理盐水作洗脱液， 使柱床体积稳定，样品浓度选用含牛血清白蛋白和溶 菌酶各 4mg／mL，流速为 6d／rain，其余同 2．4。注意 每次分离需重新装柱，进口与国产葡聚糖凝胶均重复 使用 10次，记录相应的分离图谱，然后比较 10次的 分离结果。 3 实验结果 3．1粒度与均匀度的比较l表 1--3) 表 l 进口与国产 Sephadex G一25 粒度与均匀度比较 从表 1看 出，国产 Sephadex G一25比进 13 SephadexG～25均匀度好。另从整个粒径比较，国 产比进 I=I的颗粒偏大些。 衰 2 进 口与国产 SephadexG一50 粒度与均匀度比较 一 24 ～ 化工时刊 1999年(13 J卷第2期 从表 2看 出，国产 Sephadex G一50 比进 I=I Sephadex G一50均匀度尚好。另从整个粒径比较， 进口的颗粒稍偏大些。 表 3 进口与国产 SephadexG一75 粒度与均匀度比较 从 表 3看 出，进 I=I SephadexG 一75比国产 SephadexG一75均匀度尚好。另从整个粒径比较，国 产比进 口的凝胶颗粒明显偏大。 3．2溶胀度及外水体积的比较．见表4 表 4 溶胀度噩外水体积的比较 指 标 — SepkadexG-25 Seplmde — xG-50 Sepb=k,xG-75 进 口 国产 进 口 国产 进 rl 国产 从表 4看出 SephadexG一25的溶胀度国产是进 口的 115％．ScphadexG一50的溶胀度国产是进 口的 94％，SephadexG 一75的 溶 胀 度 国 产 是 进 I=I的 109．7％。国产 Seph~dexG一25、Sephadex G一75较 进口同类产品颗粒及溶胀体积较大，而外水体积较 小。国产 Sephadex G一50较进 I=I同类产品颗粒及胀 体积较小，而外水体积较大。 3．3分离效果的比较 根据分离时相对分子质量大的先出峰，因此分离 时牛血清白蛋白(相对分子质量：65000)先出峰：溶菌 酶(相对分子质量：14388)后出峰。结果见图 1～3。 维普资讯 http://www.cqvip.com 工艺·试验 (Technology＆ Tesfin (a)进口SephadexG一25洗脱图谱 (b)国产SephadexG一25洗脱圉谱 圉 1 SephadexG一25洗脱图谱 【以蒸馏木怍洗脱液 l 从图 1看出，SephadexG一25国产胶较进口胶分 离效果好；两者对溶菌酶可能都有一定的吸附作用， 似国产胶的吸附作用更强。 (a)进 口SephadexG一50洗脱图谱 (b)国产 SephadexG一50洗脱图谱 (以蒸馏水作洗脱液) (以蒸馏水作洗脱液) (c)进口Sephadex G一50洗脱图谱 (以生理盐水作洗脱液) (d)国产 Sephadex G一50洗脱图谱 (以生理盐水作洗脱液) 围 2 SephadexG一50洗脱囝谱 从图2看出，SephadexG一50国产胶与进VI胶 分离效果基本相同，国产胶稍优于进 口胶；当用蒸馏 水洗脱液时，二者对溶菌酶吸附作用较强，当用生理 盐水作洗脱藏时．二者对牛 血清白蛋白吸附作用较 强。 (a)进 口Sephadex G～75洗脱图谱 (b)国产 s印h＆dex G～75洗脱图谱 围3 Sephadex G一75洗脱图谱Il 生理盐水怍洗脱液l 从图 3看出，SephadexG一75国产凝胶与进 口凝 胶相比，国产凝胶的分离图峰峰相距虽较远，且能分 开，但峰低而宽，有扩散倾向。 3．5重复使用情况比较 见圉4 O l0 2o 【b) (a)进 口 Sephadex G一50第一次洗脱图谱 (b)进口Sephd亡x G一50第十次洗晚图谱 O l0 2o (d) (c)国产 Sephadex G一50第一次洗脱图谱 (d)国产 SephadexG一50第十次洗脱图谱 围4 SephadexG一50重复使用洗脱囝请(以生理盐水怍 洗脱液 l 从图 4看出，国产凝胶与进 VI凝胶重复使用第十 次和第一次分离效果相比，均基本无变化。故国产葡 聚糖凝胶在重复使用方面，能与同类进口产品相媲 美。 (下转第33页) 化工时刊 ’999车f13)卷第2期 一 25 维普资讯 http://www.cqvip.com 售价也相应较高。由此而生产出的硅烷偶联剂价格 也较高，限制了硅烷偶联剂的应用发展。因此，研究 其合成工艺路线，提高选择性与收率、降低成本．进而 扩大应用领域，具有重要的意义。 参考文献 1 Czech 196 917 1981 2 Pol，PL 145 671 1988 3 Ger．Offen．3 404 703 4 Pol，PL 156 24l 1992 5 CA 96 6863n 6 Get．Offen．2 061 189 7 US 3 806 549 8 Get．Often．2 427 085 9 Jpn．Kokai 76一tl 721 lO Fr．Demande 2 268 020 11 CA 86 12151lb 12 J．Mo1．Cata1．81(2)，207—14 1993 13 Jpn．kokai 06 l00 572 1994 14 Jpn．dokai 74—55625 15 Jpn kokai 74—55627 16 Bait．UK Pat．App1．GB 2 263 113 17 Jpn kokai 06 65 2571992 l8 Eur．Pat．App1．EP 517 398 l9 J．CatM．143(1)，64—68 l993 20 CN 1064 867 21 Get．Often．2 161 716 (收稿 日期 l9蚋 —_0l一22) Synthesis and Application of(3一Chloropropy1)Trialkoxysilanes YinSiyi (Nanging Jinlin Chemical Plant．Nangiog 210028) Abstract The synthesis and application of(3一chloropropy1)trialkoxysilanes were reviewed and oomp~red keywo~ls 3一dhloropropyl tiralkoxysilanes，synthesis，application (上接第25页) 4 结论与讨论 通 过 对 SephadexG 一 25、SephadexG 一50、 SephadexG一75国产凝胶与进 口凝胶在粒度、均匀 度、溶胀度、外水体积、分离效果以及重复使用方面进 行了比较。各项对比实验结果相差不大．国产 CT葡 聚糖凝胶在质量上可与进 口凝胶相媲美，而价格仅为 进口的 1，2～1／3．因此，物美价廉，完全可以取代价 格昂贵的进口凝胶。 参考文献 l 吴梧桐主编 ．生物制药工艺学 ．中国医药科 技出版社，北京：1993 2 徐秀兰主编 ．吴梧桐主审 ．生物化学实验与 指导 ．中国医药科技出版社，北京：1994 (收稿日期 1999—01—13) The compare of physicochemistry characteristic of several standards of sephadex between national products and external products Wang Xiangqin，Li Qian，Wu Wenjun，Wang Youtong (sohod of Biochemistry Pharmacy，China Pharmaceutic University，NanJing，21009) Abstract In order tO seek low—price suc0edar m of import sephadex in telated teaching experiments．the physicochemistry characteristic of several standards of sephadex．including granule s e，uniform，swelling exten t， outer volume．separating effect，repeatedly used times．etc．were oompa~d between national products and external products．The results showed that P．O obviovs differencewas observed betweentwoproducts．We cametothe con- clusion that national products may take phoe of external prod ucts． Keywords Sephadex；Albumin；Lysozyme 化工时刊 1999年(13}卷第2期 一 33 维普资讯 http://www.cqvip.com