无菌原料药生产中无菌工艺验证探讨

广州哲成生物科技有限公司 专业供应 生命科学生物制药部王朝志工程师电话：13662448054,欢迎来电交流 无菌原料药生产中无菌工艺验证探讨 无菌生产工艺是无菌原料药制备过程中难度最大的工艺验证之一，由于很多原料药无法终极灭菌， 原料药在进行过滤、干燥、粉碎、分装等操纵过程中就必须尽可能地避免被微生物污染。影响产品是否无 菌的因素相当多，如生产的 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 及其设备布局、生产环境状况、所有与生产相关的设备及物料的污染状况、 职员操纵和卫生状况等，每一个环节对终极产品的质量都举足轻重。为了确保无菌生产工艺系统无菌的可 靠性和适应性，将需要通过一系列的验证来确保产品的无菌性。 无菌工艺验证需要解决很多题目，如模拟介质的选择、无菌工艺验证的相关要求、设备的灭菌、如何 达到全培养的目的、达到无菌的组织保证以及终极结果分析等，任何一项题目没有处理好，都会对终极结 果造成影响。 1模拟介质的选择 无菌原料药对模拟介质的选择很关键，选择的模拟介质应有如下特征： (1)没有抑菌作用。若模拟介质有抑菌作用，将会对生产系统中的细菌生长产生抑制作用，以至于不 能培养出细菌，产生假的结果。模拟介质最好具有促进细菌生长的作用。假如选择对细菌生长有促进作用 的固体培养介质做验证，对生产环境的保护则特别重要。由于，假如有些操纵是使介质暴露的，介质的尘 粒会飘散到某些较难清洗的地方，如空调系统的送风口和回风口四周，给细菌在该处的滋生创造了条件， 所以应有措施保护不易清洗的死角不被介质污染。 (2)模拟介质还应有较好的溶解度。由于若溶解性能不好，悬浮在培养基中的模拟介质使培养基发生 混浊，影响结果的判定。 (3)模拟介质加进培养基后，不应影响培养基的质量，pH不发生大的变化，以适应大多数细菌的生长。 (4)对设备没有腐蚀性，对人体无害，对环境不发生污染。 选择模拟介质，需要根据各公司的具体情况而定，目前多数厂家采用培养基灌装试验来证实其无菌工 艺的可靠性。所用的培养基应有较好的溶解性，营养程度要高，能够满足多种微生物的生长。一般通过生 长促进试验验证。如生产工艺是在厌氧条件下，选用的培养基应能够使厌氧微生物生长。 2无菌工艺验证的相关要求 广州哲成生物科技有限公司 专业供应 生命科学生物制药部王朝志工程师电话：13662448054,欢迎来电交流 2.1验证前的预备 2.1.1生产设施的设计和确认 生产设施的设计应能使潜伏的污染降低到最小。例如，生产设施应易于清洁和消毒、产品或物料敞开 之处的空气要有一定的质量要求、温度和湿度的控制要适宜、穿着无菌衣的操纵职员感到舒适、能防止污 染和交叉污染等等。应重视设计上的细节，减少污染源，以确保无菌生产得以实施。无菌工艺验证是执行 难度较大的验证之一，参与者应充分意识到设施的设计和确认，其是验证成功的主要因素。 2.1.2公用工程的确认 影响产品质量的公用工程(如蒸汽、压缩空气、加热、制冷、水系统等)都应经过确认。公用工程是生 产得以正常实施的保证之一，若其中任何一个系统出现故障，将会使产品发生潜伏的或严重的污染。应有 公用工程的维护计划并按计划执行，目的就是不让系统发生故障，保证生产的顺利进行，而不是发生故障 后往修理，经常发生故障而被维修的公用工程是不能保证无菌生产的。 2.1.3设备和工艺确认 验证实施之前，所有的设备、无菌环境、计算机控制系统以及生产工艺都应经过验证。产品暴露是发 生污染使无菌工艺验证失败的主要原因之一，为防止或降低污染发生的几率，给暴露产品提供层流空气的 百级层流罩或隔离器是非常重要的，同样被灭菌过的物品由灭菌器到生产线的传递和经过必要的手工操纵 进进生产线前的保护也是至关重要的，应尽量避免职员对设备或物料接触的操纵。这些都应经过验证。 2.1.4设备的清洗和灭菌 在无菌工艺验证之前接触模拟介质的设备表面应清洗灭菌，并防止灭菌后的再污染。若生产的药品具 有抗菌性或者杀菌性，这种清洗尤为重要，要确认清洗后对微生物没有抑菌性，或可以有效的消除抑菌性。 若清洗或灭菌不彻底，残存的药品会使模拟介质受到污染或设备表面的微生物使模拟介质染菌而使验证失 败。这种清洗和灭菌过程应经过验证，以保证清洗彻底和灭菌成功。 设备灭菌是无菌工艺验证的关键的一环，所有与工艺相关的设备都必须灭菌，首先设备的灭菌要通过 灭菌验证，包括最冷点的确定、温度分布和热穿透、生物指示剂的挑战，终极确定灭菌的温度、时间和排 气点。所用的生物指示剂应确认其类型、来源、菌种的浓度和 D值。 广州哲成生物科技有限公司 专业供应 生命科学生物制药部王朝志工程师电话：13662448054,欢迎来电交流 3无菌工艺验证的组织保障 为了保证无菌工艺验证的顺利执行，成立无菌工艺验证执行小组，目的是：(1)为验证工作提供人、 财、物支持；(2)终极决定验证期间发生各种事务的处理；(3)批准验证 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 和计划及验证报告；(4)分别 负责各子小组的工作。 无菌工艺验证执行团队分组如表1所示。 表1无菌工艺验证执行团队分组 4无菌工艺验证的过程 无菌工艺验证的设计，应充分体现 QbD（质量源于设计）的理念，尽可能地与工艺过程符合，最大限 度地保证产品的质量。 4.1 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 操纵规程的确认以及职员培训 标准操纵规程（SOP）是指导操纵职员进行某项操纵的书面程序，是操纵职员的操纵标准，是生产操 纵成功的关键。标准操纵规程应能对操纵职员提供足够的指导以完本钱项操纵。 标准操纵规程应由技术职员编写，部分主管审阅，质量保证部主管批准。将批准后的标准操纵规程对 操纵职员进行培训，使之真正理解并能熟练把握。标准操纵规程的原件及培训 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 存放在资料治理部分， 操纵现场存放的是复印件。验证前应确认每一项操纵有标准可依，以免造成治理上的漏洞，且确认这项操 纵已被培训过，同时操纵职员已能熟练把握。 广州哲成生物科技有限公司 专业供应 生命科学生物制药部王朝志工程师电话：13662448054,欢迎来电交流 验证之前应对所有的操纵职员和质量治理职员培训与验证有关的各项操纵（可根据验证方案和 SOP）， 以避免验证过程中有关职员不理解甚至不知道怎么做，保证验证的顺利实施。假如生产车间新增加或调换 的无菌操纵职员超过20％，应重新做无菌工艺验证，以保证无菌操纵能顺利进行。 4.2仪表校正 仪表校正应由有资格的职员或单位按照公司批准过的 SOP来进行，并符合国家可追踪的标准。仪表的 校正频率至少符合国家 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 ，并根据使用频率调整并严于此标准。使用频率越高，仪表的磨损越厉害，校 正频率就应越高。由于使用没有经过校正的仪表，所得的数据无效。 4.3工艺条件 无菌原料药的生产工艺具有其自己的特点：设备种类多、设备复杂、管路长，且不同的生产工艺有不 同的特点，根据各自的特点选择固体或液体模拟介质。固然，已尽量地减少设备的内部暴露和减少物料产 品的暴露，但是不可避免地会有一些设备与外界环境相通，或是物料暴露在环境中，这些开口处应有呼吸 器或百级层流空气的保护，更好的是使用隔离器保护。验证时，应有模拟这些物料暴露的操纵。 有些生产工艺中具有结晶的操纵，这使得模拟过程有些困难，由于结晶过程中有相变产生，应该考虑这种 变化是否会影响到微生物的生长。最好的办法是选择两种模拟介质，它们在结晶过程发生反应天生另一种 模拟介质。选择这样的介质可能会有很大困难，简单起见，也可用同一种液体模拟介质模拟结晶过程流经 所有管路加到结晶罐中。若结晶过程有加晶种的操纵，模拟过程中也应有这样的操纵。晶种可用模拟介质 代替。为使晶体粒度均匀，有些结晶过程有降温过程，在模拟过程中不应降温，由于微生物在低温下不易 生长。 干燥过程中的温度一般会抑制微生物生长，甚至将微生物杀死，在模拟过程中应保持室温，以免温度 太高杀死细菌而使验证失败。也有用冷冻干燥除往湿分的，模拟冻干参数的选择也不应使细菌的生长受到 抑制。 总之，在验证过程中尽量使工艺参数和实际情况一致，但是为了使微生物生长良好，答应选择的工艺 参数和实际情况不一致，但是这些参数不应和生产工艺产生重大差别。无菌原料药的分装剂量一般较大， 在这种情况下分装过程中应减慢分装速度，以增加产品暴露的可能，在最差状况进行操纵。 广州哲成生物科技有限公司 专业供应 生命科学生物制药部王朝志工程师电话：13662448054,欢迎来电交流 在进行验证时，应根据生产过程中曾经出现的异常情况或者可以预想的可能的异常情况设置最差条 件，以考察生产过程中出现此异常情况时产品的无菌性质是否会受到影响。 4.4操纵时限 在原料药的生产中，每一操纵都应有操纵时限来保证已灭菌的物品避免受到微生物的污染或产品降 解。操纵时限越长，产品受污染的几率越大。 在无菌工艺验证时，应将操纵时限调整至最大，在最差状况下操纵，假如这时验证结果可靠，那么在 小于此时间下进行的操纵当然也是可靠的。尤其是已灭菌物品由灭菌到使用时的保存时间更加重要。在验 证时，应将已灭菌物品至少放置到规定的保存时间，这样的验证结果更具说服力。每一步操纵都应延长甚 至超过操纵时限，这样会使得总的工艺时间很长，但是这样的验证结果更能保证正常生产时的无菌状态。 4.5环境监测 在验证过程中环境的质量至关重要，应在恶劣的环境下进行操纵，但是不能恶劣到使产品发生染菌的 程度。一般采用增加操纵职员数目的办法恶化环境。应对环境进行监测以评价验证过程，所有暴露产品的 操纵都应同时监测本区域的环境。环境监测包括以下几个项目：无菌室的温度、湿度、尘埃粒子、沉降菌、 浮游菌、职员和表面微生物。 沉降菌和浮游菌用培养皿进行测试，培养基为营养琼脂或其他适宜的培养基。培养皿应放置在微生物 监测史上情况最差的部位。在验证过程中应增加取样的频率，并且应在分装区域放有2个以上的取样培养 皿连续暴露取样，暴露时间应为分装的全过程，但不宜超过4h，否则营养琼脂变干而不能提供足够的营养 使细菌不能长出。若工艺时间超出4h，应重新放置一个新的培养皿进行监测。营养琼脂在使用前应做微生 物生长促进试验，以保证营养琼脂对微生物生长的适应性。 方法如下：选择合适数目的营养琼脂培养基（此数目具有统计学意义），分别接种10-100CFU 的金黄 色葡萄球菌（ Staphylococcusaureus）、枯草芽孢杆菌（ Bacillussubtilis）、铜绿假单胞菌 （Pseudomonasaeruginosa）、白色念珠菌（Candidaalbicans）、黑曲霉（Aspergillusniger）和环境中的 检出菌。细菌分别置于（32.5±2.5）℃的环境中培养不超过3天，真菌置于（22.5±2.5）℃的环境中， 分别培养不超过5天。接种的微生物生长良好。测试浮游菌可以用缝隙—琼脂撞击采样法、离心采样法、 广州哲成生物科技有限公司 专业供应 生命科学生物制药部王朝志工程师电话：13662448054,欢迎来电交流 液体撞击采样法及膜过滤法。一般说来，浮游菌比沉降菌更能反映环境的质量。表面微生物的测试可用擦 拭法或 Rodac碟。擦拭法用于非规则表面的微生物测试，用擦拭法测表面微生物之前应先测回收率。影响 回收率的因素很多，包括微生物的种类和数目，不同的操纵职员进行测试会得到不同的回收率，主要原因 是擦拭时用力的大小，每个测试操纵职员有自己的回收率数值。测试回收率时，不要选择生命脆弱的微生 物，由于这些微生物被擦拭时会死往，产生不可信的结果。用 Rodac碟测试规则表面的微生物污染程度比 较方便，但是这种测试会有营养物质残留在被测试的表面，应清洗干净，否则这是一个很大的污染。尘埃 粒子尽可能使用在线监测，取样点数和取样量符合现行的法规的要求，监测的结果应能证实在产品暴露的 关键区域空气质量达到了100级洁净区的空气质量标准。 4.6工艺过程的模拟和全培养 由于一般原料药生产工艺都经过结晶过程，其间会发生相变，因此无菌工艺验证不可能完全按照原来 的实际工艺来进行模拟。 从原材料配制起，以培养基作为模拟介质，经过除菌过滤、结晶、过滤、洗涤几个步骤后，为了保证 所用的介质是全部用于无菌检验，需要对多余的模拟介质采取措施进行全量培养，以保证所用介质的完整 性。以后的干燥、粉碎、分装步骤再按生产工艺进行。为了考察各步骤的无菌状况，要在各个阶段进行取 样，模拟生产过程中的取样，不要刻意地增加取样点。取样的样品也要进行培养，以达到全面培养的目的。 为了保证取样的无菌性，对取样口进行灭菌，假如不能使用蒸汽灭菌，可以使用杀孢子剂灭菌，但在取样 前要保证杀孢子剂残留没有抑菌性。 生产过程中可能有升温、降温过程，此时应留意模拟介质对温度的敏感性。可通过实验室考察。 4.7样品培养 阴性对照：在验证过程中，随机取出有代表性的一定数目的装有培养基的包装容器作为阴性对照。 阳性对照：验证过程中，随机取出有代表性的一定数目的装有模拟介质的包装容器，1/3接种浓度为 <100CFU 的5种标准菌株和环境的检出菌，接种后细菌在（32.5±2.5）℃环境下培养48～72h，霉菌和酵 母菌在（22.5±2.5）℃培养5天，接种包装容器中均有明显的所接种微生物的生长，以此作为阳性对照。 样品培养：将分装得到的产品在操纵现场灌装培养基，然后密封，检查密封性。全部产品应在 广州哲成生物科技有限公司 专业供应 生命科学生物制药部王朝志工程师电话：13662448054,欢迎来电交流 （22.5±2.5）℃和（32.5±2.5）℃分别培养7天，总培养14天，天天检查全部样品的微生物生长情况。 若发现污染应注明批号、包装容器号，同时检查密封情况。若有破损注明原因。污染的样品应做微生物鉴 别，鉴别到种。 5结果评价及再验证 在制剂中填充低于5000单元接受标准为0污染，但是在无菌原料药生产中，包装单位较大，得到的总 分装容器数一般较小，这使得抽样测试和结果计算失往统计学意义，又由于生产批量是固定的，因此所有 产品都应被培养，并且所有的阴性对照和阳性对照都必须合格。若阴性对照或阳性对照分歧格，则无菌工 艺验证失败需要重新做。若发现有一个容器长菌，就以为无菌生产工艺中有染菌的因素存在，应立即停产， 调查产生污染的原因，采取措施后重新做验证。 新生产线在投产之前要做无菌工艺验证，验证通过后该生产线才能投进使用。正在运行的生产线应每 年做2次无菌工艺验证，每个可能进进洁净区或与生产接触的职员每年至少参加一次无菌工艺验证。对于 厂房经过大修、主要设备更换以及新建厂房等情况应进行至少连续3个周期的无菌工艺验证。假如是周期 性的再验证，假如在该两次验证期间没有发生产品的染菌，可进行一个运行周期的验证就足够了；假如该 验证通过，则证实该系统能够稳定地保持无菌性；假如该验证失败，应该具体地调查原因并消除隐患后， 再重新进行至少连续3个周期的验证，只有所有验证全部通过，才能以为本无菌生产工艺是可靠的。 假如在两次验证期间发生过产品染菌情况，经过调查和细菌鉴别，确定染菌原因是由可以控制的因素 造成，或染菌因素比较稍微，改正这些失误后可以继续进行生产；假如进行调查及细菌鉴别不能确认染菌 原因，则应对无菌生产系统进行无菌工艺验证以确认哪些环节造成系统染菌，并对这期间生产的产品进行 无菌风险的调查和评估。 6验证报告 验证完成之后应起草一份验证报告，对以上内容做一个扼要总结，主要包括以下内容：验证题目、验 证目的、参加验证部分和职员、职员的培训、采用的工艺参数和操纵时限、选择的模拟介质和培养基、模 拟过程中的中断、偏差及其调查、培养条件和终极结果，终极报告应由企业质量负责人批准。只有当终极 结果合格并且终极报告经过批准后，企业的无菌原料药生产才能开始（或继续）进行。 广州哲成生物科技有限公司 专业供应 生命科学生物制药部王朝志工程师电话：13662448054,欢迎来电交流 广州哲成生物科技有限公司 专业供应 生命科学生物制药部王朝志工程师电话：13662448054,欢迎来电交流