毕业设计（论文）_山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究

毕业 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 （论文）_山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究 XXX农业大学 毕 业 论 文,设计, 题 目:山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究 姓 名: 学 院: 农学与植物保护学院 专 业: 植物保护 班 级: 学 号: 指导教师: 2010 年 10 月 5 日 毕业论文,设计,诚信声明 本人声明:所呈交的毕业论文(设计)是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，论文中引用他人的文献、数据、图表、资料均已作明确标注，论文中的结论和成果为本人独立完成，真实可靠，不包含他人成果及已获得青岛农业大学或其他教育机构的学位或证书使用过的 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 论文(设计)作者签名: 日期: 年 月 日 毕业论文,设计,版权使用授权书 本毕业论文(设计)作者同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文(设计)的复印件和电子版，允许论文(设计)被查阅和借阅。本人授权青岛农业大学可以将本毕业论文(设计)全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本毕业论文(设计)。本人离校后发表或使用该毕业论文(设计)或与该论文(设计)直接相关的学术论文或成果时，单位署名为青岛农业大学。 论文(设计)作者签名: 日期: 年 月 日 指 导 教 师 签 名: 日期: 年 月 日 青岛农业大学 毕业论文,设计,附件材料 题 目:山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究 姓 名: 学 院: 农学与植物保护学院 专 业: 植物保护 班 级: 学 号: 指导教师: 2010 年 10 月 5 日 ? 青岛农业大学毕业论文,设计,立题表 立题题目 山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究 题目来源 ?来源于生产实际 ?来源于科研项目 ?其他 题目性质 ?基础研究 ?应用研究 ?应用基础研究 ?其他 题目完成形式 ?毕业论文 ?毕业设计 申请立题教师 职称 教授 从事专业 植物保护 立题说明: 作为真菌的一大类，腐生真菌不仅在自然循环中起着重要作用，而且在分类中占有重要意义。腐生真菌在自然界中广泛存在，具有繁殖快、生存能力强以及形态多样等特点，同时由于这些真菌中包括了具有潜在应用价值的种类，因此越来越受到人们的高度重视，成为国内外研究的热点之一。 山东半岛沿海岸地区的微生物的种类相对较多，为真菌的研究提供了各种珍贵的自然资源。因此这一地带的标本资源丰富，诸多标本具有代表性。由此也能看出这里独特的自然资源和宝贵的真菌的原料。但是，对于该地区的腐生真菌的报道很少，与其丰富的真菌资源尤其是腐生真菌资源的实际情况极不相衬。本研究旨在通过标本采集和腐生真菌的种类鉴定，逐步搞清山东沿海地区腐生真菌的种类与分布，以便更好地保护和利用这些腐生真菌资源。 教研室意见 教研室主任签名: 年 月 日 毕业论文(设计)领导工作小组意见: 教学院长签名: 年 月 日 青岛农业大学毕业论文,设计,任务书 论文(设计) 山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究 要求完成时间 2010年10月5日 论文(设计)内容(需明确列出研究的问题): 1(采集山东半岛沿海城市周围具有代表性的真菌标本。 2(从采集的基质上检查腐生真菌。 3(将检查到的腐生真菌切片并用显微镜初步观察。 4(鉴定腐生真菌(形态描绘、照相、测量大小)。 5(保存标本并标号。 资料、数据、技术水平等方面的要求 需要查阅有关资料和书籍，熟悉腐生真菌的保存环境、形态特征; 要求利用网络、专业数据库、参考书等相关资料，充分查阅与腐生真 菌分类有关的参考文献，制定合理的操作 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 及实际操作步骤。 脚踏实地，一丝不苟，做好每一步实验，对于实验中出现的问题 要结合理论知识，独立分析解决。 要求腐生真菌的鉴定要准确，形态描述 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 ，做到有理有据。 指导教师签名: 年 月 日 ? 青岛农业大学 毕业论文(设计)开题报告 题 目:山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究 姓 名: 学 院: 农学与植物保护学院 专 业: 植物保护 班 级: 学 号: 指导教师: 2010 年 6 月 10 日 说 明 一、有关说明 毕业论文(设计)题目确定后～学生应尽快征求导师意见～讨论题意与整个毕业论文(或设计)的工作计划～然后根据课题要求查阅、收集有关资料并编写研究提纲～主要由以下几个部分构成: 1.研究(或设计)的目的与意义。应说明此项研究(或设计)在生产实践上或对某些技术进行改革带来的经济、生态与社会效益。有的课题过去曾进行过～但缺乏研究～现在可以在理论上做些探讨～说明其对科学发展的意义。 2.国内外同类研究(或同类设计)的概况综述。在广泛查阅有关文献后～对该类课题研究(或设计)已取得的成就与尚存在的问题进行简要综述～只对本人所承担的课题或设计部分的已有成果与存在问题有条理地进行阐述～并提出自己对一些问题的看法。 3.课题研究(或设计)的内容。要具体写出将在哪些方面开展研究～要重点突出。研究的主要内容应是物所能及、力所能及、能按时完成的～并要考虑与其它同学的互助、合作。 4.研究(或设计)方法。科学的研究方法或切合实际的具有新意的设计方法～是获得高质量研究成果或高水平设计成就的关键。因此～在开始实践前～学生必须熟悉研究(或设计)方法～以避免蛮干造成返工～或得不到成果～甚至于写不出毕业论文或完不成设计任务。 5.实施计划。要在研究提纲中按研究(或设计)内容落实具体时间与地点～有计划地进行工作。 二、注意事项 1.开题报告的撰写完成～意味着毕业论文(设计)工作已经开始～学生已对整个毕业论文(设计)工作有了周密的思考～是完成毕业论文(设计)关键的环节。在开题报告的编写中指导教师只可提示～不可包办代替。 2.无开题报告者～不准申请答辩。 3.本表要用计算机填写～签字要手写～一式三份～本人、导师、所在学院(要原件)各一份。 4(学生可根据内容的多少调整 表格 关于规范使用各类表格的通知入职表格免费下载关于主播时间做一个表格详细英语字母大小写表格下载简历表格模板下载 的大小。 ? 一、选题依据(拟开展研究项目的研究目的、意义等) 腐生真菌是一类从无生命的有机质中吸取营养物的真菌，营养物质的来源主要是动植物的遗体，动物和植物的脱落物，如落叶、枯枝、树根以及动物的粪便和毛发等。腐生真菌大都生活在土壤中或动植物残体的基质上。在土壤中存在的动植物的残体为腐生真菌提供了大量的有机养料，这些有机养料包括大量的糖类、蛋白质、脂类和核酸，腐生真菌在自然循环中起着极其重要的作用。 作为真菌的一大类，腐生真菌不仅在自然循环中起着重要作用，而且在分类中占有重要意义。腐生真菌在自然界中广泛存在，具有繁殖快、生存能力强以及形态多样等特点，同时由于这些真菌中包括了具有潜在应用价值的种类，因此越来越受到人们的高度重视，成为国内外研究的热点之一。 山东半岛沿海岸地区的微生物的种类相对较多，为真菌的研究提供了各种珍贵的自然资源。因此这一地带的标本资源丰富，诸多标本具有代表性。由此也能看出这里独特的自然资源和宝贵的真菌的原料。但是，对于该地区的腐生真菌的报道很少，与其丰富的真菌资源尤其是腐生真菌资源的实际情况极不相衬。本研究旨在通过标本采集和腐生真菌的种类鉴定，逐步搞清山东沿海地区腐生真菌的种类与分布，以便更好地保护和利用这些腐生真菌资源。 二、国内外同类研究或同类设计的概况综述(在充分收集研究主题相关资料的基础上，分析国内外研究现状，提出问题，找到研究主题的切入点，附主要参考文献) 真菌的分类虽然已经有几百年的历史，分类技术也越来越多样化，而且在当代真菌的分类已经使用DNA和PCR等分子方面的高科技的技术，力争在分子方面给予精确的鉴定。但是根据形态特征进行分类仍然是真菌分类的基础，目前其他的分类技术只是作为补充，所以做好基础的形态鉴别工作仍是鉴定工作者的主攻方面。 作为一门基础学科，真菌分类学在真菌学乃至整个生物学的研究中占有重要地位，并且与其他相关学科具有密切的联系。作为一门传统的学科，真菌分类大约有300多年的历史,其分类方法也随着其它技术在真菌分类学上的应用而发展,常用的方法主要有常规形态分类法、电镜技术分类法、数值分类法、化学分类法和分子生物学分类法。常规形态分类法其原理主要是用普通光学显微镜对真菌进行观察和描述,依靠真菌的形态学和解剖学特征对真菌 进行分类，形态鉴定方法还是目前真菌分类中最常用的方法。电子显微镜的应用给真菌学的研究提供了一个分辨率更强的工具,用以观察真菌的细微结构和亚显微结构,使人们能更深入地认识真菌的细胞壁、隔膜、细胞核、鞭毛和孢子饰纹等。数值分类技术是依靠电子计算机, 根据等权原则(Equalweighting) ,按运筹分类单(OUT’s operational taxonomic units)形状状态的全面相似性(over all similarity) ,将它们分为不同的表观群(phenons)。化学分类就是利用真菌化学特征对其分门别类,即以其化学成分的种类、结构和性质等特性为依据,以传统分类为基础对真菌进行分类,能从本质上揭示生物种间的系统发育和亲缘关系,使分类更接近自然状态。近年来多门新兴学科和技术被引入真菌分类学,尤其是分子生物学技术的兴起为真菌分类学发展提供了良好的机遇。真菌分类技术的发展为建立一个符合客观实际的自然分类系统提供了有力保障。有效的统计数据,应用于分类学的计算机软件、自动化图象分析和不规则碎片几何学将为分类学提供更多的研究手段,甚至有可能振兴形态学这门古老的科学。真菌的形态特征复杂,形态研究也因缺乏标准、统一的表述,及具有较大的主观性而经常受到质疑,而且少数形态特征和生理生化指标随着环境的变化而不稳定,因此,在传统的真菌分类中常会出现分类系统的不稳定或意见分歧。在分类的过程中，还引入次生代谢物的概念。次生代谢物是极端专一的,往往只限于一个种或一个种内的某一株系,虽然现在还不清楚其具体功能,但在真菌分类鉴定中对次生代谢物的研究具有巨大的潜力。次生代谢物常被用于地衣的分类研究中 ,但在子囊菌和担子菌分类研究中很少使用。现在真菌形态学研究最大的缺点是不能应用于暂时还不能人工培养的真菌中。另外,值得注意的是,子囊菌和担子菌存在不同的形态分类标准,而且差异很大,这阻碍了建立完整、统一的真菌分类系统。 腐生真菌的存在，为真菌的研究开辟了一个新领域，极大地丰富了生物多样性的内容，使我们对生物多样性有了很深的了解和认识。腐生真菌为我们开辟了一个新视角、新天地，极大地丰富了微生物资源，并对我们开发利用微生物资源提供了重要的价值。深入开展对腐生真菌的研究，了解腐生真菌的多样性，无论从基础理论研究本身，或从应用前景考虑，都具有重要的意义。然而关于山东半岛沿海地区腐生真菌的报道不多，与该地区丰富的植物与真菌资源多样性很不相称，因此选择山东半岛沿海地区进行真菌种类与分布的研究，以期初步搞清该地区腐生真菌的状况，为日后的进一步保护和利用奠定基础。 ? 参考文献: [1]于淑玲，赵静.腐生真菌的消长规律[J].生物学通报.2006，4(9):24-25. [2]张萍.植物病源真菌分类方法评述[J].宁夏农林科技.2007，5:125-126. [3]缪承杜,洪葵.真菌分类技术的研究进展[J].安徽农业科学.2007，35(22):6695 – 6697. [4] HAZEN KC. Methods for fungal identification in the clinical mycology laboratory[J]. Clin Microbiol News L. 1996,18 :137 - 144. [5] GUARRO J, GENE J. ALBEO M. Developments in fungal taxonomy[J]. Clinical Microbiology Reviews. 1999, 12(4) :454 - 500. [6]HENNEBERT GL, SUTTON BC. Ascomycete systematics: problems and perspectives in the nineties[M]. New York: Plenum Press. 1994 :65 - 76. [7]陈咏梅.武夷山自然保护区植被生态环境与旅游开发[J].亚热带水土保持. 2005，17(4):25-27. [8] 金静.渤海.黄海海域山东沿岸海洋木生真菌的分类研究[D]. 山东农业大学博士论 文,2004. [9]网络版， [10]杨志多. 山东沿海岸海洋木生腔菌纲真菌多样性研究[D].青岛农业大学硕士学位论文，2008 [11]吴文平. 几种产具纤毛分生抱子的腔抱菌[J]. 河北省科学院报. 1991，2:62-67. [12]袁毅，陈宗泽，王旭明. 中国一新记录属—裂孢属[J]. 菌物系统. 2000，19(4):566-567. 三、研究方案(研究内容、目标、研究方法、技术路线、拟解决的问题、特色或创新点等) 1(内容:(1)从不同的基质上检查腐生真菌。 (2)从基质上挑取真菌并进行切片观察。 (3)观察并记录腐生真菌及其种的特征。 2(目标:分离出5-7种不同的腐生真菌。 3(研究方法:(1)在体视镜下检查采集的基质，并用无菌袋保存其上有所要观察的腐生真 菌的基质标上标号。 (2)在实验台上用直接挑取法挑取所要观察的真菌，并进行切片显微镜观察。 (3)对观察到的真菌进行拍照、测量。利用有效数据查阅资料鉴定其为哪一 种腐生真菌。 4(技术路线: 标本采集 将标本放在无菌的塑料盒中 从标本上挑取真菌并制片放于显微镜下观察 对观测到的真菌进行形态描述 对真菌进行分离培养 对观测的真菌进行初步鉴定到属 进一步鉴定到种 ? 四、进程计划(各研究环节的时间安排、实施进度、完成程度等) 6月10日至6月20日:了解试验内容，查阅有关资料，设计试验过程; 6月21日至8月27日:开始试验，观察标本，检查腐生真菌，描述真菌形态特征，鉴定其 所属种类，及时解决试验过程中遇到的各种问题; 8月28日至10月5日:毕业实习结束，整理处理实验数据，写毕业论文。 五、导师评语 年 月 日 青岛农业大学毕业论文,设计,教师指导记录表 学生姓名: 专业班级: 指导教师: 论文题目:山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究 指导时间 指 导 内 容 介绍论文的科研背景以及本次研究的意义，指导查阅相关书籍;5.25~6.10 撰写开题报告;练习材料的保存方法和观察方法。 在系统熟悉实验的步骤、方法、仪器的使用方法，以及真菌的观6.11~7.25 察技术和照相技术的同时，开始观察、描述、分离、培养腐生真 菌;指导做好相关的记录工作和初步的描述工作。 继续真菌描述、拍摄、分离和培养，指出实验的不足之处和需要7.26~8.27 补充完善的地方，指导真菌的初步鉴定方法和依据的书籍。 指导论文的设计和写作工作，提供相关的材料和书籍，之处真菌8.28~10.2 形态描述过程中的不恰当的地方。 指导教师签字: 学生签字: ? 毕业论文,设计,中期检查表 2010 年 7 月 28 日 学 院 农学与植物保护 指导教师 学生姓名 专业年级 学号 题 目 山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究 计划完成时间 2010年10月2号 经过前一段时间的查阅资料，开始试验，观察标本，检查腐生工 真菌，在光学显微镜下观察检查到的真菌，描述真菌形态特征，对作 其大小进行测量，照相。在这一时期，观察标本20余份，对三种真进 菌进行了形态表述和种类鉴定，确定了两个种一个属:两个种是桦 小蕉孢壳Diatrypella favacea和栎小蕉孢壳Diatrypella quercina，均展 是假蕉孢壳Diatrypella。在实验的过程中及时修改实验方案，及时情 解决试验过程中遇到的各种问题。 况 学生签字: 检 工作进展情况基本属实，实验进行的步骤规范正确，严格按照查 要求进行，对于已经鉴定出来的两个种和一个属，鉴定也较准确。情 在接下来的时间内，继续努力，高质量完成本部分实验。 况 及 意 见 检查人员签字: 备 注 毕 业 实 习 鉴 定 表 姓 名 专业班级 指导教师 实习地点 青岛农业大学植物病理学真菌实验室 实习小结: 经过两个多月的实习，将我们平时在课堂上所学知识应用到实践当中。在本次实习过程中，加强了对制片技术的了解。在实验过程中，虽然遇到困难，但是都积极解决了问题。在实习过程中，还了解了真菌鉴定的基本方法，为以后的学习打下基础。 本次实习不仅锻炼了动手能力,掌握了基本的实验技能,为以后的进一步学习打下了坚实的基础;而且加深了对于腐生真菌的认识，了解到一个极具潜力的领域，这段时间得到的宝贵经验为以后的继续研究和深造提供了可能。 通过实验我意识到收集资料的重要性。资料收集要尽可能全面，才能保证自己的实验不会因重复别人的研究而浪费时间和精力;同时保证自己的实验具有意义。 实习单位或指导教师意见: 日常表现成绩: 签字: 年 月 日 毕业实习成绩:[实习报告成绩(60%)+日常表现成绩(40%)=毕业实习成绩 ? 山东半岛沿海地区腐生真菌种类和分布研究 摘要:本文主要对山东半岛沿海岸地区腐生真菌的种类和分布进行了初步研究。2010年6月至2010年10月，从威海、青岛、烟台等近海岸地区进行了枯朽木生植物标本的采集，所采标本装入无菌的塑料袋中带回实验室，采用直接检查法和湿室诱培法进行检查鉴定。共观察了30多份标本，初步鉴定出3个属的5个种，包括Diaporthe syngenesia、Diatrypella favacea、Diatrypella quercina、Pleospora calvespora、Pleospora epilobii，该研究结果对于山东半岛沿海地区的腐生真菌资源的保护和利用具有重要意义。 关键词:山东海岸;腐生真菌;形态特征;种类分布 Types and distribution of Saprophytic Fungi from the Coast of Shandong Peninsula Student majoring in Plant Protection Sunjunchao Tutor Lubingsheng Abstract:This paper is mainly about the types and distribution of the kinds of saprophytic Fungi collected from the coast of Shandong Peninsula. About more than 30 specimens were collected from Weihai, Qingdao, Yantai coasts from June 2010 to October 2011 and examined in the past more than 3 monthes. The specimens were brought back to the laboratory in the sterile plastic bags and were examined directly while they were still fresh and moist under stereo-microscope or incubated in the moist boxes. Three genera and five species of saprophytic fungi from the coast of Shandong Peninsula were identified. Three genera are DiaportheDiatrypellaPleospora and five 、、 species are Diaporthe syngenesia、Diatrypella favacea、Diatrypella quercina、Pleospora calvescens and Pleospora epilobii. Key words: Shandong coast; saprophytic fungi; morphological feature; types and distribution ? 引言 真菌，低等的真核生物，以分解吸收为营养方式，常具有分枝繁茂的丝状营养体，产生大量孢子来进行有性和无性繁殖。真菌作为分解者在自然生态系统中起着极其重要的作用，维持自然界物质能量的转化循环;真菌的种类丰富，分布广泛，存在于土壤、水体、空气、生物体内外及其残骸中，营腐生、寄生和共生生活。除此之外，一部分真菌可造成动植物病害;还有一些可与其它生物共生，互惠互利;某些真菌的代谢产物可被开发利用，广泛应用于工业、农业、食品发酵、医药及化学等工业上[1]。 对于脊椎动物、高等植物和昆虫种类的研究调查方面，我国的研究者做了大量工作，然而已知的真菌物种与估计的相比少之又少，这与我国的生物多样性是不相称的。在真菌生物多样性研究方面，与其他国家相比我们的研究工作落后许多，有些甚至不能准确地说出我国或任何一个地区的真菌物种种类[2]。 自然界已知的的真菌大约有150万种以上(Hawksworth. 1991)，这其中的7万多种真菌已经被人们研究认识和描述过。有专家研究统计，我国的真菌物种数有 --2518万种以上。大部分专家认为从我国的地理位置来看，我国的真菌物种可达20万种，也就是说这是一座还未开发以及迫切需要开发的宝藏[3]。 根据戴芳澜教授的《中国真菌总汇》 (1979)中记载，我国已知真菌物种只约7000种，现知种数只占全国估计数的3%左右[4]。而且我国在菌物物种分类研究上空白多，起步晚，家底不清。比我国的国土面积小得多的英国和瑞典,已调查研究的真菌种数就比我国多得多，即使是印度的真菌数量也是我们的两倍。而且在真菌系统中有100多个目，我国所涉及的研究的连这个数的一半都不到，许多目、科的真菌在国外已有专著，而在国内却一无所知[2]。 真菌的分类的研究是基本的物种研究,是生物多样性研究的基础。而我国长期以来对于有关研究工作不够重视，甚至有不在行的专家或者自以为在行的专家对分类研究存在很深的误解和错误的指责。还有的认为具有生产利用价值的才是资源，用途不明的不必浪费时间、精力和资源去进行分类研究等等。总之他们不理解真菌分类研究的重要性以及必要性，导致我国的真菌分类的研究工作进展不甚理想。事实上就真菌物种的价值往往不限于其简单的生产利用价值[5]。物种多样 2 性需要真菌分类研究来支撑，如果不作真菌系统分类研究，其物种多样性只是一句空话，也就谈不上真菌资源的合理开发利用以及种质资源的保护和利用等一系列问题。 经过多年来国内外学者们的共同努力，真菌分类已经发展成为一门基础学科，真菌分类学在真菌学乃至整个生物学的研究中起到非常重要的地位，并且与其他相关学科具有密切的联系。作为一门有300多年的历史的传统研究学科，其分类方法也伴随着科学技术的发展而与时俱进。在研究中常用的方法主要有常规形态分类法、电镜技术分类法、数值分类法、化学分类法和分子生物学分类法[6]。同时，分类技术也呈现出多样化，而且DNA和PCR等分子方面的高科技的技术也应用于分类研究上，这就提高了真菌鉴定的准备性。但是现代真菌分类学的基础还是真菌形态学,在应用分子生物学技术时首先必须对真菌进行准确的鉴定,如果形态鉴定本身不准确,那么用分子生物学技术进行的分类就成了无本之源。同样,用分子生物学性状可以验证形态学特征的可靠性和增加我们对形态学性状进化的了解,二者是辨证统一的关系。现代真菌分类学正向全形态过渡,对分类方法的要求是: ?简单并且容易操作;?可以重复操作，重复性好;?分型性要高，对于各种类型具有分辨性;?分辨力强，具有特定的形态分类;?成本要求低。同时,真菌分类必须结合其真菌的形态特征、生态学、分子生物学特性、新陈代谢、解剖学特性、结构等综合因素考虑才能达到要求。因此,在具体分类工作中,应该根据物种的各个形态和性状找出物种间彼此的相关性关系[7],充分挖掘物种的形态学性状、生理性状、生化性状和分子生物学性状等信息,综合分析,这样才能建立自然的生物进化系统关系[9]。 常规形态分类法即形态鉴定方法还是目前真菌分类中最常用的方法，其原理主要是用普通光学显微镜对真菌进行形态观察和特征描述,依靠真菌的形态学和解剖学特征对真菌进行分类。电子显微镜的出现与应用给真菌学的研究提供了一个分辨率更强的工具,用来观察真菌的细微结构和亚显微结构,使人们能更深入地认识真菌的细胞壁、隔膜、细胞核、鞭毛和孢子饰纹等。化学分类就是根据真菌的化学特征对其分门别类,即以其化学成分的种类、结构和性质等特性为依据,以传统分类为基础对真菌进行分类,能从本质上揭示生物种间的系统发育和亲缘关 系,使分类更接近自然状态。近年来以分子生物学技术为代表的多门新兴学科和技术的引入为真菌分类学发展提供了良好的机遇[14]。 腐生真菌作为真菌中的一大类，不仅在自然循环中起着重要作用，而且在分类中占有重要意义。腐生真菌是一类从无生命的有机质中吸取营养物的真菌，在自然界中广泛存在，主要是从动植物的遗体，动物和植物的脱落物，如落叶、枯枝、树根以及动物的粪便和毛发等获得营养物质[15]，腐生真菌的特点是繁殖快、生存能力强和形态多样等。正是由于腐生真菌的特点，在它们当中许多种类具有潜在应用价值。腐生真菌大多数生活在土壤中或动植物残体等基质上，通过对有机化合物的降解使物质分解或腐化，促进自然界的碳循环。因此人们越来越关注腐生真菌，其研究也成为国内外研究的热点之一。 在自然生态系统中，腐生真菌是一类特殊的功能类群，腐生真菌是作为分解者的身份在生态系统中起到非常作用[8]，主要参与生态系统中一些废物(生态系统中植物的残体以及所产生的凋落物，动物的尸体和排泄物等)的分解过程。腐生真菌与绿色植物一样，在生态系统中的作用同样是不可缺少的。可以想象，如果没有腐生真菌的存在，生态系统会被自身所产生的垃圾所覆盖，的自然界就失去其丰富多彩性。所以，弄清楚腐生真菌的分类，对其种类的应用和开发也有重要意义。 本研究所用标本均采集于山东半岛沿海地区，山东半岛是中国第一大半岛，位于山东省东北面，以羊口-秀珍河为临界，半岛三面临海伸入黄海与渤海之间。丘陵和低山占总面积的70,。丘陵海拔大部分在200公尺左右。有数列东北-西南走向的山岭，海拔在500,1000公尺，以崂山最高。沿海地区有海积平原，面积不足30,。半岛地区的海岸线曲折，多海湾、岬角和岛屿。山东半岛气候属暖温带湿润季风气候。1月均温,3,,1?，8月均温约25?，极端最高温约38?。10?以上活动积温为3 800,4 100?。年降水量为650,850毫米，半岛南侧地区的降水量在800毫米以上;西北地区的滨海平原的降水量为600毫米。年降水量的60,集中于夏季，且强度大，常出现暴雨。降水年均相对变率约20,。年均相对湿度在70,以上。半岛沿海东侧4,7月多海雾，年均雾日30,50天[10]。正是由于山东半岛独特的地理环境和气候条件，造就了其丰富的种质资源，植物种类与数量很多，因此在其上 4 生长的腐生真菌也具有有研究价值。 该区的微生物的种类相对较多，为真菌的研究提供了各种珍贵的自然资源。因此这一地带的标本资源丰富，诸多标本具有代表性。由此也能看出这里独特的自然资源和宝贵的真菌的原料。但是，对于该地区的腐生真菌的报道很少，与其丰富的真菌资源尤其是腐生真菌资源的实际情况极不相衬。本研究旨在通过标本采集和腐生真菌的种类鉴定，逐步对山东沿海地区腐生真菌的种类与分布进行研究，以便更好地保护和利用这些腐生真菌资源。 1.材料与方法 1.1采样地点 2010年6月至2010年10月，在威海、青岛、烟台等近海岸地区，进行了腐生真菌标本的采集。所采标本均装入无菌的标本塑料袋中，带回实验室以待检查鉴定。 1.2 方法 1.2.1 真菌的采集方法 在树林和枯木丛中直接采集植物碎屑(包括木块、枝条、茎杆等)装入标本采集袋，同时将采集人、采集地点以及采集时间等事项用记号笔注明。回到实验室后将标本放在密封性好的无菌塑料盒子中，在盒子底部平铺几层湿润的滤纸进行保湿，密封后在室温下保存3-7天，期间随时检查和观察真菌[11]。 1.2.2 真菌的检查方法 直接检查法:将标本放于连续变倍体视镜下检查，并在标本上用记号笔标出子实体的位置。对检查到的真菌直接挑取分离做玻片，观察并描述真菌的形态，测量孢子的大小，并对各个部位进行照相。将检查到的有真菌存在的标本，贴好标签纸记录下采集地、采集时间等信息后放入标本袋中。 湿室诱培法[12]:对于子囊发育不成熟、未发现子实体或孢子未形成的标本，将标本放入消毒后底部铺有灭菌湿滤纸的保湿缸中，室温下培养。6周后开始定期检查，持续一个月。期间注意定期检查保湿情况，若发现木材干燥，及时补充水分。 1.2.3 真菌的制片方法 制作临时玻片:准备好玻片，浮载剂用无菌水，用挑针挑取子实体放于无菌水 中。需对附属丝或胶质鞘观察时用蓝墨水染色液染色。由于用无菌水作浮载剂易干燥，在显微镜下检查时须及时对玻片补充水分，以防玻片过于干燥，影响观察和拍照。 制作永久玻片[11]:对于已经观察完的玻片需制成永久玻片进行保存，常用的方法:在盖玻片的边缘滴一滴乳油(0.05ml)，乳油会慢慢渗入到盖玻片下代替淡水做浮载剂，然后将载玻片放入50?左右的烘箱中进行烘片，等多余的乳油挥发后，取出玻片后用中性胶封片，封片剂完全干燥后，放入玻片盒中保存并注明信息。 1.2.4真菌的鉴定方法 在体式镜下观察标本上子实体的形态，对于已经成熟的子实体，挑取并在显微镜下测量子囊和子囊孢子的大小或者分生孢子的大小[16];观察其形态，颜色，并做好记录。所有真菌均在OLYMPUS-SZ-II体视镜下检查挑取制片，所有标本均在尼康ALPHAPHOT-2 YS2显微镜下观察、测量、照相。本论文的真菌分类地位及种的记录数均参照《Index Fungorum》 进行鉴定[13]。 1.3 仪器 OLYMPUS-SZ-II体视镜、三星VLUU L730数码照相机 、挑针 、尼康ALPHAPHOT-2 YS2显微镜 、无菌操作台、玻片等。 2.结果与分析 经过5个月的观察和鉴定，共鉴定出5种腐生真菌，其描述和图版如下: 2.1间座壳菌属Diaporthe Nitschke, Pyrenomycetes Germanici 2: 240 (1870) 特征:子囊座发达，黑腐皮壳型或真腐皮壳型，在皮层内形成，铺展型，由基物变质而成，不呈鲜色仅存黑色边缘，寄生于枝干，少数生于枝条;子囊壳以长颈伸出于座;子囊果壁亚革质，内部灰色，有长喙;子囊梭形，有或无侧丝;子囊孢子双细胞，含油球2-4个，长圆形至梭形，无色。无性世代常为拟茎点霉，产生椭圆形或卵形的分生孢子和线形的柄生孢子。 模式种:Diaporthe angelicae (Berk.) Wehm. Nitschke, (1870) 分类地位:子囊菌门Ascomycota ;粪壳菌纲Sordariomycetes ;间座壳菌目Diaporthales ;间座壳菌科Diaporthaceae ;间座壳菌属Diaporthe. 6 2.1.1Diaporthe syngenesia (Fr.) Nitschke ex Fuckel, Jb. nassau. Ver. Naturk. 23-24: 204 (1870) [1869-70] 图1 特征:子囊壳直径1mm，埋生在子座内，7-15个聚集丛生，具长颈竖直露出，壁亚革质，内部灰色，有长喙;子囊45-56×8-12μm，梭形，柄短，多孢子，无侧丝;子囊孢子12-12×2-3.5μm，双细胞，末端稍尖，成熟后1个隔膜，含油球2个，梭形，无色透明。 标本信息:采集地:青岛城阳棉花社区;采集时间:2010.07.18;采集人:于辉霞。 图1.Diaporthe syngenesia. A:基质上的子囊座;B:染色的子囊;C:子囊;D:未成熟的子囊;E-F:子囊孢子.标尺:A=1000μm;B-F=20μm. Fig1. Diaporthe syngenesia. A: Ascoma on the host surface;B:Colored ascus;C: Ascus;D:Immature ascus; E-F: Ascospores. Bars:A=1000μm;B-F=20μm. 2.2 假蕉孢壳属Diatrypella (Ces.&De Not.) De Not., Sfer. Ital.:29 (1863) 特征:子囊座大多发达，穿皮壳形，多少与蕉孢壳相似，逐渐外露;聚集，埋生在发达的真子座或假子座，常具长颈，孔口具沟槽，囊间组织由柱形的侧丝构成;子囊具长柄，顶端近平截，长棍棒状，无色，单层壁，有柄，侧丝呈丝状且有隔膜;子囊孢子腊肠形;无性世代为盘明针孢，无性型为腔孢菌，为枝干上的腐生菌或寄生菌，分布广泛。 模式种:Diatrypella verruciformis (Ehrh.) Nitschke,Pyrenomycetes Germanici 1:76 (1867) 分类地位: 粪壳菌纲Sordariomycete，炭角菌亚纲Xylariomycetidae, 炭角菌目Xyariales，蕉孢壳科Diatrypaceae，假蕉孢壳属Diatrypella. 2.2.1 桦小蕉孢壳Diatrypella favacea (Fr.) Ces. & De Not., Schema di Classif. Sferiacei (1863)图2 特征:子囊壳直径约0.8mm，近球形，单生或群生，埋生或半埋生在基质上， 11-14μm(平均125孔口的颈部竖直露出，一直延伸到基质的外面。子囊123-157× ×16μm, n=20 )，长棍棒状，无色，单层壁，有柄，内多孢子，侧丝呈丝状且有隔膜。子囊孢子7-8×1-2μm (平均7×2μm,n=20)，孢子无数，不规则的堆积，淡黄色，单细胞，腊肠状[12]。 标本信息:采集地:烟台昆嵛山;采集时间:2010.08.19;采集人:于辉霞。 2.2.2 栎小蕉孢壳Diatrypella quercina (Pers.) Cooke, J. Bot., Lond. 4: 99 (1866)图3 特征:子囊座直径约2mm，垫状，黑褐色至黑色;子囊壳直径约0.6-0.7mm，埋生在发达的子座内，具长颈竖直露出，孔口具沟槽。子囊108-140×11-15μm，长棍棒状，多孢子，无色，单层壁，有柄，侧丝呈丝状且有隔膜。子囊孢子8-12 ×2-3μm，淡黄色，单细胞，稍弯曲，腊肠状，孢子无数呈不规则的堆积。 标本信息:采集地:威海乳山岠嵎山;采集时间:2010.08.07;采集人:于辉霞。 8 图2. Diatrypella favacea. A:基质上的子囊座;B-C:子囊束;D-E:子囊;F-G:子囊孢子.标尺:A=1000μm;B=100μm ;C=50μm ;D-G=20μm. Fig2. Diatrypella favacea. A: Ascoma on the host surface;B-C:Asci;D-E: Ascus;F-G: Ascospores. Bars:A=1000μm;B=100μm ;C=50μm ;D-G=20μm. 2.3 格孢腔菌属Pleospora Rabenh. ex Ces. & De Not., (1863) 特征:子囊座球形，黑色，顶部光滑而无刚毛;子囊圆筒形，内含孢子8个;子囊孢子卵形，壁砖状分隔，无色或黄褐色;有拟侧丝;孢子无附属丝。 模式种:Pleospora herbarum (Pers.) Rabenh. ex Ces. & De Not., (1863) 分类地位:座囊菌纲Dothideomycetes, 格孢腔菌目 Pleosporales, 格孢腔菌 科Pleosporaceae,格孢腔菌属 Pleospora. 图3. Diatrypella quercina. A:基质上的子囊座;B-C:子囊束;D-E:子囊;F-G:子囊孢子.标尺:A=1000μm;B-C=50μm ;D-G=20μm. Fig3. Diatrypella quercina. A: Ascoma on the host surface;B-C:Asci;D-E: Ascus;F-G: Ascospores. Bars:A=1000μm;B-C=50μm ;D-G=20μm. 10 图4.Pleospora calvescens. A:基质上的子囊座;B:子囊束;C-D:子囊;E:未成熟的子囊;F-G:子囊孢子.标尺:A=1000μm;B=50μm ;C-G=20μm. Fig4. Pleospora calvescens. A: Ascoma on the host surface;B:Asci;C-D: Ascus;E: Immature ascus;F-G: Ascospores. Bars:A=1000μm;B=50μm ;C-G=20μm. 图5.Pleospora epilobii. A:基质上的子囊座;B:子囊壳;C-D:子囊;E:未成熟的子囊和子囊孢子;F-G:子囊孢子.标尺:A=1000μm;B=100μm ;C-G=20μm. Fig5. Pleospora epilobii. A: Ascoma on the host surface;B: Perithecia;C-D: Ascus;E: Immature ascus and ascospores;F-G: Ascospores. Bars:A=1000μm;B=100μm ;C-G=20μm. 12 2.3.1 Pleospora calvescens (Fr. ex Desm.) Tul. & C. Tul., Select. fung. carpol. (Paris) 2: 266 (1863) 图4 特征:子囊壳直径约0.2mm，着生在子座的黑色部，顶部光滑无毛，边缘和底部生有硬的深褐色的菌丝;子囊100-128×10-14μm，圆筒形，内含孢子8个;子囊孢子15-21×6-8μm，卵形，壁砖状分隔，有3个横向隔膜和1-2个纵向隔膜，淡黄色。 标本信息:采集地:青岛城阳棉花社区;采集时间:2010.07.18;采集人:于辉霞。 2.3.2 Pleospora epilobii E. Müll. 1951, Sydowia 5(3-6): 290 图5 特征:假子囊壳直径约0.15mm，埋生于发达的子座内，外表层着生长的褐色菌 -124×11-14μm，圆筒形，内含8个子囊孢子;子囊孢子18-23×7-9μm，毛;子囊82 卵形，砖格状分隔，黄色。 标本信息:采集地:青岛城阳棉花社区;采集时间:2010.07.18;采集人:于辉霞。 3.讨论 3.1结论 在5个多月研究过程中共检查了30余份标本，共鉴定出5种腐生真菌。本文主要对5种腐生真菌的形态进行了描述，并说明了采集地点及分布情况。 3.2存在问题 1.不能准确掌握显微境的使用方法，视野调整不清楚可能导致对真菌的重要特征无法准确描述。 2.分离真菌时，有时由于不仔细会漏掉一些小的子囊果，而且有时采用的操作方法不恰当，挑取不到子囊果。 3.由于保存的方法不完善，有时不成熟的真菌无法保存，最终导致细菌的增长，没有得到想要的菌种。 4.对于制作玻片的技术不到位，在显微镜下检查时，对于真菌的拍照有影响，出现重叠想象。有时会出现视野模糊，影响真菌的形态观察，在鉴定时候出现麻烦。 5.对真菌进行显微照相时，操作方法不到位或不准确，经常导致孢子大小测量不准确或是照得的图片不清楚。 6.实习的时间较短，在实验室里的真菌鉴定方面的书籍有限，给真菌的鉴定带来很大的困难。只能借助部分书籍和网络鉴定，这其中必然存在一部分问题。 3.3 心得 经过5个多月的实习，不仅提升了动手能力,还掌握了基本的实验技能,为以后的进一步学习打下了坚实的基础;在这个过程中加深了对于腐生真菌的认识，同时进一步了解了真菌的特征。认识到真菌是一个极具潜力的领域，这段时间得到的宝贵经验为以后的继续研究和深造提供了可能。 14 致谢 本论文是在 教授的悉心指导下完成的。从论文的选题、设计、试验得热心的帮助。路老师渊博的知识、敏锐的学术洞察力和踏实的工作精神，给我留实施到最后的顺利完成、论文的撰写及修改，每一步都得到了导师的耐心指导和下了深刻的印象。路老师宽广的知识面、严谨的治学态度和崇高的敬业精神，在这5个多月的实习时光中时刻感染着我，影响着我，可谓受益终生。 在实习过程中，从开始检查到最终鉴定 师姐给了我极大的帮助，在师姐悉心指导和帮助下才使得论文能够顺利的完成。此外本实验室 师姐在实验进行中也给了我很大的帮助。同时还要感谢一起跟 博士实习的其他本科生， 等其他全体本科生，他们也给予了极大的支持和帮助。 最后，再一次向所有给予支持和帮助过我的老师、同学致以最诚挚的谢意和真诚的祝福～ 参考文献: [1] 魏景超，真菌鉴定手册〔M].上海:上海科学技术出版社，1979. 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