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塔格糖的生物制备及L阿伯糖异构酶性质研究

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塔格糖的生物制备及L阿伯糖异构酶性质研究塔格糖的生物制备及L阿伯糖异构酶性质研究 江南大学博士学位论文 摘要 塔格糖(,,,,,,,,,,)属于稀有糖,是一种在自然界中存在较少的单糖,其甜味类似于蔗糖,而热量值较低,同时还具有抗氧化、降低血糖、益生元及防龋齿的功能特性。塔格糖的生物转化主要利用,阿拉糖异构酶(,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,)异构化半乳糖。本论文主要研究:筛选高产,,的乳酸菌;优化乳酸菌发酵产灿的工艺参数;乳酸菌灿的分离纯化和酶学性质;,,酶活性部位的化学修饰;渗透乳酸菌细胞生物转化塔格糖的工艺条件。 利用半胱氨酸一咔唑...

塔格糖的生物制备及L阿伯糖异构酶性质研究
塔格糖的生物制备及L阿伯糖异构酶性质研究 江南大学博士学位 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 摘要 塔格糖(,,,,,,,,,,)属于稀有糖,是一种在自然界中存在较少的单糖,其甜味类似于蔗糖,而热量值较低,同时还具有抗氧化、降低血糖、益生元及防龋齿的功能特性。塔格糖的生物转化主要利用,阿拉糖异构酶(,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,)异构化半乳糖。本论文主要研究:筛选高产,,的乳酸菌;优化乳酸菌发酵产灿的工艺参数;乳酸菌灿的分离纯化和酶学性质;,,酶活性部位的化学修饰;渗透乳酸菌细胞生物转化塔格糖的工艺条件。 利用半胱氨酸一咔唑法、薄层层析法快速筛选得到产灿的乳酸菌,,;,,,,;,,,,, ,,,,,根据细胞形态、生化特性,结合,,, ,,,,,判定,,;,,,,;,,,,, ,,,,属于植物乳酸杆菌,命名为,,;,,,,;,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,;;,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,? 对, ,,,,,,,,, ,,,,发酵产酶条件优化及,,产生机理探讨,结果表明,, ,,,葡萄糖、玉米浆为碳源和氮源时,甜酶活最高;有机氮源效果优于无机氮源;发酵条件优化结果:发酵初始,, ,(,,培养温度,,,;,接种量,,,培养时间,, ,;,,阿拉伯糖是趟产生的最适诱导物。 经过溶菌酶处理、超声波破碎、硫酸铵沉淀、,,,,—,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,离子交换色谱和,,,,,,,,, ,,,,,凝胶过滤等步骤,纯化得到,,,,(,,;,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,),,,,(,,,,呈现单一条龋校蹋眉觳獯慷却铮梗叮ィ让富钌撸玻毂叮锏剑玻担?,,,,,回收率,,,。由,,〔;,,,,,得到,,,,相对亚基分子质量为,,(, ,,而凝胶过滤色谱求得,,,,的相对分子量约为,,,(, ,, 因此,推断,,,,分子内有,个亚基,是一种三聚体酶。 纯化的,,,,最适反应温度为,, ,;,最适反应,,为,(,。稳定性实验表明,在,,。;条件下保温, ,,酶活保持,,,,:在,, ,(,—,(,环境(,,。,)保存, ,后测定残余酶活在,,,以上,表明酶在,,,(,—,(,范围内稳定。 ,,,,,,,和,,,对酶活几乎没有影响,而,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,寸和,,,,增强了酶活,,,,,增强酶活最大,添加,, ,,,,,,,,,,,,酶活力最高;,,,,、,,,,,,,,,,,,,,,,,,和,,,,则分别对酶产生了不同程度的抑制作用,而,谚,完全抑制了酶活。 ,,,,最适底物为,(阿拉伯糖,其次为,(半乳糖,另外,,,,,对海藻糖、木糖和果糖也具有催化作用;不同糖醇对,,,,均产生了抑制作用,木糖醇、甘露糖醇抑制作用较弱,而,(阿拉伯糖酵则完全抑制了酶活。采用,,,,,,,,,,,,,,,作图法,求得,,,,作用于,(半乳糖和,(阿拉伯糖的特征常数分别为,。,,, ,,,,,,,,。,(, ,,,,,,,,,,和,, ,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,。 纯酶,(端结构前十个氨基酸残基连接依次为:,,,,,,,,,,,发现与,,;,,,,;,,,,,,,,,,,,,,、,,;,,,,;,,,,, ,,,,,,,,来源的灿一致;进化同源性表明乳酸菌来源的,,氨基酸序列高度保守。 ,,,,在不周,,环境下紫外一可见扫描发现,在,,, ,,吸收峰主要是色氨酸残基, 摘要随,,增加,,,,皿吸收峰强度增加,且吸收峰波长有轻微红移,表明色氨酸基团有可能从豌水区移动或翻转到酶蛋白分子外部。 ,,,,,,,(脱除,,,,)加入,, ,,, , ,,,时,,,,,酶活又恢复到原来的水平。,,,,,,,,(原酶)和,,,,,,,进行差示扫描量热 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 表明,,,,,,,,,热稳定性高于,,,,,,,,因此认为,,,,分子中结合的,,,,,,,,维持酶活力至关重要,而且其与酶蛋白结合形成的特殊构象对酶的热稳定性也起着重要作用( ( ,,,,荧光分析表明,激发光波长为,,,皿时,最大发射荧光强度为,,, ,(,〔,。对荧光产生贡献的色氨酸残基可能位于一个疏水区环境中,除了在,,, ,,处有一发射峰外,在,,,,,处也有个小峰。 圆二色性分析表明,,,,,,,,,脱除,,,,后,蛋白质的二级结构发生了显著变化,其中,,(折叠由,,(,,减少为,,回转结构由,变为,,(,,。随着结构变化,,,,,,,,,中更稳定的,一折叠减少,导致,,, ,,,,具有较低活性,耐热性变差。 ,,,、,,,,和,,,,化学修饰造成酶活下降,说明构成,,,,活性中心的必需氨基酸残基有色氨酸、丝氨基酸和组氨酸。,,,滴定表明该酶含有,个色氨酸残基,进一步用,,,,法分析化学试剂修饰后残余酶活力与时间、修饰剂浓度的关系,计算出活性中心必需色氨酸残基数目为,,组氨酸残基和丝氨酸残基均为,个。 底物保护试验证明:色氨酸残基、丝氨酸残基处在与底物结合部位。组氨酸不处在底物结合位点,可能位于催化活性部位( 酶的荧光淬灭研究发现,加入, ,,,,,半乳糖,酶的发射光谱峰红移至,,, ,,,,峰的强度降低,导致荧光淬灭。同样加入,,,,,,,,,,,,时,且最大吸收峰红移至,,,,,,,导致荧光淬灭( 酶经,,,修饰后,?(螺旋从,,(,,下降到,,(,,,,(折叠则完全消失,回转则从,增加到,,(,,。,,,修饰色氨酸残基造成酶活力下降,从二级结构的变化可知,修饰导致底物结合部位的色氨酸残基周围环境发生明显改变,从而造成与底物结合能力下降。 渗透细胞生物转化半乳糖生产塔格糖的工艺:采用,, ,,,,〔,,湿细胞,底物浓度为,,,,,,,反应温度,,,,,转化时间,, ,,转化率达,,,(,,。 。 通过,,,,分离酶反应产物,进一步采用红外光谱鉴定,证明生物转化半乳糖得到的产物是塔格糖。关键词:,(塔格糖,,(阿拉伯糖异构酶,植物乳杆菌,,(,,分离纯化,生物转化 江南大学博士学位论文 ,,,仃,;, ,,,,,,,,,, ,, , ,,,,,,,,,,,,,;, ,, ,,,,,,笛,,,,, ,, ,,;,,,,(,—,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,嬲,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,;,,,, ,, ,,, , ,,,,, ;,,,,,,,; 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,;,, ,,,,;,,, 乳酸菌,,:,, ,,;,,,,;,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,, 植物乳杆菌,,(, ,,阿拉伯糖异构酶,,,,,, ,,,,—,?,,,,椋睿铮螅?,,,,,,,,; 完整【广阿拉伯糖异构酶,,,,, ,,,(,—,,,,,,,,, ,,,,,,,,, 脱辅基,阿拉伯糖异构酶舭 ,,,,,,,,,,,,,,,,,, 苯胺噻唑啉酮,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, 苯乙内酰硫脲;, ,,,;,,,, ,,;,,,,,, 圆二色性, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, 变性湿度,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, 相对迁移率,,, ,,,,,,,,,,,,,;,,,,,, ,,,,,,,,,,, 差示扫描量燕法,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,; ,;,, 三硝基苯磺酸,,? ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,; ,;,, 对氯汞苯甲酸,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, 苯甲基磺酰氟,,, ,(,,,,,,,;;,,,,,,, ,挨代琥珀酰亚胺,,,, ,,,,,,,,,,;,,,,,,,, 焦碳酸二乙酯,,, ,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,, 碳二亚胺盐酸 独创性声明 本人声明所呈交的学位 论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含本人为获得江南大学或其它教育机构的学位或证 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 签名: ,生兰垡 日期: ,,年岁月纠日 关于论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定:江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以将学位论文的全部或部分内容编八有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文,并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 。 , 签名:,丝星 导师签名: 三三主主 日期: , ,年;月,,日 第一章绪论 第一章绪论,(,。功能性稀有糖,(,(,稀有糖概念 稀有糖是近年来国际上研究功能性甜味剂的一个热点。,,,,年,在日本香川大学主办的第二届国际稀有糖会议上,国际稀有糖协会(,,,,)把稀有糖定义为“在自界存在但含量极少的一类单糖”。在随后两届稀有糖国际会议上对稀有糖概念进一步拓展为“在自界存在但含量极少的一类单糖及其衍生物”〔,,,〕。,(,(,稀有糖研究现状 稀有糖生物转化主要利用,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,、,,,,,,, ,,,,;,,,,、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,和,,,,,, ,,,,,,,,,等酶作为催化剂,通过对各种单糖(主要是四碳糖、五碳糖、六碳糖)之间的相互转化而获得各种稀有糖。目前研究较多的是五碳和六碳稀有糖。,,,,,,,,,研究发现,?,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,能催化所有五碳酮耱和六碳酮糖;,位上的差向异构体,生成相应的酮糖【,棚。同时还利用这种酶制备出大量不同稀有糖:从,(果糖差向异构成,(阿洛酮糖【,卅;把,(塔格藉转化成,(山梨糖,还可以催化,山梨糖、【广阿洛酮糖分别生成,(塔格糖和,果群“阳(,,,,,,, ,,,,,,,,,能催化多元醇和酮糖之间的相互转化,如以,,,,,,,,,,为底物制备,,塔格糖,而利用其逆反应,可以把,(塔格糖转化成,(塔圉糖醇【,,,】、,(阿洛酮糖氧化还原成,(蒜糖醇和,(塔圉糖醇〔,,,,:,〕、,(山梨糖则还原,,艾杜醇,,习。,啪,确,【,,】等人分离纯化的,(木糖还原酶转化木糖为木糖醇,两且也能还原,(和,(型阿拉伯糖、核糖和来苏糖;不同来源的,,,,,, ,,,,,,,,,转化六碳酮糖生成相应的醛糖,,,,,,,,〔,,,,,,等人利用,,鼠李糖异构酶分别把,(阿洛酮糖、,(果糖转化成,一阿洛糖和,,甘露糖;而,,,,,,,,〔”】等人利用,(木糖异构酶转化,(阿洛酮糖为,(阿洛糖和,,阿卓糖;,,,,,,,,,,,】等人研究发现,(木糖异构酶对所有,一和,型四糖能进行异构化反应生成各种稀有糖。,,,,,和,,,,,,,,,〔,,。,,】等人利用来自不同细菌,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,生产,(阿洛酮糖,并研究了,(阿洛酮糖在医药领域中的优良性质。,,,,,,,,,根据目前对稀有糖的研究资料,建立了各种稀有糖之间的相互转化及可能的生产途径,即,,,,,,,,,环型理论(图,(,),包括四碳糖环、五碳糖环及六碳糖环【,,】。目前主要研究了六碳稀有糖中的,(型,而大多数稀有糖的结构和功能仍没有研究清楚。 近年来科学家致力于研究的稀有糖主要有,(阿洛酮 糖(,(,,,;,,,)、,(阿洛糖 (,,,,,,,,)、,?塔格糖?(,,,,,,,,)等。日本学者研究发现,,,阿洛酮糖和,(阿洛糖具有重要的生理功能,不但具有甜味剂效应,而且可以抑制肿瘤和保护肝脏,还能作为合成医药的中间体。目前日本利用果糖通过微生物发酵生产阿洛糖和阿洛酮糖正迸行中试,,,,,年,,,,,,,,,等人使用连续生物反应器和分离系统,进行大规模制备,(阿洛酮糖获得成功,相信不久将来工业化产品就能上市,,,创( 江南大学博士学位论文 图,—,六碳稀有糖之间的相互转化?, ,,,(,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,?肛罐叫?,),,,,;,,,, ,,,,,,;,,,, 第一章绪论 塔格糖环式结构 : ,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,),—,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,, 钐,,,, ,,,,,,,,,,,:,,一,,。,((,,”“, , ,;。 塔格糖是一种己酮糖,纯品为白色晶体,熔化温度,,,(,,,,,,熔点,,,。,,玻璃化温度,,,,。易溶于水,水溶液清澈无色,微溶于乙醇,溶于水后会引起沸点升高和冰点降低,但并不吸热,因此不会产生清凉的口感(在,,,(,范围内均可稳定存在(容易发生美拉德反应,在较低温度下即可发生焦糖化反应。甜味类似于蔗糖,而热量值只有,(,删,,相当于蔗糖热量值的,,,;,,,(,,,)浓度塔格糖甜度为蔗糖的,,,,没有后味也不会产生任何不良风味,是,,,批准的,种低能量甜味剂中唯一一个口感、甜度和蔗糖最相似的甜味剂〔,,,。相对而言,塔格糖的甜味刺激较蔗糖快,和果糖相似。此外,塔格糖对强力甜味剂还有很好的协同增效作用,包括甜蜜素、糖精、阿斯巴甜、安赛蜜、甜菊糖、纽甜和三氯蔗糖等〔,,,。 塔格糖首先发现于热带植物,,,,,,,,,(,,种常青树)的树胶中,另外苔藓、地衣等低等植物中也存在少量塔格糖,后来从加热过的牛奶、奶粉、酸奶、奶酪等奶制品中也检测到塔格糖的存在(,(,,,,,,,,),由于牛奶和奶粉在食品加工中普遍使用,因此塔格糖也普遍存在于各类食品中【,,“。,(,(,塔格糖代谢途径及安全性,(,(,(,塔格糖代谢途径 在,,;,,,,;,,,, ,,, ,,,,,,,;,;;,属微生物中,塔格糖以塔格糖(,(磷酸途径进入半乳糖途径代谢。塔格糖一,(磷酸进入三羧酸循环,在半乳糖(,一磷酸异构酶、塔格糖一,(磷酸激酶以及二磷酸塔格糖醛缩酶作用下分解生成二羟基丙酮和三磷酸甘油,最后转化为各种发酵产品。而在动物和人体内没有塔格糖一,一磷酸代谢途径,研究发现在试验田鼠体内塔格糖主要通过肝脏代谢,其代谢类似于果糖,但代谢速度只有果糖一半。目前有许多假设推测塔格糖在人体肝脏中的代谢途径,假设认为塔格糖通过丙糖磷酸盐转化成,,磷酸(果糖和,一磷酸一葡萄糖,然后进行糖酵解和三羧酸循环(图,(,)。实验证明消化吸收的塔格糖通过上述代谢途径进入人体,不会产生任何副作用,没有消化吸收的塔格糖进入结肠发酵生成大量短链脂肪酸,改善了肠道卫生,促进了人体健康〔,,,,”( , 江南大学博士学位论文 ?。, ,;,?…‖ , , ,? ,甜种, ,: ;,;廿。,〕 ,:, ;,,,,:, , ,一,一: ,,,,,,,…一?,,,,,, 、,? 、 ,, , 翔册,…一, 卜愀, 。: ,埘岫,,,,, ,“了“卜,,?,:,:;; ,?,,,, :: 。„? ,: 一,,—叫,,,,——, ,,,,,:,,,,”,,, 聊础妇、,, :,; “; ?,:,。,,,,,,,,,, ,, , 。, ,,, , 警髓强?囊黾帆,,响峨 ,,,~??,:,, 一。 ,, ,,, ,,,(,(,(,塔格糖安全性 ,,,,,,〔,,,,,〕等人对塔格糖进行了,, ,毒理学和遗传毒理学研究。在,, ,小鼠实验中,实验组每天喂食中添加,,、,,,、,,,、,,,塔格糖,研究结果发现:在高剂量,,,、,,,时,实验组部分小鼠有时出现轻微腹泻,而全部实验小鼠体重普遍增加。同时发现实验组小鼠肝重增加和很小限度肝细胞肥大,而没有发现病理变化。研究认为实验组肝重增加和肝细胞肥大是对高剂量塔格糖的一种适应造成的结果,而,,塔格糖没有产生任何上述不良影响。通过采用五种 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 遗传毒理学研究 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ,从致癌性、微粒体、卵巢细胞染色体、淋巴细胞及骨髓微细胞核对塔格糖遗传毒理学进行了深入研究。研究发现在实验剂量内,没有发现变异细胞数量的增加和卵巢细胞染色体变异显著变化,也没有出现淋巴细胞变异频率的增加和骨髓微细胞核显著变化。所以可以认为塔格糖不会造成慢性和遗传毒理性病变,因此在食品中使用是安全可靠的。,(,(,塔格糖的功能性质,(,(,(,抗氢化作用 ,,,,,,,,,,〕和,,,,,,〔,,,等人研究发现塔格糖具有抗氧化作用,从而避免细胞受到损害。,,,,,,,等人研究采用体外培养的雄性小鼠肝细胞暴露在呋喃咀啶(治尿路感染药)下,在呋喃咀啶致死细胞量为,,,肛,时,采用高浓度塔格糖(,,,,,,,,,,)可以完全保护肝细胞不受伤害,而同样浓度的葡萄耱、甘露糖、木糖没有任何保护作用。同时塔格糖也阻止了由呋喃咀啶导致的细胞内,,,(谷胱甘肽)的减少,从而保护了由于,,,减少产生对肝细胞的伤害。而,,,,,,等人培养老鼠肝细胞时发现塔格糖阻止了由铁离子催化 , 第一章绪论脂肪过氧化反应形成的隔膜以及蛋白质羰基的形成。原理是塔格糖与铁离子形成稳定的螯合物,避免羰基形成及过氧化反应引发的自由基,从而消除由此产生的毒性对细胞和身体的伤害,而己醛糖像葡萄糖、半乳糖不具有这种性质。,(,(,(,低热量 对塔格糖产生低能量的原因目前有两种解释?:一是塔格糖抑制了其它碳水化合物的吸收,即通过抑制小肠黏膜上相关碳水化合物的转运酶,对小肠黏膜上酶的动力学研究发现,塔格糖抑制了蔗糖转移酶;二是塔格糖是一种不易消化吸收的单糖,许多动物实验发现,塔格糖消化吸收率只有,,,(,,,,塔格糖在小肠中只有很小部分吸收,大部分进入大肠发酵。,,,,,,,,【,,,等人利用小鼠研究发现塔格糖所提供的能量远低于蔗糖,而使用,,,标记的塔格糖迸行代谢研究显示,它在体内和静脉内的代谢有效能量值为零。由此认为塔格糖是一种低能量甚至零能量甜味剂。,(,(,(,益生元 ,,,,,,,〔,,,和,,,,,,,,,〔,,〕等人利用塔格糖进行临床实验.
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分类:工学
上传时间:2017-12-05
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