[计划]外用中药【白芷香肤保健液】对黑色素产生过程中酪氨酸酶的抑制作用

[ 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 ]外用中药【白芷香肤保健液】对黑色素产生过程中酪氨酸酶的抑制作用 外用中药【白芷香肤保健液】对黑色素产生过程中酪氨酸酶的抑制作用 摘要 目的:通过测定【白芷香肤保健液】对酪氨酸酶的抑制率，揭示其治疗黑色素增多性疾患的机制。 方法:实验于2004—0I,05在福建中医学院毒理实验室完成，采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶活性。 结果:【白芷香肤保健液】在高(250 g,L)、中(200 g,L)、低(150 g,L)3个不同浓度对蘑菇酪氨酸酶的活性均有很强的抑制作用。最高抑制率和t值分 别是:高组97(58,，58(97;中组96(32,，59(25;低组96(14,，60(06。其抑制作用，随药物浸泡时间和浓度的增加而增强。与对照组比较，差异有显著性意义(P<0(001)。 结论:【白芷香肤保健液】治疗黑色素增多性皮肤病的主要机制是抑制酪氨酸酶的活性。 主题词:黄褐斑;外用药(白芷香肤保健液);一元酚单氧酶 0 引言 黄褐斑是一种慢性难治性色素代谢增多性皮肤病。近年来的国内外研究资料 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明黄褐斑的病因与体内氧化与抗氧化平衡失调、内分泌失调、皮损区微生态失衡、机体微量元素含量异常、血液流变学改变以及紫外光照射、口服避孕药等因素有关。在治疗上，现代医学主要以化学脱色为主，如用氢醌、壬二酸、维甲酸、酚化合物等。一般需半年以上见效，且复发率高，并有造成永久脱色和药源性褐黄斑之弊心-。 由于酪氨酸酶是黑色素产生过程中的重要催化酶，控制其活力即可控制黑素生成的量。因此，本研究通过测定【白芷香肤保健液】对酪氨酸酶的抑制率，揭示其作用机制，为用于治疗黑素增多性疾患提供科学的实验依据。 1材料和方法 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 :以细胞为研究对象，重复观察测量的验证性研究。 单位:一所中医学院中药教研室。 材料:实验于2004—0I,05在福建中医学院毒理实验室完成，实验室等级为二级。仪器:752紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司，分析仪器总厂)。试剂:蘑菇酪氨酸酶(tyrosinase(EC(1，14，18，1);DL一多巴(DL—B一3，4-dopa)。上述两种试剂均购自美国Sigma公司。药物:药物来源:【白芷香肤保健液】组方中药材，均购自福建中医学院国医堂(药材来源于福州市药材站)。经福建中医学院中药鉴定教研室金琪漾教授(原中国中医药学会中药鉴定专业委员会副主任委员)鉴定，符合中华人民共和国药典规定。方药组成:当归、山茱萸、山楂、甘草、食用白米醋等。中药制备方法:中药复方饮片打成粗粉(40目)后，称取粉末25 g于具塞三角瓶中加食用白米醋100 mE(福州民天集团公司生产，产品批号:2003,03,05A)混匀，分别浸泡60，50，40，30，20 d 5瓶，隔天震摇1次。分别过滤上清液，制得浓度为250 g,L的药液(每100 mL白米醋中含原生药25 g)。再用白醋稀释，将中药生药终浓度设定为高(250 g,L)、中(200 g,L)、低(150 g,L)3个不同浓度供试。 设计、实施、评估者:研究设计者为第一作者，实施干预者为全部作者，评估者为第一作者。 方法:酪氨酸酶活性测定方法:采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶活性。反应混合物与体积见表1。 测定时，用移液管按表1所示体积，分别准确吸取A，B，C，D 4组反应液的前3种于10 mL容量瓶中，摇匀，置37?水浴中保温10 min，取出后加入1(5 g,LDL一多巴2 mL，于2，3，4，5，6，7，8，9 min时用分光光度计测定吸光度(A475)值。以磷酸缓冲液为空白，以不加药物的反应组为对照，分别测定酪氨酸酶的活性。每次实验重复3次，取平均值，最后按下式计算酪氨酸酶的抑制率:酪氨酸酶的抑制率(,)=[(A—B) 一(C—D)】,(A—B)X 100,，A:未加中药的加酶混合液所测的吸光度。B:未加中药亦未加酶混合液所测的吸光度。c:加中药和酶的混合液所测的吸光度。D:加中药而未加酶的混合液所测的吸光度。 主要观察指标:?主要结局:检测【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶活性。?次要结局:检测【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶的抑制率。 统计学分析:采用SPSS 10(0由福建中医学院统计学教研室进行数据处理，行组间双侧t检验。 2结果 【白芷香肤保健液】在高、中、低3个浓度对蘑菇酪氨酸酶的活性均有很强的抑制作用。最高抑制率达97(58,。【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用，随药物浸泡时间和浓度的增加而增强。 【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用与对照组比较，差异有显著性意义。(P<0(001)，见表2。 3讨论 黑色素形成机制I 31:在黑色素细胞内，酪氨酸经酪氨酸酶催化形成多巴，多巴去氢后形成多巴醌，后者重新排列成5，6一醌吲哚，其发生聚合后与黑素体内的结构蛋白结合形成黑素蛋白即黑色素。黑色素合成后，从黑色素细胞输送到角阮细胞，并随角阮细胞的成熟而弥散到表皮各层，最后随表皮脱落而消失。因jt-L，酪氨酸酶是皮肤黑色素生物合成的主要限速酶。若要人为地阻止(皮肤)色素的沉着，就应改善色素细胞中酪氨酸酶的代谢，限制酪氨酸向黑色素转化，抑制酪氨酸酶的活性。 现代医学对色素增多性疾病治疗的疗效欠佳、副作用较大和中医药治疗的疗效较好、副作用较小，使得不少学者进行了中药对磨菇酪氨酸酶活性影响的较大规模筛查H，“，并在此基础上开展了以鼠黑素瘤细胞和动物模型的少量实验研究哺，。但总体上单味中药研究多，复方中药研究少。目前的复方研究决大部分限于中医常用于治疗黄褐斑的古方、经典方。如:六味地黄丸、逍遥丸、桃红四物汤、肾气丸、补中益气汤等，研究水平还处于验证疗效阶段。研究发现六味地黄丸中熟地、丹皮使酪氨酸酶活性增高;茯苓、淮山、山茱萸使酪氨酸酶活性降低。泽泻醇提物使酪氨酸酶活性增高;水提物则降低。提示:组方应注意协同作用;提取溶剂的不同也可能造成疗效的差异。 而从表2中可以看出:【白芷香肤保健液】是一种高效的酪氨酸酶抑制剂，在本实验过程中用肉眼即可看见加入【白芷香肤保健液】的反应混合物组颜色快速变浅，统计学处理发现在反应3 min时最为显著，说明其降低黑色素生成的作用很强，因此抑制率高达97(58,。这一结果既从一个角度揭示了【白芷香肤保健液】治疗黄褐斑的机制是:抑制酪氨酸酶的活性;也从另一方面证明了【白芷香肤保健液】组方用药、溶剂选择的合理性。 首先【白芷香肤保健液】的组方是以中医活血、补肾、祛斑、增自理论为治疗大法，以中药现代药理基础为选药原则，充分发挥中药相须、相使的协同配伍，选择既能活血、补肾、祛斑、增白又有降低酪氨酸酶活性的药物如当归、山茱萸、山楂、甘草等组成新的复方;并以历代公认的美白药食两用佳品白醋为溶剂。因为中医认为"1:醋有散瘀，止血、解毒、杀虫的功效。现代研究发现食醋含有多种有机酸(如:醋酸、乳酸、琥珀酸等)、氨基酸、维生素和微量元素等。食醋可以美容护肤，因其所含的醋酸、乳酸、氨基酸、甘油和醛类化合物对人的皮肤有柔和的刺激作用，能使血管扩张，增加皮肤的血液循环，使皮肤光泽;作为溶剂可促进药物的透皮吸收。同时食醋还可抑制体内过氧化脂质产生，延缓衰老。这些特性都与黄褐斑的病因:抗氧化平衡失调;机体微量元素含量异常;血液流变学改变密切相关。 此外，在对【白芷香肤保健液】的相关研究中发现，【白芷香肤保健液】组方药物中含有丰富的微量元素Zn，Mn，Se和多种氨基酸(另文报道)。【白芷香肤保健液】对黄褐斑的治疗作用也与其所含微量元素和多种氨基酸有关。微量元素增强了机体抗氧化能力，调整元素的失衡;而氨基酸改善了皮肤的营养状况，促进新陈代谢，增强黑色素的淡化过程。诸因素的协同功用，使其对影响身心健康的黑色素增多性皮肤病产生了良好的临床疗效。但中药的活性成分很多， 究竟是何种成分在起主导作用，【白芷香肤保健液】是否还有其他的作用机制，这些都有待今后进一步深入研究探讨。 结论:【白芷香肤保健液】是在遵循中医活血、理气、补肾等治则的基础上，并根据黄褐斑是以局部病变为主要表现的特点，选用纯天然中药，制成的局部外用搽剂，使药效直达病所，经多年临床应用，有可靠而满意的疗效。它既弥补了西药疗程长、副作用多的不足;又有临床使用方便、经济、安全、高效的优点。